NaHCO3 堿度和NaCl 鹽度對兩種規(guī)格高體雅羅魚幼魚的急性毒理研究

艾克達·熱合曼，李雯，黃晶，梁利群，張立民，常玉梅

（1.中國水產(chǎn)科學研究院黑龍江水產(chǎn)研究所，淡水魚類育種國家地方聯(lián)合工程實驗室，農(nóng)業(yè)農(nóng)村部淡水水產(chǎn)生物技術與遺傳育種重點實驗室，黑龍江省特殊生境魚類種質(zhì)特性與抗逆育種重點實驗室，黑龍江 哈爾濱 150070；2.大連海洋大學水產(chǎn)與生命學院，遼寧 大連 116023；3.上海海洋大學水產(chǎn)與生命學院，上海 201306；4.江蘇海洋大學，江蘇 連云港 222005）

我國有低洼鹽堿水域約0.46 億公頃，廣泛分布在東北、華北和西北的19 個省、市和自治區(qū)[1]。HCO3-和CO32-是水體堿度和pH（>8.8）升高的主要離子，水生動物通過呼吸作用吸入體內(nèi)，酸堿平衡失衡，有強烈的毒害作用，導致堿中毒[2]，引發(fā)體內(nèi)pH 升高，內(nèi)外高pH 環(huán)境致使“血液-水”的氨分壓PNH3梯度（NH3+H+=NH4+）被逆轉(zhuǎn)或消除，內(nèi)氨積累導致氨中毒[3,4]。因此，大部分鹽堿水域仍處于荒置狀態(tài)。篩選和培育耐鹽堿種質(zhì)，開展鹽堿水養(yǎng)殖，拓寬宜漁空間，提高這一非常規(guī)國土資源的價值，振興邊遠鄉(xiāng)村，對促進我國水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)可持續(xù)發(fā)展具有重要的戰(zhàn)略意義。

全世界雅羅魚屬（Leuciscus）約有20 余種，我國主要有瓦氏雅羅魚（Leuciscus waleckii）、準噶爾雅羅魚（L.merzbacheri）、貝加爾雅羅魚（L.baicalensis）和高體雅羅魚（L.idus）[5]。其中來自內(nèi)蒙古達里湖的瓦氏雅羅魚具有極強的耐高堿特性，能夠耐受堿度53.57 mmol·L-1，pH 9.6 的極端惡劣環(huán)境，是該湖泊的主要經(jīng)濟魚類之一[6]。但是，瓦氏雅羅魚屬于小型經(jīng)濟魚類，生長緩慢，多用于鹽堿池塘養(yǎng)殖，漁業(yè)生產(chǎn)力低下。

高體雅羅魚，又名圓腹雅羅魚，俗稱小白魚、中白條，主要分布于歐洲北部和俄羅斯西伯利亞水系，在我國僅分布于新疆額爾齊斯河水系，是新疆特有的經(jīng)濟魚類[7]。高體雅羅魚個體較大，銀灰色體表上配有紅色鰭條，體形優(yōu)美，肉質(zhì)鮮嫩，有特殊清香味，生長較快，最大個體可達60 cm，重4 kg 左右，是非常優(yōu)良的新養(yǎng)殖對象[8]。近年來，已研究了高體雅羅魚的生物學特性[9]、人工繁殖[10]、苗種培育[11]、成魚養(yǎng)殖[12]、早期發(fā)育[13]等，但是對其耐鹽堿特性尚未見報道。

本研究以兩種規(guī)格的高體雅羅魚為實驗材料，分析在不同濃度梯度的堿度、鹽度以及鹽堿混合下的急性毒性影響，明確不同規(guī)格高體雅羅魚對堿度耐受力是否存在差異，為雅羅魚耐鹽堿新品種選育、內(nèi)陸鹽堿水增養(yǎng)殖優(yōu)異種源的篩選及移植馴化，提供理論依據(jù)和科學指導。

1 材料與方法

1.1 材料

實驗魚為新疆額爾齊斯河的高體雅羅魚野生苗種，經(jīng)人工馴化養(yǎng)殖達到性成熟后，人工催產(chǎn)獲得F3代。分別選取同年繁殖體質(zhì)健壯，大小均一，活力較強，無傷病的1 月齡（3.36±0.24）g 和3 月齡（17.1 ± 0.05）g 幼魚各1 000 尾用以鹽堿脅迫實驗，其中鹽度脅迫只用1 月齡，而堿度和鹽堿混合脅迫分別選用了兩種規(guī)格實驗魚。實驗前高體雅羅魚在循環(huán)可控的水族箱（177.8 cm×57.5 cm×35.5 cm）內(nèi)暫養(yǎng)一周，每天投餌（通威飼料，哈爾濱市賓縣）兩次。水溫為23.12℃～24.35℃，pH7.52～7.63（pH400 便攜式pH 計，上海沛瑞儀器有限公司），溶解氧7.81～8.26 mg·L-1（AZ8371，衡欣實業(yè)有限公司），氨氮0.56～0.63 mg·L-1（U-T6 紫外可見風光光度計，屹譜儀器），鹽度0.10～0.15 g·L-1（LS10T 鹽度計，廣州速為電子科技有限公司），堿度0.44～0.46 mmol·L-1（0.02 mmol·L-1鹽酸滴定法標定）。

1.2 方法

根據(jù)預實驗結(jié)果，分別設置了9 個堿度梯度和7 個鹽度梯度，每個梯度分別設置3 組重復，每組重復10 尾魚，一組對照（曝氣自來水），測定水體各項理化指標。

1.2.1 堿度組

根據(jù)預實驗結(jié)果，以公差為10 mmol·L-1設置9個NaHCO3濃度梯度：10 mmol·L-1、20 mmol·L-1、30 mmol·L-1、40 mmol·L-1、50 mmol·L-1、60 mmol·L-1、70 mmol·L-1、80 mmol·L-1和90 mmol·L-1。添加分析純NaHCO3（天津凱通化學試劑有限公司）配制對應濃度的實驗用水，滴定法標定后的實測值分別為10.3 mmol·L-1、20.1 mmol·L-1、30.4 mmol·L-1、41.8 mmol·L-1、50.8 mmol·L-1、60.4 mmol·L-1、69.2 mmol·L-1、81.4 mmol·L-1和90.8 mmol·L-1。

1.2.2 鹽度組

根據(jù)預實驗結(jié)果，以公差為2 g·L-1設置7 個NaCl 濃度梯度：2 g·L-1、4 g·L-1、6 g·L-1、8 g·L-1、10 g·L-1、12 g·L-1和14 g·L-1，添加分析純NaCl（天津凱通化學試劑有限公司）配制對應濃度的實驗用水，鹽度計實測值分別為2.1 g·L-1、4.0 g·L-1、6.1 g·L-1、8.0 g·L-1、10.0 g·L-1、12.1 g·L-1和14.0 g·L-1。

1.2.3 鹽堿混合組

根據(jù)單一毒性實驗的LC50結(jié)果，鹽堿混合梯度中鹽度設置為4 g·L-1、6 g·L-1、8 g·L-1、10 g·L-1，堿度設置為40 mmol·L-1、50 mmol·L-1的雙列組合。

1.3 鹽堿脅迫實驗

實驗開始前所有實驗魚停食48 h，實驗期間不投喂。選取大小均一、無傷病的810 尾1 月齡個體分別做單堿（270 尾實驗魚和30 尾對照）、單鹽（210尾實驗魚和30 尾對照）以及鹽堿混合（240 尾實驗魚和30 尾對照）實驗；選取570 尾3 月齡個體分別做單堿（270 尾實驗魚和30 尾對照）和鹽堿混合（240 尾實驗魚和30 尾對照）實驗，稱重記錄后分別將實驗魚放入已配置好濃度的水族箱中（1 月齡：長×寬×高=29 cm×19 cm×8.5 cm；3 月齡：長×寬×高=43 cm×28 cm×25 cm），每個水族箱放10尾，3 個重復。實驗開始后12 h、24 h、48 h、72 h 和96 h 時觀察實驗魚的反應和生存狀況，統(tǒng)計死亡率和存活率。實驗過程中每24 h 換水1/3。以實驗魚靜臥水箱底部、呼吸停止、用玻璃棒觸碰無反應為死亡標準，及時撈出死魚，清理水中的雜質(zhì)。

1.4 數(shù)據(jù)處理

單堿、單鹽實驗結(jié)束后，采用概率單位法和線性回歸法計算半致死濃度LC50值[14]。概率單位法利用SPSS 19.0 統(tǒng)計軟件中的Probit 分析，直接得出LC50；線性回歸法利用SPSS 19.0 統(tǒng)計軟件中的Liner 分析，得到濃度與死亡率之間的線性回歸方程，求出LC50；首先利用ANOVA 單因素方差分析對同種規(guī)格實驗魚不同脅迫時間段的LC50進行顯著性檢驗，然后再用獨立樣本T 檢驗對不同規(guī)格實驗魚在相同時間段不同方法計算得到的LC50進行顯著性檢驗。LC50均采用數(shù)值±標準差的形式給出。最后根據(jù)LC50獲得不同規(guī)格實驗魚的安全濃度SC：SC=[48 h LC50×0.3/（24 h LC50/48 h LC50）2][15,16]。

采用Marking 相加指數(shù)（AI）法評價聯(lián)合毒性[17,18]。即先完成單因子實驗，得到單堿、單鹽的LC50；將鹽度和堿度按照96 h 時LC50為一個毒性單位1∶1 混合配制進行實驗，求出鹽堿混合溶液對不同規(guī)格高體雅羅魚的LC50；利用下式求出鹽堿聯(lián)合毒性相加作用之和（S）：

式中：A、B 分別為單一毒性實驗中NaCl 和NaHCO3的LC50；Am、Bm 分別為聯(lián)合毒性實驗中NaCl 和NaHCO3的LC50。當S＜1 時，AI=1/S-1；當S≥1 時，AI=1-S。利用相加指數(shù)AI 判斷聯(lián)合毒性；當AI＞0 時為協(xié)同作用，當AI＜0 時為拮抗作用，當AI=0 時為相加作用。

2 結(jié)果與分析

2.1 堿度對高體雅羅魚幼魚的毒性影響

堿度實驗過程中，對照組實驗魚呼吸、游動均正常，水質(zhì)較清澈，全程未出現(xiàn)死亡個體；堿脅迫組實驗魚剛開始時活動激烈，有跳出水面的現(xiàn)象，待適應后跳動現(xiàn)象逐漸減弱，陸續(xù)出現(xiàn)死亡。死亡個體鰓絲暗紅、眼部凸起發(fā)黑、腹腔積水，同時水質(zhì)渾濁較快，有大量泡沫。

1 月齡實驗魚在堿度≤40 mmol·L-1時，無死亡現(xiàn)象；50 mmol·L-1時開始死亡，存活率累計為80%，24 h 之后趨于適應，再無死亡個體增加；60 mmol·L-1時，存活率累計為60%，24 h 之后再無死亡個體增加；70 mmol·L-1和80 mmol·L-1，隨著脅迫時間的延長累計存活率緩慢減少；90 mmol·L-1時，12 h 之內(nèi)全部死亡（圖1-a）。

圖1 高體雅羅魚隨時間和堿度濃度變化的累計存活率Fig.1 Changes in cumulative survival rates of L.idus with different alkalinity concentration and exposure time

3 月齡實驗魚在堿度≤50 mmol·L-1時，無死亡現(xiàn)象；60 mmol·L-1，24 h 內(nèi)未出現(xiàn)死亡，48 h 開始死亡，累計存活率為76.7%；70 mmol·L-1和80 mmol·L-1時，48 h 累計存活率分別為40.0%和26.7%；72 h之后再未出現(xiàn)死亡個體；堿度為90 mmol·L-1時，12 h 內(nèi)累計存活率低于5%，24 h 內(nèi)則全部死亡（圖1-b）。

采用概率單位法和線性回歸法計算得出，1 月齡高體雅羅魚12 h、24 h、48 h、72 h 和96 h 的LC50分別為78.93 mmol·L-1、71.47 mmol·L-1、67.33 mmol·L-1、63.38 mmol·L-1、61.46 mmol·L-1（表1）和68.73 mmol·L-1、65.59 mmol·L-1、63.72 mmol·L-1、60.74 mmol·L-1、58.51 mmol·L-1（表2）。單因素方差分析顯示：不同時間段的LC50均存在顯著差異（P<0.05，表3）；3月齡高體雅羅魚12 h、24 h、48 h、72 h 和96 h 的LC50分別為89.46 mmol·L-1、78.13 mmol·L-1、72.11 mmol·L-1、68.25 mmol·L-1、68.25 mmol·L-1（表1）和73.09 mmol·L-1、67.64 mmol·L-1、65.33 mmol·L-1、61.63 mmol·L-1、61.63 mmol·L-1（表2）。單因素方法分析顯示，除24 h、48 h、72 h，及96 h 的LC50無顯著性差異外，其他時間段均存在顯著差異（P<0.05，表3）；總體來看，線性回歸法計算得出的LC50比概率單位法的數(shù)值偏低一些，但T 檢驗顯示，采用兩種方法計算得出不同規(guī)格實驗魚的LC50均無顯著差異（P>0.05，表3）。通過兩種方法求得的1 月齡SC分別為17.93 mmol·L-1和18.04 mmol·L-1（表1），3月齡SC 分別為18.43 mmol·L-1和18.28 mmol·L-1（表2）。

表1 概率單位法分析堿度對不同規(guī)格高體雅羅魚的毒性劑量Tab .1 Toxic dose of alkalinity to different sizes of L.idus by a probabilistic unit method

表2 線性回歸法分析堿度對不同規(guī)格高體雅羅魚的毒性劑量Tab.2 Toxic dose of alkalinity to different sizes of L.idus by a linear regression method

表3 不同規(guī)格高體雅羅魚的LC50 差異顯著性分析Tab.3 Significant difference analysis of LC50 values of different sizes of L.idus

2.2 鹽度對高體雅羅魚的毒性影響

鹽度實驗過程中，對照組實驗魚無特別應激現(xiàn)象，游動平緩，呼吸正常，水質(zhì)清潔，無泡沫等雜質(zhì)，全程未出現(xiàn)死亡個體。NaCl 脅迫組初期實驗魚快速游動，呼吸加快，隨著鹽度濃度和脅迫時間的增加，游動緩慢，陸續(xù)死亡。死亡個體焦躁不安，隨后身體失去平衡，側(cè)翻或倒游，體表和鰓分泌大量黏液，水質(zhì)較渾濁。

當鹽度≤8 g·L-1，無死亡現(xiàn)象；鹽度為10 g·L-1，48 h 之后開始出現(xiàn)死亡個體，累計存活率為76.7%；鹽度為12 g·L-1時，96 h 內(nèi)的累計存活率低于50%；當鹽度達到14 g·L-1時，24 h 的累計存活率低于5%，48 h 全部死亡（圖2）。

圖2 高體雅羅魚隨時間和鹽度濃度變化的累計存活率Fig.2 Changes in cumulative survival rates of L.idus with different salinity concentration and exposure time

采用概率單位法和線性回歸法計算得出，1 月齡高體雅羅魚12 h、24 h、48 h、72 h 和96 h 的LC50分別為14.03 g·L-1、12.71 g·L-1、12.43 g·L-1、11.52 g·L-1、11.24 g·L-1（表4）和11.54 g·L-1、10.79 g·L-1、10.24 g·L-1、10.11 g·L-1、9.89 g·L-1（表5）。單因素方差分析顯示，除72 h 和96 h 的LC50無顯著性差異外，其他時間段均差異顯著（P<0.05，表6）。同樣地，與堿度研究結(jié)果相似，線性回歸法計算得出的LC50比概率單位法的數(shù)值偏低一些，但均無顯著差異（P>0.05，表6）。通過兩種方法求得的SC 分別為2.71 g·L-1和2.77 g·L-1（表4、表5）。

表4 概率單位法分析鹽度對高體雅羅魚的毒性劑量Tab.4 Toxic dose of alkalinity to different sizes of L.idus by a probability unit method

2.3 鹽堿混合條件對高體雅羅魚的聯(lián)合毒性試驗

鹽堿混合條件下，對照組實驗魚無異常應激行為，而暴露在鹽堿混合溶液中的實驗魚表現(xiàn)出明顯的應激行為，體色逐漸變暗，體表和鰓分泌大量黏液，隨脅迫時間的增加逐漸出現(xiàn)死亡。

1 月齡實驗魚在堿度為40 mmol·L-1、鹽度為6 g·L-1時，24 h 內(nèi)未出現(xiàn)死亡個體；隨著暴露時間的延長，48 h 開始出現(xiàn)死亡，96 h 累計存活率為43.3%；鹽度為8 g·L-1和10 g·L-1時，12 h 內(nèi)均無死亡個體；96 h 累計存活率均低于50%，分別為43.4%和33.3%；在堿度為50 mmol·L-1、鹽度為6 g·L-1和8 g·L-1時，12 h 內(nèi)無死亡個體，96 h 累計存活率分別為23.4%和16.7%；鹽度為10 g·L-1時，12 h內(nèi)全部死亡（圖3-a）。

圖3 鹽堿混合條件下高體雅羅魚累計存活率Fig.3 Cumulative survival rates of L.idus exposed to different alkali-saline mixed conditions

3 月齡實驗魚在堿度為40 mmol·L-1、鹽度為6 g·L-1、8 g·L-1、10 g·L-1時，24 h 內(nèi)未出現(xiàn)死亡或死亡個體極少；隨著暴露時間的延長，死亡個體逐漸增加，96 h 累計存活率為73.3%、66.7%和53.3%。在堿度為50 mmol·L-1，鹽度為6 g·L-1、8 g·L-1、10 g·L-1時，12 h 內(nèi)均未出現(xiàn)死亡；同樣地，隨著暴露時間的延長，死亡個體逐漸增加，96 h 內(nèi)存活率低于50%以下，甚至全部死亡（圖3-b）。

根據(jù)鹽堿聯(lián)合毒性結(jié)果計算得出，單鹽、單堿對高體雅羅魚的LC50隨著其作用時間的延長而減小；在鹽堿同時作用條件下，鹽度和堿度對高體雅羅魚的聯(lián)合毒性作用在96 h 內(nèi)均為拮抗效應，不同規(guī)格的高體雅羅魚在12 h 內(nèi)，拮抗作用最為顯著（AI=-0.39；-0.38），而后隨著暴露時間的延長，拮抗作用逐漸減弱（96 h，AI=-0.22；-0.28）（表7）。

表7 NaHCO3 和NaCl 對不同規(guī)格高體雅羅魚的聯(lián)合毒性Tab.7 The joint toxicity of NaHCO3 alkalinity and NaCl salinity to different sizes of L.idus

由表7 可知，兩種不同處理方式在同一時間段內(nèi)得到的LC50均表現(xiàn)為鹽堿混合小于單堿和單鹽；聯(lián)合毒性作用方式為拮抗作用，因此，對高體雅羅魚的毒性效應則表現(xiàn)為鹽堿混合大于單堿和單鹽。

3 討論

3.1 高體雅羅魚對碳酸鹽堿度的耐受力影響

大部分鹽堿水的特殊理化性質(zhì)使其仍處于荒置狀態(tài)[18]。HCO3-和CO32-是影響水體堿度的主要離子，直接或間接作用于魚類的組織器官，造成器質(zhì)性損傷和結(jié)構變化，影響其生理功能[20,21]。雷衍之等[22]報道，在高堿度水體中鰱（Hypophthalmichthys molitrix）、鳙（Aristichthys nobilis）和草魚（Ctenophar yngodon Idella）鰓部出血；楊建等[23]發(fā)現(xiàn)，在高堿度溶液中魚體表層變黑，失去光澤，個別個體出現(xiàn)眼睛發(fā)白、鰓部出血現(xiàn)象。本研究發(fā)現(xiàn)，暴露在高堿度溶液中死亡的高體雅羅魚大多具有眼部凸起發(fā)黑、腹腔積水、鰓部出血的特征。鰓是魚類氣體和離子交換的主要器官。HCO3-和CO32-直接作用于鰓表皮細胞（離子細胞、扁平上皮細胞、粘液細胞等），影響其氣體和離子交換功能，干擾血液氨氮代謝和酸堿平衡，使魚體出現(xiàn)氨中毒和堿中毒[3,4]。高珊等[21]發(fā)現(xiàn)，高堿脅迫下，松花江瓦氏雅羅魚鰓小片破損，扁平上皮細胞、柱細胞和血細胞發(fā)生融合、脫落。姜秋俚等[24]通過組織切片發(fā)現(xiàn)，高堿脅迫下，咸?？ɡ佐~（Chalcalburnus chalcoides Aralensis）的鰓小片縮短，上皮細胞肥大、腫脹和脫落。Chang 等[25]比較了相同堿度脅迫下達里湖瓦氏雅羅魚和松花江瓦氏雅羅魚鰓組織slc26a5 和slc26a6 基因的表達水平，發(fā)現(xiàn)前者顯著高于后者，推測SLC26 蛋白可能與NCC、NBC1、NKA 等離子轉(zhuǎn)運蛋白協(xié)同作用共同參與HCO3-的轉(zhuǎn)運，為達里湖瓦氏雅羅魚堿代謝提供了分子證據(jù)。

實驗室條件下，通常使用NaHCO3LC50作為魚類耐堿能力的評價指標[15,16,23]。相關實驗發(fā)現(xiàn)，不同魚類對NaHCO3堿度的耐受性差異較大。如圖4 所示，耐鹽堿魚類的耐堿能力最強，96 h 的LC50在120～150 mmol·L-1之間，青海湖裸鯉（Gymnocypris przewalskii）[26]>瓦氏雅羅魚[27]>大鱗鲃（Barbus capito）[28]；淡水魚類次之，96 h 的LC50在90～140 mmol·L-1之間，鯽（Carassius auratus）[23]>松浦鏡鯉（Cyprinus carpio var.Songpu）[23]>草魚[23]；廣鹽性魚類的耐堿能力最差，96 h 的LC50在5.1～100 mmol·L-1之間，尼羅羅非魚（Oreochromis niloticus）[29]>花鱸（Lateolabrax maculatus）[30]>歐鲇（Silurus glurnis）[31]。

NaHCO3毒性效應與暴露時間、NaHCO3濃度呈正相關，隨著NaHCO3濃度的增加，暴露時間的延長，LC50呈下降趨勢[29-31]。NaHCO3毒性效應反應曲線表明（圖4），青海湖裸鯉、鯽、瓦氏雅羅魚、松浦鏡鯉、羅非魚和高體雅羅魚的NaHCO3毒性反應曲線趨于平緩，表明對堿度的毒性不敏感，能夠短期內(nèi)適應高堿環(huán)境；相對來講，大鱗鲃、花鱸、歐鲇在72 h 之后才趨于平緩，表明它們對堿度的毒性比較敏感，應激時間較長，需要較長的適應期。比較不同魚類對堿度的耐受性差異，應充分考慮耐受時間和耐受濃度的范圍差。

本研究采用概率單位法和線性回歸法計算不同規(guī)格高體雅羅魚的LC50，盡管線性回歸法得到的數(shù)值比概率法偏低，但二者均無顯著差異（P>0.05，表3）。大規(guī)格高體雅羅魚的堿度耐受性整體高于小規(guī)格，但耐堿性能與規(guī)格無顯著差異（P>0.05，表3），這與王艷玲[32]報道的不同規(guī)格的尼羅羅非魚的LC50存在顯著差異結(jié)果不同。推測這可能與魚類種類不同有關。高體雅羅魚為淡水魚類，而羅非魚為廣鹽性魚類，前者的耐堿性能普遍高于后者（圖4），表明淡水魚類不同規(guī)格可能對堿度的毒性反應不敏感。本研究結(jié)果表明，大小規(guī)格的高體雅羅魚對NaHCO3堿度均表現(xiàn)出超強的耐受性，96 h 100%存活的堿度高達40 mmol·L-1以上（圖1-a、1-b），可以將其歸屬為耐中、高堿度魚類范疇（>30 mmol·L-1）[33]。由此可見，至少在<40 mmol·L-1的鹽堿水中增養(yǎng)殖高體雅羅魚苗種時，無需堿度梯度馴化。

3.2 高體雅羅魚對鹽度的耐受力影響

鹽度是影響魚類生長、發(fā)育、代謝等生理活動的重要環(huán)境因素，魚類通過自身一系列生理變化來調(diào)整體內(nèi)外滲透壓的動態(tài)平衡。大多數(shù)魚類能夠適應水環(huán)境與其自身的調(diào)節(jié)機制有關。這種機制只局限于一定鹽度范圍內(nèi)，超過耐受極限，滲透調(diào)節(jié)受阻，細胞內(nèi)Na+/K+-ATPase 活性迅速下降，細胞膜通透性降低，離子交換受阻，魚類將生理失調(diào)甚至死亡[34,35]。

一般認為，鹽度5～8 g·L-1是淡水魚類和海水魚類生存的分界線[28]。淡水白鯧（Colossoma brachypomum）[36]、彭澤鯽（Carassius auratus var.Pengze）[37]和銀鯽（Carassius auratus gibelio）[38]幼魚96 h 的LC50分別為6.51 g·L-1、6.68 g·L-1和8.58 g·L-1。本研究中1 月齡高體雅羅魚幼魚96 h 的LC50為11.24 g·L-1和9.89 g·L-1，雖高于一些淡水魚類的96 h 的LC50，但其在鹽度≤8 g·L-1時存活率100%，表明淡水魚類對鹽度的滲透壓調(diào)節(jié)能力相對穩(wěn)定。我國碳酸鹽型鹽堿水體的特點是高堿低鹽，大部分鹽度低于2 g·L-1[38]，因此，本研究僅對小規(guī)格高體雅羅魚開展了鹽度急性毒理實驗，獲得的結(jié)果對其在碳酸鹽型鹽堿水域的增養(yǎng)殖活動是合理的，且具有指導作用。

3.3 鹽堿混合脅迫對高體雅羅魚的聯(lián)合毒性影響

鹽堿混合的聯(lián)合毒性效應因?qū)嶒炘O計、評價方法的差異，結(jié)果略顯不同。常見的聯(lián)合作用評價方法主要有毒性單位法、相加指數(shù)法和混合毒性指數(shù)法等[14]。章征忠等[36]采用正交設計法發(fā)現(xiàn)，鹽堿對一些淡水魚類的致死可能表現(xiàn)為協(xié)同作用；李洪濤等[40]采用均勻設計法發(fā)現(xiàn)，鹽度和堿度對泥鰍（Misgurnus anguillicaudatus）的聯(lián)合毒性一致表現(xiàn)為拮抗作用；周偉江等[16]通過正交設計法發(fā)現(xiàn)，鹽堿混合對達里湖鯽不同時間段的毒性效應全部為拮抗作用。趙麗慧等[41]采用雙列組合的設計方法發(fā)現(xiàn)，鹽堿混合對尼羅羅非魚的毒性效應為拮抗作用。本研究采用雙列組合的設計方法，指數(shù)相加法分析發(fā)現(xiàn)，鹽堿混合對高體雅羅魚的聯(lián)合毒性作為拮抗效應，且隨著暴露時間的延長，這種效應由強變?nèi)?。盡管上述研究所運用的實驗方法不同，得到的研究結(jié)果也存在一定差異，但在毒性效應方面，普遍認為鹽堿混合毒性強于單一作用的堿度或鹽度，單一作用的堿度強于單一作用的鹽度。

綜上，本實驗研究了堿度、鹽度以及鹽堿混合對不同規(guī)格高體雅羅魚幼魚的毒性影響。采用線性回歸法和單位概率法得到不同規(guī)格高體雅羅魚 堿度96 h 的LC50為58.51～68.25 mmol·L-1，SC 為17.93～18.43 mmol·L-1；鹽度96 h 的LC50為9.89～11.24 g·L-1，SC 為2.71～2.77 g·L-1，表現(xiàn)出較強的耐鹽堿特性。盡管鹽堿混合毒性大于單堿和單鹽，但對于高堿低鹽的碳酸鹽型鹽堿水體來講，直接投放1 月齡的高體雅羅魚夏花到中度鹽堿水（堿度10～30 mmol·L-1，鹽度<2 g·L-1）中增養(yǎng)殖是可行的。這些研究結(jié)果為推進碳酸鹽型鹽堿水的開發(fā)利用提供了新的種源及馴養(yǎng)依據(jù)。