任善茂，陶勇，江慧，王健

發(fā)酵飼料對(duì)產(chǎn)蛋番鴨體組織脂肪含量和脂肪代謝相關(guān)基因表達(dá)及盲腸微生物的影響

任善茂，陶勇，江慧，王健*

(江蘇農(nóng)牧科技職業(yè)學(xué)院動(dòng)物科技學(xué)院，江蘇 泰州 225300)

選用750只健康的37周齡產(chǎn)蛋期黑羽番鴨，隨機(jī)均分為5組，每組5個(gè)重復(fù)，對(duì)照組飼喂基礎(chǔ)飼糧，試驗(yàn)組分別飼喂添加2%、4%、6%和8%發(fā)酵飼料的飼糧，預(yù)試期7 d，正試期37 d，探究發(fā)酵飼料對(duì)產(chǎn)蛋番鴨生產(chǎn)性能、體組織脂肪含量、脂肪代謝相關(guān)基因表達(dá)和盲腸微生物的影響。結(jié)果表明：不同水平發(fā)酵飼料組產(chǎn)蛋番鴨的產(chǎn)蛋率、平均蛋質(zhì)量、平均日產(chǎn)蛋質(zhì)量、料蛋比差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(>0.05)，但日糧中添加4%、6%和8%發(fā)酵飼料顯著(<0.05)降低了破(軟)蛋率；不同水平發(fā)酵飼料組產(chǎn)蛋番鴨肝臟、胸肌和腿肌中的脂肪含量差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(>0.05)；2%和4%發(fā)酵飼料組產(chǎn)蛋番鴨肝臟和及8%發(fā)酵飼料組產(chǎn)蛋番鴨肝臟基因表達(dá)量均顯著(<0.05)高于對(duì)照組的，4%、6%和8%發(fā)酵飼料組產(chǎn)蛋番鴨腹脂基因表達(dá)量顯著(<0.05)低于對(duì)照組的，腹脂基因表達(dá)量相比對(duì)照組的有增加趨勢(=0.07)；4%發(fā)酵飼料組Sobs指數(shù)顯著(<0.05)高于6%發(fā)酵飼料組的，且4%發(fā)酵飼料組的Shannon指數(shù)顯著(<0.05)高于其他各組的；添加8%發(fā)酵飼料顯著(<0.05)降低了unclassified_o_Bacteroidales的相對(duì)豐度，添加4%發(fā)酵飼料顯著(<0.05)提高了norank_f_Oscillospiraceae的相對(duì)豐度?？梢?，飼糧中適量添加發(fā)酵飼料，能降低產(chǎn)蛋番鴨破(軟)蛋率，調(diào)節(jié)鴨脂肪合成相關(guān)基因的表達(dá)水平，提高腸道菌群的多樣性并在屬水平改善腸道菌群結(jié)構(gòu)，產(chǎn)蛋番鴨日糧中混合發(fā)酵飼料適宜添加水平為4%。

黑羽番鴨；發(fā)酵飼料；生產(chǎn)性能；脂肪；基因表達(dá)；盲腸微生物

發(fā)酵是降解植物來源飼料中抗?fàn)I養(yǎng)因子以及毒素的有效手段，也是提高植物性飼料營養(yǎng)價(jià)值、改善飼料適口性以及提高飼料抗氧化能力的既便宜又簡單的方法[1]。發(fā)酵飼料是利用微生物如細(xì)菌或霉菌降解飼糧中的大分子有機(jī)物質(zhì)以及抗?fàn)I養(yǎng)因子，從而得到易消化吸收的小分子營養(yǎng)物質(zhì)以及酶、微生物等活性代謝物質(zhì)的飼料[2]。面對(duì)抗生素飼料添加劑的禁用，發(fā)酵飼料作為一種替代物在動(dòng)物飼糧中的使用具有巨大的潛力。研究表明，發(fā)酵飼料具有提高家禽免疫能力[3–4]、改善腸道菌群[5–6]和飼料轉(zhuǎn)化效率[3–4,6]及動(dòng)物生產(chǎn)性能[3–6]等功效。

產(chǎn)蛋鴨體內(nèi)脂類代謝旺盛，脂肪在體內(nèi)的沉積與其繁殖性能、飼料利用率以及鴨肉嫩度及風(fēng)味等均有關(guān)。腸道是鴨營養(yǎng)物質(zhì)消化與吸收，以及免疫的重要部位，而腸道微生物則保證了以上作用的發(fā)揮。對(duì)鼠、豬腸道菌群與健康的研究[7]已發(fā)現(xiàn)，其體脂肪含量與腸道菌群的組成密切相關(guān)。而發(fā)酵飼料對(duì)于蛋鴨脂類代謝及腸道微生物的影響可獲信息非常有限。筆者以黑羽番鴨產(chǎn)蛋鴨為試驗(yàn)動(dòng)物，研究發(fā)酵飼料對(duì)其生產(chǎn)性能、體組織脂肪含量、脂肪代謝相關(guān)基因表達(dá)以及盲腸微生物的影響，以期為發(fā)酵飼料在產(chǎn)蛋番鴨生產(chǎn)中的應(yīng)用提供依據(jù)。

1　材料與方法

1.1　供試材料

供試產(chǎn)蛋黑羽番鴨來自國家級(jí)水禽基因庫(江蘇)。發(fā)酵飼料是以乳酸桿菌、枯草芽孢桿菌、酵母菌通過固態(tài)發(fā)酵玉米、豆粕、麩皮等的混合物生產(chǎn)制得。發(fā)酵飼料的pH為4.29，水分為42.78%。發(fā)酵飼料基于干物質(zhì)的營養(yǎng)水平：粗蛋白19.98%(粗蛋白中酸溶蛋白占28.16%)，粗纖維5.48%，粗灰分6.67%，粗脂肪3.48%，總酸3.50%，蛋氨酸0.19%，賴氨酸0.99%，總磷0.25%。

1.2　試驗(yàn)設(shè)計(jì)

選擇健康、體質(zhì)量(2.30 kg左右)相近的750只37周齡產(chǎn)蛋期黑羽番鴨，將之隨機(jī)均分為5組，每組5個(gè)重復(fù)，各重復(fù)30只。對(duì)照組飼喂基礎(chǔ)飼糧，各試驗(yàn)組分別飼喂主要營養(yǎng)成分含量基本一致，發(fā)酵飼料添加量不同(2%、4%、6%和8%)的試驗(yàn)飼糧。試驗(yàn)各組飼糧組成及營養(yǎng)水平見表1。按照發(fā)酵飼料添加量各組分別記為F0、F2、F4、F6和F8。飼養(yǎng)試驗(yàn)預(yù)試期7 d，正試期37 d。

1.3　動(dòng)物飼養(yǎng)管理

飼養(yǎng)試驗(yàn)在江蘇現(xiàn)代畜牧科技示范園進(jìn)行。試驗(yàn)開始前對(duì)試驗(yàn)鴨舍、所用設(shè)備和器械進(jìn)行徹底的清洗消毒。試驗(yàn)中產(chǎn)蛋番鴨均在同一棟鴨舍內(nèi)以重復(fù)為單位單籠飼養(yǎng)。自由采食，乳頭式飲水器自由飲水，自然采光并保持室內(nèi)通風(fēng)，室內(nèi)相對(duì)濕度保持在65%左右。每天定時(shí)飼喂2次，定時(shí)撿蛋2次，保持籠舍的干凈整潔，及時(shí)打掃衛(wèi)生。試驗(yàn)期間每日2次觀察產(chǎn)蛋鴨的采食情況與健康情況。

表1　各試驗(yàn)組飼糧組成及營養(yǎng)水平(風(fēng)干基礎(chǔ))

預(yù)混料由揚(yáng)州市揚(yáng)大飼料廠提供。

1.4　測定指標(biāo)及方法

1.4.1生產(chǎn)性能測定

試驗(yàn)期間每天定時(shí)收集各重復(fù)的鴨蛋，并記錄蛋的數(shù)量、質(zhì)量和破(軟)蛋數(shù)，以周統(tǒng)計(jì)各組各重復(fù)飼料飼喂量，每天記錄各組各重復(fù)死亡或淘汰的鴨數(shù)。計(jì)算平均日采食量、平均日產(chǎn)蛋質(zhì)量、料蛋比、產(chǎn)蛋率、破(軟)蛋率等。

1.4.2樣品采集

試驗(yàn)結(jié)束，每重復(fù)選取2只鴨單獨(dú)稱質(zhì)量后頸部放血處死。開腹后迅速采集肝臟和腹脂樣，分裝于2 mL凍存管中，立即放于液氮罐中快速冷凍并于–80 ℃保存，用于基因表達(dá)的測定；采集鴨盲腸內(nèi)容物于無菌管中，立即置于液氮中快速冷凍，以備微生物多樣性測定；采集肝臟、左側(cè)胸肌和腿肌樣品放于封口袋中，于–20 ℃的冰箱中保存，以備檢測脂肪含量。

1.4.3粗脂肪含量的測定

將肝臟、胸肌和腿肌解凍后制備成風(fēng)干樣品，再將樣品研細(xì)，然后按照GB 5009.6—2016《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品中脂肪的測定》中的索氏提取法測定樣品中脂肪的含量。每個(gè)樣品重復(fù)3次。結(jié)果以風(fēng)干樣中的脂肪含量表示。

1.4.4脂肪代謝相關(guān)基因表達(dá)水平測定

為了解脂肪代謝相關(guān)基因的表達(dá)水平，測定肝臟和腹脂脂肪酸合成酶基因()、脂蛋白脂肪酶基因()、脂肪組織甘油三酯水解酶基因()、過氧化物酶增殖物激活受體基因()的表達(dá)水平。采用TRI zol? Plus RNA Purification Kit試劑(Invitrogen，貨號(hào)12183)提取肝臟和脂肪組織總RNA。使用商業(yè)試劑盒Super Script? Ⅲ First–Strand Synthesis Super Mix for qRT–PCR(Invitrogen，貨號(hào)11752–050)將總RNA逆轉(zhuǎn)錄為cDNA。以β–肌動(dòng)蛋白基因()為內(nèi)標(biāo)，使用商業(yè)試劑盒Power SYBR? Green PCR Master Mix(Roche，貨號(hào)4913914001)，采用qRT–PCR法(Quantstudio多重實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀，Life Technologies)定量分析目標(biāo)基因和內(nèi)標(biāo)基因。引物序列見表2。PCR反應(yīng)體系包括cDNA 1.0 μL、SDW 8.0 μL、Power SYBR? Green Master Mix 10.0 μL、Forward Primer (10 μmol/L) 0.5 μL、Reverse Primer(10 μmol/L) 0.5 μL，總體積為20 μL。PCR反應(yīng)每個(gè)樣品重復(fù)3次。PCR熱循環(huán)過程為95 ℃預(yù)變性1 min；PCR擴(kuò)增40個(gè)循環(huán)階段為95 ℃變性15S，63 ℃退火和延伸25 s；溶解曲線階段為55℃逐漸升溫到95 ℃。結(jié)果以各基因的相對(duì)表達(dá)量表示，采用2△△法計(jì)算。

表2　實(shí)時(shí)PCR引物和條件

1.4.5盲腸內(nèi)容物微生物的測定

盲腸內(nèi)容物微生物測定委托上海美吉生物醫(yī)藥科技有限公司完成。測序后進(jìn)行生物信息分析，對(duì)序列進(jìn)行操作分類單元(OTU)聚類，并進(jìn)行物種注釋、相對(duì)豐度分析及微生物α多樣性指數(shù)計(jì)算。詳細(xì)過程參見牟怡曉等[8]的方法。

1.5　數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析

運(yùn)用SPSS 20.0進(jìn)行單因素方差分析，選用Duncan法進(jìn)行多重比較。方差非齊性或非正態(tài)分布的顯著性分析，采用非參數(shù)檢驗(yàn)Kruskal–Wallis單因素ANOVA(樣本)檢驗(yàn)方法。

2　結(jié)果與分析

2.1　發(fā)酵飼料對(duì)產(chǎn)蛋番鴨生產(chǎn)性能的影響

由表3可知，飼喂不同水平發(fā)酵飼料后產(chǎn)蛋番鴨的產(chǎn)蛋率、平均蛋質(zhì)量、平均日產(chǎn)蛋質(zhì)量和料蛋比各組間的差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(>0.05)；與對(duì)照組相比，4%、6%和8%發(fā)酵飼料組破(軟)蛋率顯著(<0.05)降低。

表3　飼喂不同水平發(fā)酵飼料的產(chǎn)蛋番鴨的生產(chǎn)性能

同列不同字母示組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(<0.05)。

2.2　發(fā)酵飼料對(duì)產(chǎn)蛋番鴨肝臟和肌內(nèi)脂肪含量的影響

由表4可知，飼喂不同水平發(fā)酵飼料后產(chǎn)蛋番鴨的肝臟、胸肌和腿肌脂肪含量各組間的差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(>0.05)。

表4　飼喂不同水平發(fā)酵飼料的產(chǎn)蛋番鴨肝臟和肌內(nèi)脂肪含量

2.3　發(fā)酵飼料對(duì)產(chǎn)蛋番鴨脂肪代謝相關(guān)基因表達(dá)的影響

由表5可知：與對(duì)照組相比，2%和4%發(fā)酵飼料組產(chǎn)蛋番鴨肝臟基因的相對(duì)表達(dá)量均顯著(0.05)增加，8%發(fā)酵飼料組產(chǎn)蛋番鴨肝臟基因的相對(duì)表達(dá)量顯著(<0.05)增加，發(fā)酵飼料組產(chǎn)蛋番鴨肝臟基因的表達(dá)量無顯著(>0.05)變化；4%、6%和8%發(fā)酵飼料添加組產(chǎn)蛋番鴨腹脂基因的相對(duì)表達(dá)量顯著(<0.05)降低，發(fā)酵飼料組產(chǎn)蛋番鴨腹脂和基因的相對(duì)表達(dá)量均未有顯著(>0.05)變化，但腹脂基因的相對(duì)表達(dá)量有增加的趨勢(=0.07)。

表5　飼喂不同水平發(fā)酵飼料的產(chǎn)蛋番鴨肝臟和腹脂脂肪代謝相關(guān)基因的表達(dá)水平

同列不同字母示組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(<0.05)。

2.4　發(fā)酵飼料對(duì)產(chǎn)蛋番鴨盲腸微生物的影響

從表6可知，4%發(fā)酵飼料組產(chǎn)蛋番鴨盲腸內(nèi)容物微生物Sobs指數(shù)顯著(<0.05)高于6%添加組的，且Shannon指數(shù)顯著(<0.05)高于其他各組的；Simpson、Ace指數(shù)和Chao指數(shù)各組間差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(>0.05)。

表6　飼喂不同水平發(fā)酵飼料的產(chǎn)蛋番鴨盲腸內(nèi)容物菌群的α多樣性指數(shù)

同列不同字母示組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(<0.05)。

由圖1可知，從門水平上分析，厚壁菌門(Firmicutes)、擬桿菌門(Bacteroidetes)、放線菌門(Actinobacteria)、脫鐵桿菌門(Deferribacterota)等4大類細(xì)菌為各組產(chǎn)蛋番鴨盲腸內(nèi)容物中相對(duì)豐度較高的菌門，且以厚壁菌門和擬桿菌門占比最高。經(jīng)統(tǒng)計(jì)分析各試驗(yàn)組在各菌門水平上的差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(>0.05)。由圖2可知，屬水平上，擬桿菌屬()、理研菌科RC9腸道群(Rikenellaceae_RC9_gut_group)、罕見小球菌屬()以及粘螺旋菌屬()為各組產(chǎn)蛋番鴨盲腸內(nèi)容物占比較高菌屬。試驗(yàn)各組產(chǎn)蛋番鴨盲腸內(nèi)容物差異菌屬的相對(duì)豐度見表7。由表7可知，與對(duì)照組相比，添加2%和8%發(fā)酵飼料后顯著(<0.05)降低了unclassified_o__ Bacteroidales的相對(duì)豐度；添加4%發(fā)酵飼料后顯著(<0.05)提高了norank_f__Oscillospiraceae的相對(duì)豐度；添加2%發(fā)酵飼料后顯著(<0.05)提高了norank_f__Erysipelotrichaceae的相對(duì)豐度。

圖1　飼喂不同水平發(fā)酵飼料的產(chǎn)蛋番鴨盲腸內(nèi)容物菌群門的相對(duì)豐度

圖2　飼喂不同水平發(fā)酵飼料的產(chǎn)蛋番鴨盲腸內(nèi)容物菌群屬的相對(duì)豐度

同列不同字母示組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(<0.05)。

3　結(jié)論與討論

由于發(fā)酵底物的種類和質(zhì)量、發(fā)酵技術(shù)、飼養(yǎng)管理?xiàng)l件、研究目標(biāo)以及試驗(yàn)設(shè)計(jì)等多方面影響，發(fā)酵飼料對(duì)動(dòng)物生產(chǎn)性能影響的研究結(jié)果并不完全一致[9]。研究表明，發(fā)酵飼料對(duì)產(chǎn)蛋家禽的生產(chǎn)性能具有積極的效果，其可提高產(chǎn)蛋率[10]和日產(chǎn)蛋重[4,6]，降低料蛋比[4,6,10]。本研究中，添加發(fā)酵飼料僅改善了產(chǎn)蛋后期番鴨的破(軟)蛋率，但未影響其他生產(chǎn)性能指標(biāo)。發(fā)酵飼料對(duì)破(軟)蛋率的改善作用可能是由于發(fā)酵飼料中低的pH值(4.29)有利于降低胃腸道酸度，從而更有利于鈣的利用，因而改善了蛋殼的質(zhì)量，降低了鴨蛋的破(軟)蛋率。

微生物發(fā)酵飼料含有益生菌以及發(fā)酵底物產(chǎn)生的多種活性代謝物，如功能性低聚糖、有機(jī)酸、小肽、磷酸膽堿、左旋肉堿等，從而可改變動(dòng)物體的脂質(zhì)代謝[11]。周露[12]在文昌雞基礎(chǔ)飼糧中添加30%的發(fā)酵混合飼料，降低了文昌雞的肝脂率。陳麗艷[13]在肉仔雞飼糧中添加不同含量的乳酸桿菌培養(yǎng)物，當(dāng)添加量達(dá)0.3%和0.5%時(shí)顯著降低了肉仔雞肝脂率。以上研究表明，發(fā)酵飼料和乳酸桿菌培養(yǎng)物可降低肝脂率和腹脂率。本研究中，添加發(fā)酵飼料后產(chǎn)蛋番鴨肝脂率未有顯著變化，這可能與發(fā)酵飼料用量、發(fā)酵飼料中益生菌的活菌數(shù)及種類等因素有關(guān)。

梁天柱等[14]給廣西三黃雞飼喂添加10%混菌發(fā)酵的混合飼料(菌種為雙歧桿菌、乳酸菌、芽孢桿菌、光合細(xì)菌、酵母菌等，底物為噴漿玉米皮、玉米粉、大豆粕等)的飼糧顯著提高了其腿肌肌內(nèi)脂肪含量。王朝陽等[15]給黃羽肉雞基礎(chǔ)飼糧添加5%和8%發(fā)酵棉粕，提高了肉雞胸肌和腿肌脂肪含量。ZHAO等[16]研究發(fā)現(xiàn)，添加丁酸梭菌提高了試驗(yàn)42 d時(shí)肉仔雞胸肌和腿肌肌內(nèi)脂肪含量，而添加屎腸球菌卻未產(chǎn)生影響。本研究中，不同水平發(fā)酵飼料未對(duì)產(chǎn)蛋番鴨肌內(nèi)脂肪含量產(chǎn)生顯著影響，這與LIU等[17]在北京母鴨基礎(chǔ)飼料中添加0.3%發(fā)酵銀杏葉(凝結(jié)芽孢桿菌發(fā)酵)的試驗(yàn)結(jié)果一致。不同試驗(yàn)中發(fā)酵飼料對(duì)肌內(nèi)脂肪含量影響的差異可能與發(fā)酵底物、發(fā)酵飼料添加水平以及發(fā)酵用菌種等不同有關(guān)。

本研究中，發(fā)酵飼料對(duì)脂肪代謝相關(guān)基因表達(dá)的影響與發(fā)酵飼料用量有關(guān)。添加4%發(fā)酵飼料后產(chǎn)蛋番鴨肝臟、、基因的相對(duì)表達(dá)量均顯著增加，而腹脂基因的相對(duì)表達(dá)量顯著下降，表明4%發(fā)酵飼料提高了產(chǎn)蛋鴨肝臟脂肪合成相關(guān)基因的表達(dá)。聶存喜等[18]給黃羽肉雞飼喂酵母發(fā)酵棉粕，也觀察到64日齡黃羽肉雞肝臟的表達(dá)顯著上升。周露[12]給文昌雞飼喂0%～30%發(fā)酵飼料卻未影響脂肪組織基因的相對(duì)表達(dá)量。朱年華等[19]和LIU等[17]分別給肉仔雞和母鴨飼喂乳酸菌混合發(fā)酵液和發(fā)酵銀杏葉后，前者顯著降低了和基因的相對(duì)表達(dá)量，后者顯著降低了基因的相對(duì)表達(dá)量。由上可見，發(fā)酵飼料對(duì)脂肪代謝相關(guān)基因表達(dá)量的影響并無一致的結(jié)論，其結(jié)果與發(fā)酵飼料作用的動(dòng)物生理階段、發(fā)酵底物、發(fā)酵用微生物種類及數(shù)量等有關(guān)。對(duì)脂肪合成相關(guān)基因表達(dá)具有調(diào)控作用的發(fā)酵飼料可能是通過發(fā)酵飼料中的微生物(如乳酸桿菌類[11])，及發(fā)酵底物中的化合物(如黃酮類物質(zhì)[14])對(duì)脂肪代謝相關(guān)基因的表達(dá)進(jìn)行調(diào)控，從而調(diào)節(jié)脂肪酸合成與分解的速度。本研究中4%發(fā)酵飼料組產(chǎn)蛋番鴨脂肪合成相關(guān)基因表達(dá)量的提高，一方面可能與發(fā)酵飼料的使用有關(guān)；另一方面也可能與在飼糧中添加了較高的飼用油脂有關(guān)。飼糧中脂肪含量在一定范圍內(nèi)增加可以提高脂肪合成酶相關(guān)基因，如[20]和[21]的表達(dá)水平。本研究中，發(fā)酵飼料使用后脂肪合成相關(guān)基因表達(dá)量提高了，但是肝臟和肌內(nèi)脂肪含量卻未發(fā)生變化，這是否表明發(fā)酵飼料僅在轉(zhuǎn)錄水平對(duì)脂肪代謝相關(guān)基因進(jìn)行調(diào)控，而對(duì)其蛋白質(zhì)的翻譯沒有影響，這仍有待進(jìn)一步研究。

通過營養(yǎng)結(jié)構(gòu)或飼料組成改變腸道菌群是家禽生產(chǎn)中針對(duì)腸道微生物的有效療法[22–23]。本研究中，4%發(fā)酵飼料組產(chǎn)蛋番鴨盲腸微生物的Shannon指數(shù)顯著高于其他各組的，表明添加發(fā)酵飼料改善了產(chǎn)蛋番鴨盲腸微生物的多樣性；4%發(fā)酵飼料組產(chǎn)蛋番鴨盲腸內(nèi)容物中norank_f__Oscillospiraceae的相對(duì)豐度顯著高于其他各組的，norank_f__Oscillo- spiraceae出現(xiàn)于食草動(dòng)物的腸道，可高效利用植物葉子和根中的碳水化合物和低聚糖[24]，這表明發(fā)酵飼料可提高產(chǎn)蛋番鴨盲腸對(duì)碳水化合物和低聚糖的利用能力。4%發(fā)酵飼料組鴨脂肪合成相關(guān)基因表達(dá)量的增加可能也與發(fā)酵飼料使用后norank_f__ Oscillospiraceae相對(duì)豐度的提高有關(guān)。發(fā)酵飼料對(duì)鴨腸道微生物的改善作用，一方面可能直接得益于發(fā)酵飼料中的有益微生物，如乳酸菌、芽孢桿菌等；另一方面可能得益于發(fā)酵過程中產(chǎn)生的微生物代謝產(chǎn)物或菌體成分等，這些因子使得發(fā)酵飼料可能具有“后生元”特性[25]。本研究中，當(dāng)發(fā)酵飼料添加比例達(dá)到8%時(shí)顯著降低了unclassified_o_Bacteroi- dales的相對(duì)豐度。田威龍等[26]研究發(fā)現(xiàn)，屬水平unclassified_o_Bacteroidales在高飼料轉(zhuǎn)化率組豬中富集，可作為潛在的生物標(biāo)志物。這表明發(fā)酵飼料的添加量高達(dá)一定水平后，由于微生物與宿主之間對(duì)營養(yǎng)物質(zhì)的競爭增加可能會(huì)導(dǎo)致飼料轉(zhuǎn)化效率降低。

綜上所述，飼糧中適量添加發(fā)酵飼料，能降低產(chǎn)蛋番鴨破(軟)蛋率，調(diào)節(jié)產(chǎn)蛋番鴨脂肪合成相關(guān)基因表達(dá)水平，提高腸道菌群的多樣性并在屬水平改善腸道菌群結(jié)構(gòu)。在本研究條件下，產(chǎn)蛋番鴨日糧中發(fā)酵飼料適宜添加水平為4%。

[1] SUGIHARTO S，TURRINI Y，ISROLI I，et al．Fermented feed as a potential source of natural antioxidants for broiler chickens：a mini review[J]. Agriculturae Conspectus Scientificus，2019，84(4)：313–318．

[2] MISSOTTEN J A，MICHIELS J，DEGROOTE J，et al．Fermented liquid feed for pigs：an ancient technique for the future[J]．Journal of Animal Science and Biotech- nology，2015，6(1)：4．

[3] ZHU F H，ZHANG B B，LI J，et al．Effects of fermented feed on growth performance，immune response，and antioxidant capacity in laying hen chicks and the underlying molecular mechanism involving nuclear factor-κB [J]．Poultry Science，2020，99(5)：2573–2580．

[4] 阮棟，劉建高，陳偉，等．發(fā)酵飼料對(duì)蛋鴨產(chǎn)蛋性能、蛋品質(zhì)、腸道消化酶活性及免疫功能的影響[J]．動(dòng)物營養(yǎng)學(xué)報(bào)，2019，31(12)：5740–5749．

[5] YAN J S，ZHOU B，XI Y M，et al．Fermented feed regulates growth performance and the cecal microbiota community in geese[J]．Poultry Science，2019，98(10)：4673–4684．

[6] ENGBERG R M，HAMMERSH?J M，JOHANSEN N F，et al．Fermented feed for laying hens：effects on egg production，egg quality，plumage condition and compo- sition and activity of the intestinal microflora[J]．British Poultry Science，2009，50(2)：228–239．

[7] GUO X，XIA X，TANG R，et al．Development of a real-time PCR method for Firmicutes and Bacteroidetes in faeces and its application to quantify intestinal population of obese and lean pigs[J]．Letters in Applied Microbiology，2008，47(5)：367–373．

[8] 牟怡曉，張歡，馬聰慧，等．不同添加量枸杞副產(chǎn)物對(duì)檸條錦雞兒發(fā)酵特性及微生物多樣性的影響[J]．動(dòng)物營養(yǎng)學(xué)報(bào)，2021，33(9)：5152–5161．

[9] XU B C，LI Z，WANG C，et al．Effects of fermented feed supplementation on pig growth performance：ameta-analysis[J]．Animal Feed Science and Technology，2020，259：114315．

[10] XU F Z，LI L M，LIU H J，et al．Effects of fermented soybean meal on performance，serum biochemical parameters and intestinal morphology of laying hens[J]．Journal of Animal and Veterinary Advances，2012，11(5)：649–654．

[11] 趙茂臻，梁曦，張喆，等．植物乳桿菌F3–2聯(lián)合甘露低聚糖通過上調(diào)短鏈脂肪酸水平抑制PPARγ改善小鼠肥胖[J]．食品與發(fā)酵工業(yè)，2021，47(23)：78–82．

[12] 周露．發(fā)酵飼料對(duì)育肥期文昌雞脂肪代謝的影響[D]．?？冢汉Ｄ洗髮W(xué)，2020．

[13] 陳麗艷．乳酸桿菌制劑對(duì)肉仔雞脂肪和蛋白質(zhì)代謝的影響[J]．黑龍江畜牧獸醫(yī)，2007(1)：47–48．

[14] 梁天柱，梁光哲，梁志東，等．發(fā)酵飼料對(duì)廣西三黃雞生長性能、屠宰性能和肉品質(zhì)的影響[J]．飼料研究，2021，44(4)：26–30．

[15] 王朝陽，孫煥林，馮江鑫，等．枯草芽孢桿菌發(fā)酵棉粕對(duì)黃羽肉雞屠宰性能和肉品質(zhì)的影響[J]．黑龍江畜牧獸醫(yī)，2016(15)：102–104．

[16] ZHAO X，GUO Y M，GUO S S，et al．Effects ofandon growth performance，lipid metabolism，and cecal microbiota of broiler chickens[J]．Applied Microbiology and Biotechnology，2013，97(14)：6477–6488．

[17] LIU X Y，CAO G J，ZHOU J L，et al．The effects of-fermented and non-fermentedon abdominal fat deposition and meat quality of Peking duck[J]．Poultry Science，2017，96(7)：2264–2273．

[18] 聶存喜，張文舉，劉艷豐，等．酵母菌發(fā)酵棉粕對(duì)黃羽肉雞肌肉主要脂肪酸組成的影響[J]．中國家禽，2015，37(7)：25–28．

[19] 朱年華，張日俊，張保全，等．乳酸桿菌培養(yǎng)物對(duì)肉雞脂肪代謝相關(guān)基因表達(dá)的影響研究[C]//中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)動(dòng)物營養(yǎng)學(xué)分會(huì)．第六次全國飼料營養(yǎng)學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集．楊凌：中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)動(dòng)物營養(yǎng)學(xué)分會(huì)，2010：549．

[20] 葛曉可，李璐，馬曉嬌，等．不同油脂水平日糧添加膽汁酸對(duì)肉雞肝臟及其脂代謝的影響[J]．江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)，2019，47(21)：236–241．

[21] VIDAL-PUIG A，JIMENEX-LI?AN M，LOWELL B B，et al．Regulation of PPAR gamma gene expression by nutrition and obesity in rodents[J]．Journal of Clinical Investication，1996，97(11)：2553–2561．

[22] 朱春紅，陶志云，劉宏祥，等．鴨不同腸段內(nèi)菌群結(jié)構(gòu)分析與擬桿菌分布研究[J]．畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào)，2020，51(12)：3001–3012．

[23] YANG H，LYU W T，LU L Z，et al．Biogeography of microbiome and short-chain fatty acids in the gastrointestinal tract of duck[J]．Poultry Science，2020，99(8)：4016–4027．

[24] HUANG C，GE F，YAO X X，et al．Microbiome and metabolomics reveal the effects of different feeding systems on the growth and ruminal development of yaks[J]．Frontiers in Microbiology，2021，12：682989．

[25] SZMIGIEL I，KONKOL D，KORCZY?SKI M，et al．Changes in the microbial composition of the cecum and histomorphometric analysis of its epithelium in broilers fed with feed mixture containing fermented rapeseed meal[J]．Microorganisms，2021，9(2)：360．

[26] 田威龍，司景磊，莫家遠(yuǎn)，等．基于16S rRNA測序探究杜洛克豬飼料利用率與腸道菌群的關(guān)系[J]．中國畜牧雜志，2021，57(6)：146–153．

Effects of fermented feed on body tissue fat content, fat metabolism-related gene expression and cecal microbiota of laying muscovy ducks

REN Shanmao，TAO Yong，JIANG Hui，WANG Jian*

(College of Animal Science and Technology, Jiangsu Agri-animal Husbandry Vocational College, Taizhou, Jiangsu 225300, China)

A total of 750 37-week-old black-feathered muscovy ducks of laying period were randomly and evenly divided into 5 groups with 5 replicates in each group. Ducks in the control group were fed the basal diet, and ducks in the experimental groups were fed the diet supplemented with 2%, 4%, 6% and 8% fermented feed, respectively. The pre-trial period was 7 days, and the trial period was 37 days. The effects of fermented feed on production performance, body fat content, fat metabolism-related gene expression and cecal microbiota of laying muscovy ducks were explored. The results showed that there were no statistically significance in egg production rate, average egg mass, daily egg mass and feed-to-egg ratio between the different levels of fermented feed groups(>0.05), but addition of 4%, 6% and 8% fermented feed to the diet significantly(<0.05) reduced broken(soft) rate of the laying muscovy ducks. There were no statistically significance in fat contents in liver, breast muscle and leg muscle of ducks with different levels of fermented feed(>0.05). Compared with the control group,andgenes expression in the liver of the ducks within the 2% and 4% fermented feed groups andgene expression in the liver of the duck within the 8% fermented feed group were significantly higher than those within the control group(<0.05);gene expression in the abdominal fat of the ducks within the 4%, 6% and 8% fermented feed groups was significantly lower than that within the control group(<0.05); andgene expression in abdominal fat tended to increase(=0.07). Sobs index of the 4% fermented feed group was significantly higher than that of the 6% group(<0.05), and Shannon index of the 4% fermented feed group was significantly higher than that of other groups(<0.05). 8% fermented feed significantly decreased the relative abundance of unclassified_o_Bacteroidales (<0.05), and 4% fermented feed significantly increased the relative abundance of norank_f_Oscillospiraceae (<0.05). In conclusion, fermented feed couldimprove broken(soft) rate and regulate the expression of fat synthesis-related genes. Meanwhile it could increase the diversity of intestinal microbiota and improve the structure of intestinal microbiota at the genus level. The optimal addition level of fermented feed in the diet was 4%.

black-feathered muscovy duck; fermented feed; production performance; fat; gene expression; cecal microbiota

S834.5

A

1007–1032(2023)05–0588–08

任善茂，陶勇，江慧，王健．發(fā)酵飼料對(duì)產(chǎn)蛋番鴨體組織脂肪含量和脂肪代謝相關(guān)基因表達(dá)及盲腸微生物的影響[J]．湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版)，2023，49(5)：588–595．

REN S M，TAO Y，JIANG H，WANG J．Effects of fermented feed on body tissue fat content, fat metabolism-related gene expression and cecal microbiota of laying muscovy ducks[J]．Journal of Hunan Agricultural University(Natural Sciences)，2023，49(5)：588–595．

http://xb.hunau.edu.cn

2022–05–12

2023–10–20

江蘇省農(nóng)業(yè)科技自主創(chuàng)新資金項(xiàng)目(CX(18)1004)；泰州市科技支撐計(jì)劃(農(nóng)業(yè))項(xiàng)目(TN201918)

任善茂(1976—)，女，江蘇海安人，博士研究生，副教授，主要從事豬禽營養(yǎng)與飼糧資源開發(fā)研究，124604031@qq.com；*通信作者，王健，教授，主要從事家禽的遺傳育種與繁殖研究，tzwjian@126.com

10.13331/j.cnki.jhau.2023.05.013

責(zé)任編輯：鄒慧玲

英文編輯：柳正