徐予浛，謝巧玲，張薇，朱梅珍，陳小旋，郭東北，李永忠，郭建榮，李紅衛(wèi)*

（1.廈門大學公共衛(wèi)生學院，福建廈門 361102）（2.小鳥鮮燕錦溢(廈門)健康產業(yè)有限公司，福建廈門 361006）

燕窩（Edible Bird's Nest，EBN）是一種雨燕科金絲燕屬鳥類分泌的唾液與其羽絨混合凝結而成的物質[1]。近年來許多研究證明燕窩具有緩解炎癥[2]、降脂[3]、抗氧化[4]等多種生物活性，且對人體軟骨及關節(jié)軟骨細胞具有保護效果[5,6]。

燕窩中的蛋白質主要以糖蛋白的形式存在[7]，唾液酸（Sialic Acid，SA）是其重要的糖基之一[8]。唾液酸是一類含有9個碳原子并具有吡喃糖結構的酸性氨基糖的總稱，常以α-2,3或α-2,6鍵與半乳糖或N-乙酰葡糖胺連接（圖1），位于酸性N-鏈寡糖的末端，既能作為激素、凝集素、陽離子等分子的結合配體，又能掩蔽細胞或蛋白本身的關鍵識別位點；其結構中C1位的羧基化使其帶有很強的負電性，負電之間的排斥力影響著分子、細胞間的相互作用[9]。一般所說的唾液酸多指N-乙酰神經氨酸（Neu5Ac），其構成比占該家族所有成員的99%以上。唾液酸在自然界廣泛分布，存在于唾液、胃液、血清、尿液、母乳等體液中，或燕窩、牛奶、雞蛋、奶酪等食物中。外源性唾液酸在機體內的消化吸收與利用途徑尚不明確。研究表明大鼠單次口服放射性標記的Neu5Ac后1 h內，90%以上Neu5Ac以原型從尿液中排出[10]，說明絕大多數(shù)唾液酸不經裂解即以完整形態(tài)參與機體代謝，且利用率較低。因此借鑒氮平衡實驗原理，通過監(jiān)測食物中攝入唾液酸、糞尿中排出唾液酸，即可構建機體的“唾液酸平衡”并以此評價外源性唾液酸的消化吸收效率。

圖1 游離Neu5Ac(a)及其通過α-2,3(b)、α-2,6(c)糖苷鍵連接半乳糖的化學結構式Fig.1 Chemical structural formula of free Neu5Ac (a) and its linkage to galactose via α-2,3 (b) or α-2,6 (c) glycosidic bond

圖2 干預期間大鼠體質量變化Fig.2 Body weight alteration in rats during intervention

唾液酸修飾著細胞膜最外層的糖類部分或分泌型的糖蛋白、糖脂與低聚糖等復合糖類的糖鏈末端。生物大分子的唾液酸化通過掩蔽不利的特異性識別、本身作為被識別的受體、實現(xiàn)細胞間信息傳遞等來發(fā)揮不同的功能，包括對紅細胞膜生化性質的改變[11]、抵抗病毒感染[12]、提升學習與記憶能力[13]、調節(jié)血脂[14]、改善骨丟失[15]等。有報道稱紅細胞膜的唾液酸化參與對紅細胞生命周期的調控，新生紅細胞膜表面唾液酸含量明顯高于衰老紅細胞[16]。此外，血漿脂蛋白的唾液酸化程度被認為與動脈粥樣硬化發(fā)展相關[14]。唾液酸化修飾是糖復合物結構和功能多樣化的物質基礎，是其生物學功能發(fā)揮的前提，而食物中的營養(yǎng)物質被吸收后最先經過血液組織，之后才分布于全身，故推測血液唾液酸化狀態(tài)具有代表性，能夠較早反映機體內唾液酸的利用狀況。

蛋白質是燕窩中含量最高的營養(yǎng)成分，達50%以上。然而，機體對燕窩蛋白質的消化與生物利用程度有限。研究顯示，經胃腸消化后燕窩中蛋白質和唾液酸的溶解度僅有47.23%和44.24%[17]。蛋白質形成肽以后極具活性，可不經消化被機體直接吸收，吸收率提高2～2.5倍[18]。目前常采用體外酶解法將燕窩黏蛋白降解為小分子肽類，以期促進其蛋白質吸收。鑒于蛋白質與唾液酸的溶解性呈正相關性[17]，推測肽類也能促進唾液酸等有效成分的生物利用。本研究擬通過動物實驗研究含有燕窩肽的即食燕窩、常規(guī)燉煮燕窩的唾液酸消化、吸收與利用狀況。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

1.1.1 動物

健康成年雄性SPF級SD大鼠32只，體質量200～250 g。購買并飼養(yǎng)于廈門大學實驗動物中心SPF級動物實驗室，實驗動物生產許可證號為SCXK（閩）2018-0003、實驗動物使用許可證號為SYXK（閩）2018-0009。動物倫理審批號XMULAC20210010。在22 ℃溫度、40%～60%濕度下飼養(yǎng)，12 h明暗交替照明。

1.1.2 受試干預物

采用某燕窩生產加工有限公司提供的含肽款即燉燕窩（0.463±0.011 g Neu5Ac/100 g）、常規(guī)款即燉燕窩（0.447±0.019 g Neu5Ac/100 g）分別作為兩種燕窩干預物；Neu5Ac標準品（純度為98% HPLC）作為標準品對照干預物；空白組給予生理鹽水。

1.1.3 試劑

Neu5Ac標準品，Sigma；乙腈、甲醇（均為色譜純），Sigma-Aldrich；冰乙酸，羅恩試劑；磷酸，滬試；聚乙二醇，滬試；硫酸，滬試；氫氧化鈉，滬試；硫酸銨，羅恩試劑；硼酸，滬試；異氟烷，深圳瑞沃德；甲基紅，國藥集團；溴甲酚綠，上海三愛思；PBS-EDTA，海標科技。

1.2 儀器與設備

安捷倫高效液相色譜儀，Agilent 1200；Hypersil?SAX LC色譜柱，Thermo Scientific；Varioskan Flash酶標儀，美國Thermo；VCX-150PB超聲粉碎儀，美國Sonics；FRESCO17小型臺氏高速冷凍離心機、JXFSTPRP-CL全自動樣品冷凍研磨儀、大鼠代謝籠，廈門吉卡。

1.3 動物分組與處理

SD大鼠適應性喂養(yǎng)1 w后，隨機分為空白對照組（Blank Control，BC）、含肽燕窩組（Peptide-Containing Edible Bird's Nest，PB）、常規(guī)燕窩組（Traditionaledible Bird's Nest，TB）、唾液酸標準品組（SA Standard Control，SC），每組8只。使用相應干預物按動物體質量1%灌胃干預（比例為質量分數(shù)）。動物干預如表1所示。動物處理分為唾液酸代謝實驗和60 d連續(xù)干預實驗。

表1 實驗動物分組及處理Table 1 Grouping and treatment of rats

表2 干預期間大鼠體質量變化Table 2 Body weight alteration in rats during intervention (±s, n=8, g)

表2 干預期間大鼠體質量變化Table 2 Body weight alteration in rats during intervention (±s, n=8, g)

注：同列右肩相同上標字母表示沒有顯著差異（P＞0.05）；BC為空白對照組，PB為含肽燕窩組，TB為常規(guī)燕窩組，SC為唾液酸標準品組。

Group 0 wk 1 wk 2 wk 3 wk 4 wk BC 250.12±42.4a 294.15±35.24a325.34±35.26a340.18±30.64a454.21±27.24a PB 235.96±6.74a 292.47±10.16a322.89±11.65a332.33±17.36a450.31±46.85a TB 225.28±9.34a 287.03±7.91a 316.31±14.64a323.51±13.3a 439.6±21.92a SC 227.24±9.31a 287.03±14.02a318.85±20.2a 331.18±16.27a452.78±32.84a Group 5 wk 6 wk 7 wk 8 wk 9 wk BC 457.41±35.48a 481.52±39.4a 485.85±37.12a487.77±47.61a508.15±36.89a PB 459.56±49.68a 479.83±47.82a484.17±53.56a501.27±39.87a513.19±37.55a TB 434.24±22.82a 463.23±30.95a470.04±32.75a464.91±36.33a487.62±40.99a SC 450.63±30.87a 483.76±35.5a 490.43±36.16a481.19±46.38a486.06±58.91a

表3 大鼠唾液酸攝入、吸收與儲留量Table 3 Intake, absorption, and retention of sialic acid(±s, n=8, mg/2 d)

表3 大鼠唾液酸攝入、吸收與儲留量Table 3 Intake, absorption, and retention of sialic acid(±s, n=8, mg/2 d)

Group Intake Absorption Retention BC 0±0 -0.39±0.96 -0.85±2.85 PB 45.97±0.13 41.96±7.40 36.18±10.98 TB 45.18±0.19 43.72±1.34 35.92±5.41 SC 45.79±0.19 43.19±1.12 36.88±4.41

表4 唾液酸消化、吸收率Table 4 Digestion and absorption of sialic acid (±s, n=8, wt%)

表4 唾液酸消化、吸收率Table 4 Digestion and absorption of sialic acid (±s, n=8, wt%)

注：同列右肩相同上標字母表示沒有顯著差異（P＞0.05）；PB為含肽燕窩組，TB為常規(guī)燕窩組，SC為唾液酸標準品組。

Group Apparent digestibility True digestibilityProtein Biological ValueNet Protein Utilization PB 91.26±16.09a 91.26±16.09a 86.03±19.56a 78.67±23.89a TB 97.51±3.86a 98.28±3.03a 82.56±11.24a 81.30±12.24a SC 98.65±2.56a 98.65±2.56a 85.54±11.44a 84.23±10.07a

1.3.1 唾液酸代謝實驗

參照“食物蛋白質營養(yǎng)學評價”的氮平衡實驗方法[19]，將大鼠單只喂養(yǎng)于代謝籠中，每日記錄唾液酸干預總量，收集期間的全部糞便與尿液，并檢測總唾液酸量，計算大鼠唾液酸吸收與儲留量，評價唾液酸的消化、吸收程度。此部分實驗設計為三階段：（I）無氮無唾液酸飼料（廈門普寧生物）+無受試物；（II）無氮無唾液酸飼料+受試物；（III）普通有氮飼料（北京維通利華）+受試物。I階段保證動物無任何外源性唾液酸攝入，從而確定內源性糞、尿代謝唾液酸；II、III階段唾液酸的來源為內源性與受試物來源唾液酸；III階段氮絕大部分來源于有氮飼料，小部分來自于內源代謝氮或燕窩中蛋白質，通過階段間物質含量差值來考察消化吸收狀況[19]。每階段安排2 d作為飲食適應期，2 d作為正式實驗期；各階段之間至少安排3 d作為洗脫期。

1.3.2 60 d連續(xù)干預實驗

連續(xù)60 d使用相應干預物按動物體質量1%灌胃干預。從0 d開始每隔10 d對大鼠進行一次麻醉與頸靜脈采血，直至60 d結束時最后一次采血并處死。

1.4 觀察指標

1.4.1 體質量

連續(xù)干預期間，從0 d起每周記錄一次體質量直至60 d結束。

1.4.2 唾液酸攝入、吸收與儲存量

糞便處理：唾液酸代謝實驗所收集的全部糞便烘干并記錄總質量，研磨成均勻的粉末取0.5～5 g用超純水定容至5 mL，加等體積冰乙酸于100 ℃水浴中水解10 min后取出并冷卻至室溫。水解液經濾紙過濾后，用流動相定容至100 mL，取上清液用0.45 μm針筒式過濾器過濾，待測。

尿液處理：全部尿液以φ=0.1%硫酸溶液稀釋至50 mL，準確吸取2 mL至比色管，加等體積冰乙酸于100 ℃水浴中水解10 min并冷卻至室溫。將水解液經濾紙過濾后用流動相定容至100 mL，取上清液用0.45 μm針筒式過濾器過濾，待測。

式中：

A——吸收總量，mg/d；

R——儲留總量，mg/d；

I——攝入唾液酸總量，mg/d；

F——糞唾液酸，mg/d；

FE——糞內源唾液酸，mg/d；

U——尿唾液酸，mg/d；

UE——尿內源唾液酸，mg/d。

1.4.3 唾液酸消化率、吸收率與凈利用率

根據(jù)吸收量與儲留量，計算唾液酸消化、吸收與利用率。

式中：

A——吸收總量，mg/d；

R——儲留總量，mg/d；

I——攝入唾液酸總量，mg/d；

F——糞唾液酸，mg/d；

FE——糞內源唾液酸，mg/d；

AD——表觀消化率，wt%；

TD——真消化率，wt%；

BV——生物價，wt%；

NUR——凈利用率，wt%。

1.4.4 血漿唾液酸含量、紅細胞膜唾液酸含量

血液4 000 r/min，10 min離心，上層血漿用于檢測血漿游離唾液酸濃度、血漿蛋白結合唾液酸含量，下層紅細胞用于檢測紅細胞膜結合唾液酸含量。

血漿游離唾液酸[20,21]：取100 μL血漿，加入900 μL流動相（乙腈-0.1%磷酸水溶液60:40，體積比）稀釋至1 mL，用0.45 μm針筒式過濾器過濾，待測。

血漿結合唾液酸[20,21]：取100 μL血漿，加入400 μL飽和硫酸銨溶液4 ℃存放8 h沉淀蛋白。15 000 r/min離心15 min，吸取上清，并加入0.2 mol/L稀硫酸1 mL于80 ℃水浴鍋中水解120 min，冷卻后用0.45 μm針筒式過濾器過濾水解液，待測。

紅細胞膜結合唾液酸：0.25 mol/L PBS-EDTA緩沖液（4 ℃預冷，pH值7.6）溶脹紅細胞提取紅細胞膜，超聲粉碎機制成均勻紅細胞膜液，蛋白定量試劑盒定量膜蛋白；取600 μL膜液加入1 000 μL、0.05 mol/L稀硫酸，于80 ℃水解120 min，冷卻后用0.45 μm針筒式過濾器過濾水解液，待測。

1.5 唾液酸檢測方法

使用高效液相色譜（HPLC）測定樣品中唾液酸含量[22]。參數(shù)：色譜柱：300SCX陽離子交換色譜柱，4.6 mm×250 mm，粒徑5 μm；流動相：乙腈-0.1%磷酸水溶液（60:40，體積比）；柱溫：30 ℃；流速：1.0 mL/min；進樣量：10 μL；檢測波長：205 nm；檢出限：0.003 g/kg。

1.6 數(shù)據(jù)分析

2 結果與分析

2.1 體質量

干預開始前（0 wk）大鼠體質量236.02 g，各組無統(tǒng)計學差異（F=1.96，P＞0.05）。60 d的干預期間，各組大鼠間的體質量始終保持相近（P＞0.05）。重復測量方差分析中，體質量不滿足球形分布假設（χ2=531.49，P＜0.001）。采用Greenhouse & Geisser方法校正后的結果表明，隨干預時間推移，大鼠體質量顯著增長，60 d時整體水平已增長至498.83 g，干預與時間的交互作用無統(tǒng)計學意義（F=0.48，P＞0.05），各組在0～60 d內體質量增長趨勢基本一致。

2.2 唾液酸消化、吸收率

鑒于絕大多數(shù)唾液酸均以原型形態(tài)參與腸內吸收或隨糞尿排出[10]，參考氮平衡實驗模式，本研究建立“唾液酸平衡”評價不同類型燕窩唾液酸的消化、吸收情況。結果如圖3所示，在兩日的代謝監(jiān)測期內，由于各組動物體質量、受試物折合唾液酸含量均不同，各組唾液酸攝入量略有差異，BC組無外源性唾液酸攝入。根據(jù)糞尿中唾液酸量對吸收與儲留唾液酸量進行推算，計算與分析結果顯示，PB組的唾液酸攝入、吸收、儲留量依次為每兩日45.97、41.96、36.18 mg，TB組依次為每兩日45.18、43.72、35.92 mg，SC組依次為每兩日45.79、43.19、36.88 mg，不同干預組的唾液酸吸收與儲留量雖數(shù)值上有所差異，但無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。

圖3 大鼠唾液酸攝入、吸收與儲留量Fig.3 Intake, absorption, and retention of sialic acid

圖4所示為各干預組唾液酸的表觀及真消化率、生物價、凈利用率。由于尚未檢出大鼠存在內源性的糞代謝唾液酸（TB組檢出少量），故目前實驗結果表明唾液酸在機體內的表觀消化率與真消化率相近。各干預組表觀消化率（F=1.05，P＞0.05）、生物價（F=1.34，P＞0.05）、凈利用率（F=0.22，P＞0.05）差異均無統(tǒng)計學意義。故尚未從本研究所構建的“唾液酸平衡”中觀察到唾液酸標準品、含肽燕窩、常規(guī)燕窩中唾液酸的消化率、生物價或凈利用率存在明顯不同。推測原因有以下兩點：一為該平衡實驗為短期干預，短時間內外源唾液酸難以實現(xiàn)體內的駐留；二為該方法精確度低，不適用于評價唾液酸此類含量較低生物活性物質的消化吸收。

圖4 不同干預物中唾液酸的消化、吸收率Fig.4 Digestibility and absorption of sialic acid in different interventions (n=8)

圖5 各組血漿游離唾液酸濃度變化Fig.5 The concentration of free sialic acid in the plasma in each group

圖6 各組血漿蛋白結合唾液酸含量變化Fig.6 The content of protein-bound sialic acid in the plasma in each group

圖7 各組紅細胞膜結合唾液酸含量變化Fig.7 The content of erythrocyte membrane-bound sialic acid in each group

2.3 血漿游離唾液酸濃度變化

實驗進一步通過血液指標考察唾液酸的利用情況。干預期間血漿游離唾液酸濃度的變化如表5所示。血液是外源性唾液酸進入人體被吸收、分布和消除的必經之路，紅細胞生命周期短且更新代謝快，可更早、更直接反映外源性唾液酸對機體的影響[23-25]。在長期連續(xù)灌胃實驗中，除BC組以外，各干預組的血漿游離唾液酸、蛋白結合唾液酸與紅細胞結合唾液酸含量均顯著升高，因此通過監(jiān)測血液中唾液酸含量變化來評估外源唾液酸的利用程度是可行的。

表5 各組血漿游離唾液酸濃度變化Table 5 The change in plasma free sialic acid concentration during the intervention (±s, n=8, g/L)

表5 各組血漿游離唾液酸濃度變化Table 5 The change in plasma free sialic acid concentration during the intervention (±s, n=8, g/L)

注：同列右肩完全不同上標字母表示具有顯著差異（P＜0.05），按均值大小按照a、b、c、d以此類推進行標記；BC為空白對照組，PB為含肽燕窩組，TB為常規(guī)燕窩組，SC為唾液酸標準品組。

Group 0 d 10 d 20 d 30 d 40 d 50 d 60 d BC 0.30±0.07a10.22±0.05b 0.36±0.03b0.32±0.08b0.31±0.09b0.33±0.03c 0.31±0.08c PB 0.33±0.08a0.30±0.04a 0.40±0.01a0.39±0.07a0.41±0.11a0.44±0.05b 0.55±0.06ab TB 0.33±0.06a0.29±0.03a 0.38±0.04ab0.39±0.04a0.37±0.08ab0.47±0.02ab 0.45±0.17b SC 0.29±0.11a0.31±0.04a 0.40±0.03a0.35±0.05ab0.35±0.05ab0.48±0.04a 0.62±0.08a

干預前大鼠血漿游離唾液酸濃度整體水平為0.31 g/L，經60 d干預后，干預組濃度比BC組提高了約45.16%～100.00%。對大鼠血清游離唾液酸濃度進行重復測量方差分析，數(shù)據(jù)不符合球形分布假設（χ2=94.41，P＜0.001）。Greenhouse-Geisser的檢驗結果顯示，時間與不同干預物的交互效應顯著（F=10.04，P＜0.001）。簡單效應分析結果顯示，實驗初始（0 d）時，干預受試物的簡單效應無統(tǒng)計學意義（F=1.21，P＞0.05）；自給予受試物干預10 d開始至60 d干預結束，絕大多數(shù)時間點的干預受試物的簡單效應具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），在40 d時干預物簡單效應無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。多重比較發(fā)現(xiàn)，此期間（10～60 d）PB組濃度始終高于BC組（P＜0.05）；SC組在50～60 d時間點的血漿游離唾液酸濃度超過兩組燕窩干預組（P＜0.05）。在干預10 d時PB組、TB組和SC組的血漿游離唾液酸濃度均比初始含量有所提高（P＜0.05），并持續(xù)升高。時間的簡單效應在各干預組都具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），但并非持續(xù)升高，不同干預組均在某些時間點血漿游離唾液酸濃度達到高峰，并開始回落，可能是頻繁采血造成的貧血所致。

2.4 血漿蛋白結合唾液酸含量變化

唾液酸的修飾對象包括血漿脂蛋白、血液中多種蛋白因子、細胞表面蛋白和糖脂分子等。干預期間大鼠血漿蛋白結合唾液酸含量如表6所示，干預前大鼠血漿蛋白結合唾液酸含量整體水平為2.14 g/L，經60 d干預后，干預組濃度比BC組提高了約28.32%～56.99%。結合本章2.3的結果可見，游離唾液酸濃度上升幅度小，血漿蛋白結合唾液酸則相對穩(wěn)定上升。游離唾液酸在體內滯留時間短，可能被快速排出體外，或進一步被唾液酸轉移酶修飾于大分子表面，從而轉為結合形態(tài)間接被機體利用。血漿中蛋白結合唾液酸含量是游離唾液酸的10倍左右，是極具觀測意義的指標。

表6 各組血漿蛋白結合唾液酸含量變化Table 6 The change in plasma protein-bound sialic acid content during the intervention (±s, n=8, g/L)

表6 各組血漿蛋白結合唾液酸含量變化Table 6 The change in plasma protein-bound sialic acid content during the intervention (±s, n=8, g/L)

注：同列右肩完全不同上標字母表示具有顯著差異（P＜0.05），按均值大小按照a、b、c、d以此類推進行標記；BC為空白對照組，PB為含肽燕窩組，TB為常規(guī)燕窩組，SC為唾液酸標準品組。

Group 0 d 10 d 20 d 30 d 40 d 50 d 60 d BC 2.16±0.59a1 2.06±0.27b 2.41±0.56a2.42±0.16b2.92±0.09c3.02±0.18c 2.79±0.33c PB 2.13±0.59a 2.73±0.48a 2.82±0.01a3.08±0.24a3.86±0.33a4.31±0.40a 4.09±0.29a TB 2.15±0.47a 2.34±0.32b 2.33±0.77a2.56±0.42b3.37±0.48b4.15±0.46ab 3.58±0.53b SC 2.11±0.46a 2.55±0.23ab 2.54±0.96a2.68±0.28b3.36±0.46b3.91±0.40b 4.38±0.28a

表7 干預期間各組紅細胞膜結合唾液酸含量變化Table 7 The change in erythrocyte membrane-bound sialic acid content during the intervention (±s, n=8, mg/mg pro)

表7 干預期間各組紅細胞膜結合唾液酸含量變化Table 7 The change in erythrocyte membrane-bound sialic acid content during the intervention (±s, n=8, mg/mg pro)

注：同列右肩完全不同上標字母表示具有顯著差異（P＜0.05），按均值大小按照a、b、c、d以此類推進行標記；BC為空白對照組，PB為含肽燕窩組，TB為常規(guī)燕窩組，SC為唾液酸標準品組。

Group 0 d 10 d 20 d 30 d 40 d 50 d 60 d BC 0.28±0.14a1 0.18±0.05d 0.29±0.12b0.34±0.04b0.29±0.12b0.29±0.03c 0.43±0.06b PB 0.25±0.02a 0.41±0.03a 0.47±0.01a0.48±0.03a0.59±0.25a0.54±0.06a 0.60 ±0.01a TB 0.21±0.03a 0.32±0.02c 0.41±0.07a0.46±0.10a0.48±0.08a0.51±0.02a 0.59±0.13a SC 0.27±0.04a 0.36±0.01b 0.41±0.08ab0.43±0.04a0.46±0.06a0.43±0.04b 0.59±0.08a

對大鼠血漿蛋白結合唾液酸含量進行重復測量方差分析，數(shù)據(jù)不符合球形分布假設（χ2=107.88，P＜0.001）。Greenhouse-Geisser的檢驗結果顯示，時間與不同干預物的交互效應顯著（F=12.29，P＜0.001）。簡單效應分析結果顯示，在干預10 d以及30 d往后的所有時間點，干預物的簡單效應均存在統(tǒng)計學意義（P＜0.005）。多重比較發(fā)現(xiàn)，PB、SC組大鼠的血漿蛋白結合唾液酸含量較早高于了BC組，在10 d時PB組蛋白結合唾液酸含量已較BC組提高約32.52%（P＜0.05），TB組在40 d時方較BC組提高27.74%；給予干預10 d起PB組的含量最先高于TB組與SC組（P＜0.05）；在干預后期，各干預組的血漿蛋白結合唾液酸含量逐漸趨于一致，在60 d時干預組整體水品達到4.02 g/L，顯著高于此時的BC組2.79 g/L。時間的簡單效應在各干預組都具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），30 d及往后時間點血漿蛋白結合唾液酸含量均高于0 d時的初始含量。目前研究已發(fā)現(xiàn)血漿載脂蛋白A-II、B-48、B-100、C-II、C-III、D、E、J均存在唾液酸化修飾[26-28]；高密度脂蛋白和低密度脂蛋白的去唾液酸化與動脈粥樣硬化、2型糖尿病的發(fā)生有顯著相關性[29-31]，蛋白表面唾液酸的修飾水平影響著機體的健康狀況。

2.5 紅細胞膜結合唾液酸含量變化

干預前大鼠紅細胞膜結合唾液酸含量整體水平為0.25 mg/mg prot，經60 d干預后，干預組濃度比BC組提高了約37.21%。唾液酸被認為能夠影響紅細胞的形態(tài)、攜氧能力、膜變形性、氧合能力，甚至血紅蛋白（Hb）分子的結構和分布[32-34,16]。有報道稱酶法去除紅細胞膜表面部分唾液酸后，紅細胞聚集程度增加，且生化特性與細胞存活時間都受到影響。紅細胞的抗聚集能力主要源于其自身的電負性，而紅細胞90%的負電荷均為唾液酸所提供[35]。因此，紅細胞表面唾液酸的準確表達對生理和病理過程至關重要[36]。

對大鼠紅細胞膜結合唾液酸含量進行重復測量方差分析，數(shù)據(jù)不符合球形分布假設（χ2=95.34，P＜0.001）。Greenhouse-Geisser的檢驗結果顯示，時間與不同干預物的交互效應顯著（F=5.30，P＜0.001）。簡單效應分析結果顯示，從給予受試物干預10 d開始至60 d干預結束，受試物的簡單效應始終具有統(tǒng)計學意義（P＜0.005）。多重比較發(fā)現(xiàn)，10～60 d各干預組紅細胞膜結合唾液酸含量均高于BC組（P＜0.05）；干預組中的PB組含量均值高于其他組，在10 d時與TB組、SC組差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；SC組的紅細胞膜結合唾液酸含量在10 d、50 d這些時間點上都顯著低于PB組與TB組（P＜0.05）。PB組、TB組和SC組的紅細胞膜結合唾液酸含量值均在干預10 d時與初始含量出現(xiàn)顯著差異（P＜0.05），并持續(xù)升高，干預結束時干預組整體水平達到0.59 mg/mg prot，顯著高于BC組的0.43 mg/mg prot。

結合2.4、2.5的結果，可認為在長期唾液酸負荷下，血液中蛋白與紅細胞的唾液酸化程度能夠顯著提高。時間效應，即受試物長期干預所提供唾液酸的累積，是最主要的效應。50～60 d血液唾液酸含量下降，可能是頻繁采血致貧血的影響，而40～50 d期間血液唾液酸指標基本達到高峰，建議該方法評價實驗以40～50 d為宜。

蛋白質被吸收前，需在體內消化酶的作用下依次分解為多肽、寡肽、游離氨基酸。除游離氨基酸外，寡肽也被證實能在腸道直接吸收[37]，并參與機體組織蛋白的再生與合成[38,39]。寡肽被認為能夠起載體作用，將食物中的營養(yǎng)物質運載輸送到機體各細胞、組織與器官，促進其他營養(yǎng)成分的吸收。本次受試燕窩的蛋白質消化、吸收率未觀察到明顯差異，故文中不予贅述。但長期干預過程中，含肽的PB組血漿蛋白結合唾液酸、紅細胞膜結合唾液酸含量較早出現(xiàn)升高現(xiàn)象，在多個時間點均高于TB、SC組。因此推測燕窩肽可能有利于唾液酸分子穿過腸道粘膜細胞，或促進燕窩中唾液酸的利用，在機體內更早實現(xiàn)高水平的唾液酸化。

在干預60 d時TB組的血漿蛋白結合唾液酸、紅細胞膜唾液酸含量已與PB組接近，說明在保證長期攝入的前提下，各類燕窩產品均能起到提高機體唾液酸化程度的作用，無論是否加入燕窩肽類物質。且在一定時刻，機體唾液酸化水平會達到某種飽和狀態(tài)，推測機體本身可能存在唾液酸的平衡機制，唾液酸化修飾存在飽和狀態(tài)。因此外源性唾液酸的補充應遵循長期且適量的原則。

3 結論

燕窩的攝入提高了機體血液中唾液酸的含量，燕窩中唾液酸的體內利用程度可具體體現(xiàn)在血漿游離唾液酸濃度、蛋白結合唾液酸含量、紅細胞膜唾液酸含量等指標上。燕窩中的肽類物質能夠促進唾液酸的利用，有助于外源性唾液酸在各類蛋白、紅細胞表面的修飾，可幫助機體在早期實現(xiàn)唾液酸化水平的突破。各類燕窩經30 d以上連續(xù)食用均能提高機體唾液酸化水平，且比攝入游離唾液酸更早出現(xiàn)效果。