潤燥靈對干燥綜合征患者外周血單個核細(xì)胞白細(xì)胞介素-17調(diào)控作用研究

胡小鈺　羅澤紅　黃芳琴　曾蘋　馬武開

【摘 要】目的：探討解毒化瘀藥潤燥靈對干燥綜合征患者外周血單個核細(xì)胞（PBMCs）白細(xì)胞介素-17（IL-17）的調(diào)控作用。方法：選取符合診斷標(biāo)準(zhǔn)的干燥綜合征患者30例，抽取靜脈血20 mL，分離提取PBMCs，加入10 ng·mL-1的白細(xì)胞介素-1β（IL-1β）、10 ng·mL-1的IL-6、1 ng·mL-1的轉(zhuǎn)化生長因子-β（TGF-β）、1 ng·mL-1的腫瘤壞死因子-α誘導(dǎo)CD4+ T細(xì)胞分化成Th17細(xì)胞。將細(xì)胞分為空白對照組，IL-17刺激組，IL-17抑制組和潤燥靈高、中、低劑量組。采用CCK-8檢測潤燥靈對干燥綜合征患者Th17細(xì)胞的抑制率；ELISA法檢測IL-17A、IL-17F、IL-23、TGF-β的分泌，qRT-PCR檢測IL-17A、IL-17F mRNA的表達(dá)水平。結(jié)果：CCK-8檢測結(jié)果顯示，經(jīng)潤燥靈處理24 h、48 h后，Th17細(xì)胞增殖能力下降。ELISA法檢測結(jié)果顯示，與IL-17刺激組比較，IL-17抑制組及潤燥靈高、中劑量組IL-17A、IL-17F、IL-23濃度明顯下降，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P < 0.05）。RT-PCR檢測結(jié)果示，與IL-17刺激組比較，IL-17抑制組和潤燥靈各劑量組IL-17A、IL-17F mRNA表達(dá)量顯著下調(diào)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P < 0.05）。結(jié)論：中藥潤燥靈能夠抑制IL-17A、IL-17F、IL-23的分泌，增加TGF-β抑炎因子的分泌，從而抑制Th17細(xì)胞炎癥反應(yīng)。

【關(guān)鍵詞】 干燥綜合征；潤燥靈；解毒化瘀藥；CD4+ T細(xì)胞；Th17細(xì)胞；白細(xì)胞介素-17On the Regulatory Effect of Runzaoling（潤燥靈）on Interleukin-17 in Peripheral Blood Mononuclear

Cells of Patients with Sj?gren's Syndrome

HU Xiao-yu，LUO Ze-hong，HUANG Fang-qin，ZENG Ping，MA Wu-kai

【ABSTRACT】Objective：To explore the regulatory effect of the detoxifying and stasis-resolving

drug Runzaoling（潤燥靈）on interleukin-17（IL-17）in peripheral blood mononuclear cells（PBMCs）

of patients with Sj?gren's syndrome.Methods：Thirty patients with Sj?gren's syndrome who met the diagnostic criteria were selected.20 mL of venous blood was drawn，from which PBMCs were separated and extracted.IL-1β

（10 ng·mL-1），IL-6（10 ng·mL-1），TGF-β（1 ng·mL-1）and tumor necrosis factor-α（1 ng·mL-1）were added to induce CD4+ T cells to differentiate into Th17 cells.The cells were divided into a blank control group，the

IL-17 stimulation group，the IL-17 inhibition group，and the high，medium，and low dose groups of Runzaoling.CCK-8

was used to detect the inhibitory rate of Runzaoling on Th17 cells in patients with Sj?gren's syndrome;ELISA was used for the detection of the secretion of IL-17A，IL-17F，IL-23 and TGF-β;and qRT-PCRwas used to detect the expression level of IL-17A and IL-17F mRNA.Results：

CCK-8 results showed that after being treated with Runzaoling for 24 and 48 hours，the proliferation ability of Th17 cells decreased.The ELISA results showed that compared with the IL-17 stimulation group，the concentrations of IL-17A，

IL-17F，and IL-23 in the IL-17 inhibition group and the high and medium dose groups of Runzaoling decreased significantly，with a statistically significant difference（P < 0.05）.The RT-qPCR detection results showed that compared with the IL-17 stimulation group，the expression of IL-17A and IL-17F mRNA in the IL-17 inhibition group and each dose group of Runzaoling significantly down-regulated，with a statistically significant difference（P < 0.05）.Conclusion：Chinese medicine Runzaoling can inhibit the secretion of IL-17A，IL-17F，and IL-23，and increase the secretion of anti-inflammatory factors TGF-β，to inhibit the inflammatory response of Th17 cells.

【Keywords】 Sj?gren's syndrome;Runzaoling（潤燥靈）;detoxifying and blood stasis resolving drug;

CD4+ T cell;Th17 cell;interleukin-17

干燥綜合征（Sj?gren's syndrome，SS）是一種以淋巴細(xì)胞增殖和進(jìn)行性外分泌腺損傷為特征的慢性炎癥性自身免疫性疾病。SS主要侵犯淚腺、唾液腺等外分泌腺，并可累及多系統(tǒng)［1］。SS全球患病率為0.05%～1%，我國為0.33%～0.77%，主要見于45～55歲女性，男女比例約為1∶9［2］。SS的發(fā)病機(jī)制尚不完全清楚。輔助性T細(xì)胞17（Th17）是一種新發(fā)現(xiàn)的CD4+ T細(xì)胞亞群，通過分泌白細(xì)胞介素（IL）-17A、IL-17F、IL-6、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）等細(xì)胞因子，在自身免疫性疾病、腫瘤、慢性炎癥等疾病過程中發(fā)揮重要作用［3］。Th17細(xì)胞和調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（Treg）在SS發(fā)生、發(fā)展過程中起著重要作用［3］。Th17細(xì)胞以分泌IL-17A和IL-17F為主，并通過調(diào)節(jié)Th1介導(dǎo)炎癥反應(yīng)。Th17細(xì)胞不僅參與SS的發(fā)生、發(fā)展，而且與病情活動呈正相關(guān)。其中，IL-17A和IL-17F是該家族中最具特色的細(xì)胞因子。一旦IL-17A和IL-17F被激活，就會觸發(fā)強(qiáng)烈的炎癥反應(yīng)，誘導(dǎo)潛在的促炎細(xì)胞因子產(chǎn)生，從而促進(jìn)炎癥反應(yīng)和中性粒細(xì)胞的增殖、成熟和積聚，介導(dǎo)SS唾液腺炎癥反應(yīng)和組織損傷［4］。

中醫(yī)學(xué)無SS的具體病名記載，根據(jù)SS的臨床表現(xiàn)，大多數(shù)醫(yī)家將其歸為“燥痹”“燥毒”等范疇，其病機(jī)為“陰虛為本，燥熱為標(biāo)”，久病則燥熱入血，灼血成毒、成瘀，虛、瘀、毒相互交結(jié)，虛實夾雜，纏綿難愈。潤燥靈方是課題組長期用于治療SS的有效經(jīng)驗方。前期實驗研究證實，潤燥靈方不僅能增加SS小鼠頜下腺指數(shù)及飲水量，改善模型小鼠頜下腺淋巴細(xì)胞浸潤等病理改變，而且能夠下調(diào)SS模型小鼠血清Th1/Th2和IL-17水平，調(diào)節(jié)Th17/Treg細(xì)胞平衡［5-6］。臨床研究顯示，潤燥靈在改善SS患者臨床癥狀、降低炎性指標(biāo)等方面也具有一定優(yōu)勢［7-8］。故本課題在前期臨床和實驗研究的基礎(chǔ)上，進(jìn)一步觀察解毒化瘀藥潤燥靈對SS患者IL-17的調(diào)控作用，進(jìn)一步探討潤燥靈治療SS的作用機(jī)制和潛在治療靶點。

1 臨床資料與實驗材料

1.1 一般資料 選取2020年11月至2021年12月

在貴州中醫(yī)藥大學(xué)第二附屬醫(yī)院就診的門診及住院SS患者30例，其中男6例，女24例；年齡18～75歲，平均（52.53±11.74）歲。

1.2 診斷標(biāo)準(zhǔn) 按照2016年美國風(fēng)濕病學(xué)會（ACR）/歐洲抗風(fēng)濕病聯(lián)盟（EULAR）制定的原發(fā)性SS分類標(biāo)準(zhǔn)［2］。

1.3 納入標(biāo)準(zhǔn) ①符合上述診斷標(biāo)準(zhǔn)；②年齡18～75歲；③患者自愿并簽署知情同意書。

1.4 排除標(biāo)準(zhǔn) ①合并類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、系統(tǒng)性紅斑狼瘡等其他風(fēng)濕病者；②妊娠期或哺乳期婦女；③伴有精神性疾病者；④合并心腦血管、糖尿病、呼吸系統(tǒng)、造血系統(tǒng)、腫瘤等疾病者；⑤肝腎功能損害者；⑥入組前3個月應(yīng)用糖皮質(zhì)激素或其他免疫制劑者。

1.5 藥 物 潤燥靈顆粒來源于貴州中醫(yī)藥大學(xué)第二附屬醫(yī)院藥劑科，藥物組成有腫節(jié)風(fēng)、山銀花、六月雪、赤芍、三七、黃精、玄參等。稱取12 g潤燥靈顆粒，溶解于20 mL含0.5%DMSO的DMEM培養(yǎng)基中，30 μm過濾器除去雜質(zhì)，0.45 μm過濾器和0.22 μm過濾器過濾除菌，即為潤燥靈母液，置于4 ℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

1.6 主要試劑和儀器 CCK-8（李記生物，批號LCA2001）；Anti-Human CD28和CD3（聯(lián)科生物，批號AH028、AH003）；IL-1β、IL-6、TNF-β和TNF-α（Genscript，批號ZO2922-10、ZO3034-10、ZO3411-10、ZO1001-10）；人IL-17A、IL-17F、IL-23和TGF-β ELISA試劑盒（聯(lián)科生物，批號EK117/2-02、EK1196-01、EK123-03、EK981-01）；RNA提取試劑盒（天漠生物，批號TR121-50）。實時熒光定量PCR儀（美國Thermo，型號7500）；精密恒溫培養(yǎng)箱（上海一恒，型號BPH-9042）；超凈工作臺（蘇州蘇潔凈化設(shè)備有限公司，型號SJ-CJ-2D）；-80 ℃冰箱（中科美菱，型號DW-HL388）；電子分析天平（舜宇恒平科學(xué)儀器有限公司，型號FA2004）；倒置熒光顯微鏡（奧林巴斯，型號IX71）。

2 實驗方法

2.1 外周血單個核細(xì)胞（PBMCs）的提取 采用肝素抗凝真空采血管抽取靜脈血20 mL，轉(zhuǎn)移至50 mL離心管；加入Ficoll淋巴細(xì)胞分離液，置于離心機(jī)以2000 r·min-1離心25 min，離心半徑10 cm；汲取白色絮狀層即PBMCs，用RPMI 1640培養(yǎng)基（含10% FBS）重懸細(xì)胞，活細(xì)胞計數(shù)，置恒溫細(xì)胞培養(yǎng)箱。

2.2 誘導(dǎo)分化Th17細(xì)胞 培養(yǎng)皿中加入含5 μg·mL-1的Anti-Human CD28和Anti-Human CD3的PBS溶液，4℃包被24 h；并將分離獲得的PBMCs加入預(yù)先包被的培養(yǎng)皿中，加入10 ng·mL-1的IL-1β、10 ng·mL的IL-6、1 ng·mL-1的TGF-β、1 ng·mL-1的TNF-α誘導(dǎo)分化Th17細(xì)胞72 h，采用流式細(xì)胞儀進(jìn)行鑒定［9］。

2.3 CCK-8檢測潤燥靈對Th17細(xì)胞活性的影響 將Th17細(xì)胞接種于96孔板，每孔100 μL；將潤燥靈濃度設(shè)為0.1，0.5，1，1.5，2.5，5，10 mg·mL-1（根據(jù)潤燥靈的CCK-8檢測計算出IC50值確定給藥劑量）。每組3個復(fù)孔，同時設(shè)空白孔（含培養(yǎng)基、CCK-8溶液，不含細(xì)胞、藥物），對照孔（含培養(yǎng)基、細(xì)胞、CCK-8溶液，不含藥物）。放置于37 ℃、體積分?jǐn)?shù)為5%的CO2恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h和48 h后，加入10 μL CCK-8溶液，孵育4 h，終止培養(yǎng)，采用酶聯(lián)免疫吸附測定法（ELISA法）檢測OD 450 nm吸光值。

2.4 細(xì)胞分組及藥物干預(yù) 調(diào)整細(xì)胞懸液濃度為2×106·mL-1，將懸浮生長的Th17細(xì)胞接種在6孔板，根據(jù)2.3中結(jié)果，篩選出潤燥靈的給藥濃度，將細(xì)胞分為6組，分別為空白對照組，IL-17刺激組，IL-17抑制組，潤燥靈高、中、低劑量組。空白對照組加等體積PBS液，IL-17刺激組加2.5 μmmol·L-1的SR 0987，IL-17抑制組加入1 μmmol·L-1的GSK 2981278，潤燥靈高、中、低劑量組分別加入2.5，1.5，1 mg·mL-1潤燥靈溶液。置于37 ℃、體積分?jǐn)?shù)為5%的CO2恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h。

2.5 ELISA法檢測IL-17A、IL-17F、IL-23和TGF-β含量 按試劑盒說明書對IL-17A、IL-17F、IL-23和TGF-β的含量進(jìn)行檢測。將標(biāo)準(zhǔn)品稀釋為7個不同濃度梯度的標(biāo)準(zhǔn)品溶液，每孔加入

50 μL稀釋的檢測抗體。300 r·min-1振蕩，室溫孵育2 h，倒去液體，洗板6次。每孔加入100 μL辣根過氧化物酶標(biāo)記的鏈霉親和素，300 r·min-1振蕩，孵育45 min。加入100 μL顯色底物，孵育30 min。加入終止液，置于酶標(biāo)儀上檢測各孔在450 nm波長處的OD值。建立相應(yīng)擬合曲線，OD值得出各樣品IL-17A、IL-17F、IL-23和TGF-β濃度。

2.6 qRT-PCR法檢測IL-17A、IL-17F mRNA的表達(dá) 按試劑盒說明書提取RNA，IL-17A、IL-17F引物序列在NCBI GenBank數(shù)據(jù)庫中查找，其引物由日本寶生物公司合成。IL-17A，上游引物CCACGAAATCCAGGATGCCCAAAT，下游引物ATTCCAAGGTGAGGTGGA-TCGGTT；IL-17F，上游引物GTCACGTAACATCGAGAGCCG，下游引物TGTCTTCCTTTCCTTGAGCATTG；GAPDH，上游引物TCGGAGTCA-ACGGATTTGGTC，下游引物GCCATGGGTGGAATCATATTGG。以GAPDH表達(dá)量為標(biāo)準(zhǔn)，采用2-△△CT進(jìn)行分析IL-17A、IL-17F mRNA的相對表達(dá)量。

2.7 統(tǒng)計學(xué)方法 采用GraphPad Prism 8軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析。計量資料符合正態(tài)分布并且滿足方差齊性，采用t檢驗或one-way ANOVA分析；不符合正態(tài)分布采用非參數(shù)（秩和）檢驗；每組實驗重復(fù)3次及以上。以P < 0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

3 結(jié) 果

3.1 潤燥靈對SS患者外周血Th17細(xì)胞活力的影響 采用CCK-8檢測不同濃度潤燥靈對Th17細(xì)胞干預(yù)24 h和48 h后活力的影響，結(jié)果顯示，隨著藥物濃度的升高，細(xì)胞抑制率逐漸上升，當(dāng)達(dá)到1.5 mg·mL-1時細(xì)胞抑制率最高。根據(jù)潤燥靈不同濃度對Th17細(xì)胞增殖的抑制作用，最終篩選2.5，1.5，1 mg·mL-1作為高、中、低劑量組，見圖1。

3.2 ELISA法檢測潤燥靈對SS患者外周血IL-17A、IL-17F、IL-23及TGF-β含量的影響 與空白對照組比較，IL-17抑制組和潤燥靈高、中、低劑量組IL-17A、IL-17F含量均下降，TGF-β含量上升；潤燥靈高、中劑量組IL-23含量下降（P < 0.05）。與IL-17刺激組比較，IL-17抑制組及潤燥靈高、中、低劑量組IL-17A、IL-17F、IL-23含量均下降，TGF-β含量上升（P < 0.05）。與IL-17抑制組比較，潤燥靈高、中劑量組IL-17A含量下降，潤燥靈低劑量組IL-17A含量上升（P < 0.05）；潤燥靈中劑量組IL-17F、IL-23含量下降（P < 0.05）。見表1。

3.3 qRT-PCR法檢測潤燥靈對SS患者外周血IL-17A、IL-17F mRNA基因表達(dá)的影響 與空白對照組比較，IL-17刺激組IL-17A、IL-17F mRNA表達(dá)量顯著上升，IL-17抑制組和潤燥靈各劑量組IL-17A、IL-17F mRNA表達(dá)量顯著下降（P < 0.05）。與IL-17刺激組比較，IL-17抑制組和潤燥靈各劑量組IL-17A、IL-17F mRNA表達(dá)量顯著下降（P < 0.05）。與IL-17抑制組比較，潤燥靈中劑量組IL-17A、IL-17F mRNA表達(dá)下降，潤燥靈低劑量組IL-17F mRNA表達(dá)上升（P < 0.05）。見表2。

4 討 論

傳統(tǒng)觀點認(rèn)為，SS病因以“陰虛為本，燥熱為標(biāo)”，治療以滋陰潤燥為主，但效果欠佳。隨著近年來對SS發(fā)病機(jī)制的不斷了解，越來越多的研究認(rèn)為SS的發(fā)病除陰虛燥熱外，“毒”“瘀”在其發(fā)病過程中起著重要作用［10］?！霸锒尽辈∶醋浴端貑枴の宄Ｕ笳撈贰疤幵谌?，燥毒不生”，提示燥邪損傷氣血津液，蘊(yùn)久成毒，進(jìn)一步煎灼津液，津傷血滯，加重病情。在前期的研究中，課題組應(yīng)用解毒化瘀生津藥治療SS取得了良好療效［5-7］，進(jìn)一步說明燥毒灼津傷血的理論基礎(chǔ)?！督饏T要略》云：“病人胸滿，唇痿舌青，口燥，但欲漱水不欲咽，無寒熱，脈微大來遲，腹不滿，其人言我滿，為有瘀血也?！笔状翁岢隽损鲅略锏陌l(fā)病機(jī)制，說明燥證的發(fā)病除陰虛、燥毒外，還與瘀血有關(guān)。周倩云等［11］從“虛、毒、瘀”角度出發(fā)，認(rèn)為氣虛無力推動氣血津液運(yùn)行是SS發(fā)病的基礎(chǔ)，津虧燥邪蘊(yùn)久成燥毒，瘀毒互結(jié)，導(dǎo)致津液輸布障礙成為發(fā)病的主要因素。朱躍蘭等［12］認(rèn)為，傷津耗液可由內(nèi)、外燥邪引起，導(dǎo)致津液輸布代謝障礙，血行瘀滯，脈道不利，瘀血乃成，燥邪日久則燥熱內(nèi)盛，津液受損亦盛，化燥成毒，故SS的發(fā)病關(guān)鍵因素是瘀、毒兩者相互作用。在前期的研究中，課題組根據(jù)SS的發(fā)病特點，提出SS發(fā)病的主要原因是陰虛、瘀血、燥毒相互為患［13］，最終導(dǎo)致毒蘊(yùn)血瘀成為發(fā)病的關(guān)鍵因素，治療當(dāng)解毒、活血、生津，在此理論指導(dǎo)下組成潤燥靈方。該方在滋陰潤燥生津的同時，又有清熱解毒化瘀之效；其不僅遵從傳統(tǒng)的養(yǎng)陰生津的治療原則，而且加用活血化瘀藥物，更是配以益氣行津的治法，使氣機(jī)調(diào)暢，津液布達(dá)，燥邪可去。前期臨床研究證實，潤燥靈可以改善SS患者口、眼干燥癥狀，緩解病情進(jìn)展［13］。動物實驗研究表明，潤燥靈不僅能增加SS小鼠頜下腺指數(shù)及飲水量，改善模型小鼠頜下腺淋巴細(xì)胞浸潤等病理改變，還能下調(diào)SS模型小鼠血清IL-17和Th1/Th2水平，調(diào)節(jié)Th17/Treg細(xì)胞平衡［5-6］。

SS確切的病因和發(fā)病機(jī)制尚不完全明確，新近發(fā)現(xiàn)的Th17細(xì)胞亞群有別于Th1細(xì)胞及Th2細(xì)胞，在SS發(fā)病機(jī)制中發(fā)揮著十分重要的作用。研究表明，Th17細(xì)胞以分泌IL-17A、IL-17F為主，而IL-17又可介導(dǎo)并調(diào)節(jié)Thl細(xì)胞的炎癥反應(yīng)［14］；TGF-β主要由Treg細(xì)胞分泌，其可調(diào)節(jié)效應(yīng)T細(xì)胞的異?；罨鸵种蒲仔砸蜃拥尼尫牛?5］。TGF-β是一種抗炎細(xì)胞因子，它與類似跨膜的受體酪氨酸激酶家族的受體結(jié)合，從而調(diào)節(jié)多種細(xì)胞反應(yīng)過程［15］。IL-17被認(rèn)為在自身免疫性炎癥和導(dǎo)致宿主防御進(jìn)展中發(fā)揮重要作用，并且在很多變態(tài)反應(yīng)和自身免疫疾病的發(fā)病機(jī)制中起著關(guān)鍵作用，包括類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、銀屑病、多發(fā)性硬化癥、克羅恩病和同種異體移植排斥反應(yīng)［16］。在SS患者的唾液腺和動物模型中，IL-17表達(dá)升高，其表達(dá)上調(diào)與疾病嚴(yán)重程度密切相關(guān)，而通過基因治療在外分泌腺中阻斷IL-17可以緩解自身免疫性疾病的臨床癥狀［17］。有研究顯示，SS患者外周血Th17細(xì)胞表達(dá)較健康對照組顯著升高，IL-17A、IL-17F mRNA水平在PBMCs中也較健康對照組增高，表明SS發(fā)病與Th17細(xì)胞、IL-17A和IL-17F相關(guān)，且處于激活狀態(tài)［9］。更有研究表明，SS患者Th17細(xì)胞及IL-17的蛋白和mRNA在頜下腺及外周血中的水平均明顯上調(diào)，且Th17細(xì)胞的增高與Treg細(xì)胞的減少和IL-23的升高有關(guān)［18］。IL-23對于調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄激活因子3（STAT3）活化的Th17細(xì)胞的擴(kuò)增和維持非常重要，促進(jìn)Th17細(xì)胞分化，并且還存在于腺體浸潤中［19］。

本研究通過ELISA和qRT-PCR檢測證實，IL-17刺激組能夠增加炎癥因子的釋放，給予IL-17抑制劑進(jìn)行干預(yù)后，炎性因子的分泌顯著降低；解毒化瘀藥潤燥靈能夠有效下調(diào)IL-17A、IL-17F基因的表達(dá)水平，減少促炎因子IL-17A、IL-17F、IL-23分泌，增加TGF-β抑炎因子分泌，抑制Th17細(xì)胞誘導(dǎo)的炎癥反應(yīng)，從而延緩SS病情進(jìn)展。

參考文獻(xiàn)

［1］ 菲爾斯坦.凱利風(fēng)濕病學(xué)［M］.10版.栗占國，譯.北京：北京大學(xué)醫(yī)學(xué)出版社，2020：1336.

［2］ 中國醫(yī)師協(xié)會風(fēng)濕免疫科醫(yī)師分會.原發(fā)性干燥綜合征診療規(guī)范［J］.中華內(nèi)科雜志，2020，59（4）：269-276.

［3］ 周明歡，李學(xué)峰，盧放根.Th17細(xì)胞與炎癥性腸?。跩］.實用醫(yī)學(xué)雜志，2009，25（22）：3731-3732.

［4］ 黃釗煒，黃芳琴，馬武開，等.白細(xì)胞介素17在干燥綜合征發(fā)病機(jī)制中的作用［J］.中國實用醫(yī)刊，2020，47（24）：121-124.

［5］ 馬武開，侯雷，曾蘋，等.潤燥靈對干燥綜合征模型小鼠免疫調(diào)節(jié)及抗炎作用研究［J］.風(fēng)濕病與關(guān)節(jié)炎，2017，6（8）：5-9，14.

［6］ 侯雷，曾蘋，和秀麗，等.潤燥靈對干燥綜合征模型小鼠Th17/Treg細(xì)胞的影響［J］.中藥藥理與臨床，2017，33（2）：158-162.

［7］ 元曉龍，侯雷，曾蘋，等.潤燥靈湯治療干燥綜合征30例臨床療效觀察［J］.貴陽中醫(yī)學(xué)院學(xué)報，2018，40（2）：43-45，90.

［8］ 馬武開，唐芳.潤燥靈湯對干燥綜合征患者唾液流率及電解質(zhì)影響的研究［J］.環(huán)球中醫(yī)藥，2010，3（6）：464-465.

［9］ 吳琛.原發(fā)性干燥綜合征Th17細(xì)胞研究［D］.北京：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院，2011.

［10］ 黃芳琴，黃釗煒，馬武開，等.重視毒、瘀在干燥綜合征發(fā)病中的作用［J］.風(fēng)濕病與關(guān)節(jié)炎，2021，10（4）：34-36，44.

［11］ 周倩云，吳素玲.從“虛、毒、瘀”論治干燥綜合征思路探析［J］.四川中醫(yī)，2017，35（9）：28-29.

［12］ 朱躍蘭，侯秀娟，韋尼.干燥綜合征從燥毒瘀辨證論治［J］.北京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報，2009，32（6）：416-418.

［13］ 馬武開.化瘀解毒法治療干燥綜合征臨床分析［J］.中國中醫(yī)藥信息雜志，2003，10（9）：60-61.

［14］ ALUNNO A，CARUBBI F，BISTONI O，et al.Tregulatory and T helper 17 cells in primary Sj?gren'ssyndrome：facts and perspectives［J］.Mediators Inflamm，2015，2015（3）：243723-243732.

［15］ MASSAGUé J.TGF-β signalling in context［J］.Nat Rev Mol Cell Biol，2012，13（10）：616-630.

［16］ CAPONE A，VOLPEE.Transcriptional regulators of T helper 17 cell differentiation in health and autoimmune diseases［J］.Front Immunol，2020，12（11）：348-353.

［17］ MIELIAUSKAITE D，DUMALAKIENE I，RUGIENE R，et al.Expression of IL-17，IL-23 and their receptors in minor salivary glands of patients with primary Sj?gren's syndrome［J］.Clin Dev Immunol，2012（3）：187258-187266.

［18］ 陸妍，陳祎，王亞南，等.半夏芩連湯對干燥綜合征模型NOD小鼠Th17/IL-17免疫炎性途徑的影響［J］.中國中西醫(yī)結(jié)合雜志，2015，35（5）：612-617.

［19］ PATEL DD，KUCHROO VK.Th17 cell pathway in human immunity：lessons from genetics and therapeutic interventions［J］.Immunity，2015，43（6）：1040-1051.

收稿日期：2023-04-08；修回日期：2023-05-26

基金項目：國家自然科學(xué)基金項目（81973835，81860820）；貴州省高層次創(chuàng)新型人才培養(yǎng)計劃——“百”層次人才項目（黔科合平臺人才〔2016〕5650）；貴州省中醫(yī)風(fēng)濕免疫病臨床研究中心

項目（黔科合平臺人才〔2020〕2202號）

作者單位：貴州中醫(yī)藥大學(xué)，貴州 貴陽 550001

通信作者：馬武開 貴州省貴陽市云巖區(qū)飛山街83號，walker55@163.com