基于RNA測序的成纖維樣滑膜細(xì)胞中類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎相關(guān)性核心基因分析▲

張明媚 張艷艷 劉劍橋 劉 睿 黃 榮 程 瑤 劉曉闖

(1 安徽中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院藥學(xué)部,安徽省合肥市 230031;2 安徽中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院,安徽省合肥市 230012)

類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(rheumatoid arthritis,RA)為較為常見的慢性自身免疫性疾病,滑膜過度增生、血管翳形成為其主要病理特征,可引起骨骼與軟骨損傷,最終造成關(guān)節(jié)功能障礙[1]。目前RA的發(fā)病機(jī)制尚未完全明確,可能與遺傳、感染及免疫功能紊亂等因素密切相關(guān)[2]。研究表明,成纖維樣滑膜細(xì)胞(fibroblast-like synoviocytes,FLSs)是促進(jìn) RA 發(fā)生、發(fā)展的一個重要因素,其可在滑膜組織和骨組織中大量增殖、侵襲,并分泌炎癥因子,加重關(guān)節(jié)軟骨的損傷[3]。因此,進(jìn)一步探索FLSs中與RA相關(guān)的關(guān)鍵靶點,有助于闡明RA的發(fā)病機(jī)制,為RA的診斷和治療提供新思路。

轉(zhuǎn)錄組學(xué)是指從轉(zhuǎn)錄水平上對某一特定時段內(nèi)的細(xì)胞或組織進(jìn)行研究,從整體水平上反映基因轉(zhuǎn)錄和轉(zhuǎn)錄調(diào)控規(guī)律的學(xué)科,能反映同一基因在既定條件或疾病狀態(tài)下的表達(dá)差異[4]。RNA測序技術(shù)即轉(zhuǎn)錄組測序技術(shù),目前其已成為研究基因結(jié)構(gòu)、功能及表達(dá)的重要方法[5-6]。本研究利用RNA測序技術(shù)分析FLSs中與RA相關(guān)的差異表達(dá)基因,篩選RA的生物標(biāo)志物,為明確RA發(fā)生的分子機(jī)制提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實驗材料

1.1.1 實驗動物:雄性SD大鼠30只,7～8周齡,體重(250±10)g,由濟(jì)南朋悅實驗動物繁育有限公司提供[動物許可證號:SCXK(魯)20190003]。將大鼠飼養(yǎng)于溫度為22 ℃～26 ℃、光照和黑暗12 h交替循環(huán)的環(huán)境中,給予標(biāo)準(zhǔn)飲食和自來水喂養(yǎng)。本研究動物實驗已獲得安徽中醫(yī)藥大學(xué)動物實驗倫理委員會批準(zhǔn)(批準(zhǔn)文號:AHUCM-Rats-2021005)。

1.1.2 實驗試劑:弗氏完全佐劑購自上海麥克林生化科技股份有限公司(批號:C13083712),蘇木素染液、伊紅染液(醇溶)、番紅固綠染色液購自安徽欣樂生物技術(shù)有限公司(批號:09232110、09122109、10212110),DMEM、D-Hank′s緩沖液購自武漢賽維爾生物科技有限公司(批號:20210407、GP2006080873),Ⅱ型膠原酶、3%牛血清白蛋白購自北京索萊寶科技有限公司(批號:130Y023、605U051),DAPI、0.2% Triton X-100溶液、Cy3標(biāo)記山羊抗兔IgG(H+L)、抗熒光淬滅封片液購自上海碧云天生物技術(shù)有限公司(批號:030222220525、050222220721、021622220711、030722220713),波形蛋白抗體購自Affinity Biosciences Ltd.(批號:6619511),TRIzol試劑盒購自Life Technologies公司(批號:391305),反轉(zhuǎn)錄試劑盒Prime ScriptTMRT reagent Kit with gDNA Eraser購自TaKaRa公司(批號:ALG2080A),實時熒光定量PCR試劑盒購自蘇州近岸蛋白質(zhì)科技股份有限公司(批號:05246001),VAHTS Universal V6 RNA-seq Library Prep Kit(南京諾唯贊生物科技股份有限公司,批號:NR604)。

1.1.3 實驗儀器:細(xì)胞培養(yǎng)箱購自Thermo Fisher Scientific公司(型號:3111),光學(xué)顯微鏡、正置熒光顯微鏡購自O(shè)LYMPUS公司(型號:CX41、CX43),生物組織包埋機(jī)購自孝感市亞光醫(yī)用電子技術(shù)有限公司(型號:YB-7LF),紫外分光光度計購自Thermo Fisher Scientific公司(型號:NanoDrop 2000),生物分析儀購自Agilent Technologies公司(型號:Agilent 2100),NovaSeq 6000測序系統(tǒng)購自Illumina公司,PCR儀購自杭州晶格科學(xué)儀器有限公司(型號:K960)。

1.2 動物模型建立 經(jīng)過1周的適應(yīng)性飼養(yǎng),將30只大鼠按照隨機(jī)數(shù)字表法分為正常組和模型組,每組15只。于模型組大鼠右后足趾皮內(nèi)注射0.1 mL弗氏完全佐劑,構(gòu)建佐劑性關(guān)節(jié)炎大鼠模型(經(jīng)典RA模型)。于正常組大鼠相同位置注射等量無菌生理鹽水。以造模當(dāng)日為第0日,于第20日處死大鼠,每組各取3只大鼠的膝關(guān)節(jié)組織用于病理組織學(xué)檢測,各取9只大鼠的滑膜組織用于原代FLSs的獲取,各取3只大鼠的滑膜組織用于實時熒光定量PCR實驗。

1.3 病理組織學(xué)檢測

1.3.1 HE染色法觀察膝關(guān)節(jié)組織形態(tài)學(xué)變化:將經(jīng)4%多聚甲醛固定后的膝關(guān)節(jié)組織使用脫鈣液進(jìn)行脫鈣,依次行酒精梯度脫水、二甲苯透化、浸蠟、包埋后,常規(guī)制作切片。經(jīng)二甲苯脫蠟、酒精脫水后,使用流水沖洗干凈。經(jīng)蘇木素染液染色5 min后,使用流水沖洗干凈。經(jīng)1%鹽酸酒精分化處理后,使用流水沖洗干凈。置于1%伊紅染液中染色2 min,使用流水沖洗干凈。經(jīng)酒精脫水、二甲苯透化,使用中性樹膠封片。在光學(xué)顯微鏡下觀察膝關(guān)節(jié)組織形態(tài)學(xué)改變。

1.3.2 番紅固綠染色法觀察膝關(guān)節(jié)軟骨組織破壞情況:取膝關(guān)節(jié)組織石蠟切片,用二甲苯脫蠟后行酒精梯度脫水,使用流水沖洗干凈。在蘇木素染液中浸泡5 min,使用流水沖洗干凈。經(jīng)酸性分化液分化15 s后,流水沖洗干凈。在固綠染色液內(nèi)浸染10 min后,使用流水沖洗干凈,再用弱酸溶液洗滌多余染液。用番紅染色液染色10 min后,使用流水沖洗干凈。經(jīng)酒精脫水、二甲苯透化后,使用中性樹膠封片。在光學(xué)顯微鏡下觀察膝關(guān)節(jié)軟骨組織破壞情況。

1.4 原代FLSs的獲取

1.4.1 細(xì)胞的培養(yǎng)和傳代:采用組織塊培養(yǎng)法從滑膜組織中分離FLSs。解剖大鼠滑膜組織,去除脂肪、血管和纖維組織,用D-Hank′s緩沖液反復(fù)沖洗后切碎,然后在37 ℃培養(yǎng)箱內(nèi)用Ⅱ型膠原酶消化2 h。用含20%胎牛血清的DMEM潤濕培養(yǎng)瓶瓶底后,將小塊滑膜組織均勻鋪于培養(yǎng)瓶底部,將培養(yǎng)瓶瓶底朝上并置于37 ℃培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)2 h,使組織塊貼壁。然后在培養(yǎng)瓶中加入1～2 mL含20%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基,使組織塊浸沒于培養(yǎng)基中,將培養(yǎng)瓶瓶底朝下并置于培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。細(xì)胞貼壁24 h后更換培養(yǎng)液,此后每2 d換液1次,直至細(xì)胞爬出鋪滿瓶底。待爬出細(xì)胞較多后進(jìn)行傳代培養(yǎng),選擇第3代細(xì)胞進(jìn)行后續(xù)實驗,并通過倒置顯微鏡觀察FLSs形態(tài),FLSs典型形態(tài)為紡錘形或長梭形[7]。

1.4.2 細(xì)胞的免疫熒光鑒定:取第3代FLSs,以4%多聚甲醛固定30 min,使用PBS洗滌5 min后,在0.2% Triton X-100溶液中孵育30 min,再使用PBS洗滌5 min。然后用3%牛血清白蛋白室溫封閉20 min。加入一抗波形蛋白抗體(稀釋比為1∶200),于4 ℃孵育過夜。次日使用PBS洗滌3次,5 min/次,用二抗Cy3標(biāo)記山羊抗兔IgG(H+L)(稀釋比為1∶500)室溫孵育30 min,棄二抗,滴加DAPI進(jìn)行染核,用抗熒光淬滅封片劑封片。在熒光顯微鏡下觀察,紅色熒光代表波形蛋白染色陽性,提示染色陽性的細(xì)胞為FLSs。

1.5 RNA測序

1.5.1 RNA提取和測序文庫建立:采用TRIzol試劑提取正常組和模型組FLSs的總RNA。使用紫外分光光度計測定RNA的純度及濃度,采用生物分析儀評估RNA完整性。按照VAHTS Universal V6 RNA-seq Library Prep Kit的說明書制備測序文庫。

1.5.2 測序和數(shù)據(jù)處理:使用NovaSeq 6000測序系統(tǒng)對測序文庫進(jìn)行測序,獲取測序數(shù)據(jù)。采用fastp軟件對測序數(shù)據(jù)進(jìn)行預(yù)處理[8],對原始讀段進(jìn)行過濾后獲得潔凈讀段。使用HISAT2軟件將潔凈讀段與大鼠參考基因組進(jìn)行比對[9],獲得正常組和模型組FLSs的基因表達(dá)情況,用于后續(xù)數(shù)據(jù)分析。

1.6 差異表達(dá)基因的篩選及富集分析

1.6.1 差異表達(dá)基因的篩選:利用R軟件(3.2.0版本)的DESeq2包對正常組和模型組FLSs的基因表達(dá)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析[10],得到P值與差異倍數(shù)(fold change,FC)。以P<0.05和|log2FC|>0.585的基因作為差異表達(dá)基因[11]。

1.6.2 差異表達(dá)基因的功能和通路富集分析:在oebiotech云平臺(https://cloud.oebiotech.com/)采用超幾何分布算法對差異表達(dá)基因進(jìn)行基因本體論(Gene Ontology,GO)功能富集分析和京都基因與基因組百科全書(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)通路富集分析,其中GO功能富集分析包括生物過程、細(xì)胞組分及分子功能。以P<0.05且錯誤檢出率(false discovery rate,FDR)<0.05認(rèn)為具有統(tǒng)計學(xué)意義。

1.6.3 差異表達(dá)基因的基因集富集分析:本研究使用GSEA_MSigDB數(shù)據(jù)庫(https://www.gsea-msigdb.org)的基因集“c5:geneontology(GO)genesets(c5.all.v7.4.symbols.gmt)”作為預(yù)定義基因集[12],通過GSEA軟件(4.0.2版本)進(jìn)行基因集富集分析(Gene Set Enrichment Analysis,GSEA)檢測差異表達(dá)基因富集的基因集的GO功能富集情況。以|NES|>1(NES為規(guī)范化富集分?jǐn)?shù))、P<0.05及FDR<0.25認(rèn)為具有統(tǒng)計學(xué)意義。

1.7 核心基因的篩選 將差異表達(dá)基因?qū)?STRING數(shù)據(jù)庫(https://string-db.org/),設(shè)定最低交互分?jǐn)?shù)為0.4,建立蛋白-蛋白相互作用(protein-protein interaction,PPI)網(wǎng)絡(luò)。然后利用 Cytoscape軟件進(jìn)行可視化處理,并使用 cytoHubba 插件計算節(jié)點的連接度,選擇連接度排名前 10 的基因為核心基因。

1.8 差異表達(dá)基因的實時熒光定量PCR驗證 采用TRIzol試劑提取正常組及模型組滑膜組織中的總RNA樣本,根據(jù)反轉(zhuǎn)錄試劑盒說明書將RNA反轉(zhuǎn)錄為cDNA,然后進(jìn)行實時熒光定量PCR反應(yīng)。反應(yīng)體系總體積為10 μL,包括cDNA模版1 μL、2×SYBR Green Mixture 5 μL、正反向引物(10 μmol/L)各1 μL、RNase Free Water 2 μL。反應(yīng)條件:95 ℃預(yù)變性1 min;95 ℃變性20 s,60 ℃退火/延伸1 min,共40次循環(huán)。以β-actin為內(nèi)參基因,采用2-ΔΔCt法計算部分差異表達(dá)基因的mRNA相對表達(dá)量,包括基質(zhì)金屬蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMP)9、Src家族酪氨酸激酶(Src family tyrosine kinase,FGR)、載脂蛋白B(apolipoprotein B,APOB)。設(shè)置3個復(fù)孔,實驗重復(fù)3次。引物序列見表1。

表2 兩組大鼠滑膜組織MMP9、FGR、APOB的mRNA相對表達(dá)量比較(x±s)

1.9 統(tǒng)計學(xué)分析 采用GraphPad Prism 7.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析。計量資料以(x±s)表示,組間比較采用兩獨立樣本t檢驗。以P<0.05為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 兩組大鼠膝關(guān)節(jié)組織形態(tài)學(xué)變化 HE染色結(jié)果顯示,正常組大鼠膝關(guān)節(jié)滑膜組織結(jié)構(gòu)完整且無破壞,細(xì)胞排列均勻整齊,未見FLSs過度增殖和血管翳形成的現(xiàn)象;模型組大鼠膝關(guān)節(jié)滑膜組織呈柵欄樣,FLSs明顯增殖,可見血管翳形成,見圖1。

圖1 兩組大鼠膝關(guān)節(jié)組織HE染色結(jié)果(×100)

2.2 兩組大鼠膝關(guān)節(jié)軟骨組織破壞情況 正常組大鼠膝關(guān)節(jié)軟骨組織表面平滑完整,軟骨基質(zhì)及軟骨細(xì)胞均勻紅染,且軟骨細(xì)胞數(shù)量較多,潮線較整齊;模型組大鼠膝關(guān)節(jié)軟骨組織表面缺損嚴(yán)重,軟骨基質(zhì)及軟骨細(xì)胞紅染明顯減少,軟骨細(xì)胞數(shù)量減少,潮線不完整且模糊,見圖2。綜合HE染色結(jié)果和番紅固綠染色結(jié)果可知,觀察組大鼠膝關(guān)節(jié)組織發(fā)生病理性改變,且膝關(guān)節(jié)軟骨組織破壞嚴(yán)重,表明造模成功,可用于后續(xù)實驗。

圖2 大鼠膝關(guān)節(jié)組織番紅固綠染色結(jié)果(×100)

2.3 FLSs分離培養(yǎng)及鑒定結(jié)果 傳代培養(yǎng)至第3代,FLSs增殖迅速,呈長梭狀。正常組FLSs與模型組FLSs形態(tài)大致相同,但模型組FLSs增殖速度明顯快于正常組,見圖3。免疫熒光檢測結(jié)果顯示大部分細(xì)胞呈紅色熒光,波形蛋白染色陽性,證明分離的細(xì)胞為FLSs,可以用于后續(xù)實驗,見圖4。

圖3 FLSs的傳代培養(yǎng)情況(×200)

圖4 兩組FLSs的免疫熒光鑒定結(jié)果(×400)

2.4 差異表達(dá)基因的篩選結(jié)果 共篩選出227個差異表達(dá)基因,包括133個上調(diào)基因和94個下調(diào)基因,見圖5。

圖5 差異表達(dá)基因的火山圖

2.5 差異表達(dá)基因的富集分析 (1)GO功能富集分析結(jié)果顯示,差異表達(dá)基因主要富集在平滑肌細(xì)胞增殖負(fù)向調(diào)控、巨噬細(xì)胞源性泡沫分化的正向調(diào)控、缺氧反應(yīng)等生物過程,以及脂肪顆粒、線粒體內(nèi)膜和抑制性突觸等細(xì)胞組分,主要涉及鈣離子結(jié)合、蛋白質(zhì)酪氨酸激酶活性及激素受體結(jié)合等分子功能,見圖6。(2)KEGG通路富集分析顯示,差異表達(dá)基因共富集在19條信號通路中,主要包括脂肪細(xì)胞中脂肪分解的調(diào)節(jié)、中性粒細(xì)胞胞外陷阱形成、血管平滑肌收縮等信號通路,見圖7。(3)GSEA結(jié)果顯示,差異表達(dá)基因富集的基因集主要涉及防衛(wèi)反應(yīng)、G蛋白偶聯(lián)受體信號通路、活動分子傳感器,見圖8。

圖6 差異表達(dá)基因的GO功能富集分析柱狀圖

圖7 差異表達(dá)基因的KEGG通路富集分析氣泡圖

圖8 差異表達(dá)基因的GSEA結(jié)果

2.6 核心基因的篩選結(jié)果 將差異表達(dá)基因?qū)隨TRING數(shù)據(jù)庫構(gòu)建PPI網(wǎng)絡(luò),該網(wǎng)絡(luò)共有196個節(jié)點和969條邊,見圖9。將該P(yáng)PI網(wǎng)絡(luò)數(shù)據(jù)導(dǎo)入Cytoscape軟件,去除游離基因后獲得包含62個基因的可視化PPI網(wǎng)絡(luò)圖,見圖10。使用 cytoHubba 插件計算節(jié)點的連接度,按連接度由大到小排序,排名前10的差異表達(dá)基因為MMP9、血管緊張素原(angiotensinogen,AGT)、組蛋白乙酰賴氨酸閱讀器(histone acetyl-lysine reader,CECR2)、FGR、組蛋白簇1 H3家族成員C(histone cluster 1 H3 family member C,Hist1h3c)、APOB、鈣黏著蛋白3(cadherin 3,CDH3)、MMP15、組蛋白簇2 H4(histone cluster 2 H4,Hist2h4)、B型利鈉肽(natriuretic peptide B,NPPB),即為核心基因,見圖11。

圖9 差異表達(dá)基因的PPI網(wǎng)絡(luò)圖

圖10 除游離基因后的可視化PPI網(wǎng)絡(luò)圖

圖11 PPI網(wǎng)絡(luò)中的核心基因

2.7 差異表達(dá)基因的實時熒光定量PCR驗證結(jié)果 模型組大鼠滑膜組織中MMP9、FGR、APOB的mRNA表達(dá)量高于正常組(P<0.05),與RNA測序結(jié)果一致。

3 討 論

RA是一種慢性炎癥性關(guān)節(jié)疾病,可對患者身心造成不良影響,深入研究其分子機(jī)制具有重要意義。本研究利用RNA測序技術(shù)在FLSs中篩選出與RA相關(guān)的差異表達(dá)基因共227個,包括133個上調(diào)基因和94個下調(diào)基因,并對這些差異表達(dá)基因進(jìn)行GO功能富集分析,結(jié)果顯示其主要富集于平滑肌細(xì)胞增殖負(fù)向調(diào)控、巨噬細(xì)胞源性泡沫分化的正向調(diào)控、缺氧反應(yīng)等生物過程,這可能與RA患者關(guān)節(jié)腔內(nèi)FLSs大量增殖,釋放大量炎癥因子,造成關(guān)節(jié)腔缺氧有關(guān)[13-14]。在分子功能方面,差異表達(dá)基因主要涉及鈣離子結(jié)合、蛋白質(zhì)酪氨酸激酶活性及激素受體結(jié)合等,這可能與RA患者骨質(zhì)破壞所致骨代謝失衡,或FLSs細(xì)胞轉(zhuǎn)化及信號傳導(dǎo)有關(guān)[15-16]。而差異表達(dá)基因主要涉及脂肪顆粒、線粒體內(nèi)膜和抑制性突觸等細(xì)胞組分,這可能與RA患者機(jī)體代謝失調(diào),或炎癥因子的釋放有關(guān)[17-18]。此外,KEGG通路富集分析結(jié)果顯示,差異表達(dá)基因主要富集在脂肪細(xì)胞中脂肪分解的調(diào)節(jié)、中性粒細(xì)胞胞外陷阱形成、血管平滑肌收縮等信號通路中。有學(xué)者發(fā)現(xiàn),FLSs的脂肪分解與RA滑膜增生和炎癥相關(guān),說明調(diào)節(jié)FLSs的脂肪分解對RA具有潛在的治療作用[19]。中性粒細(xì)胞胞外陷阱形成信號通路是調(diào)控炎癥的關(guān)鍵信號通路,其可釋放一系列炎癥介質(zhì)以驅(qū)動RA的進(jìn)展[20]。有研究表明,在RA患者中,炎癥可影響血管平滑肌的收縮,且RA與心血管疾病的發(fā)展密切相關(guān)[21]。本研究的GSEA結(jié)果表明,差異表達(dá)基因富集的基因集主要涉及防衛(wèi)反應(yīng)、G蛋白偶聯(lián)受體信號通路、活動分子傳感器。有學(xué)者發(fā)現(xiàn),炎癥小體可激活對宿主防衛(wèi)反應(yīng)至關(guān)重要的炎癥相關(guān)信號通路,進(jìn)而導(dǎo)致自身炎癥和自身免疫性疾病[22]。鞘氨醇1-磷酸(sphingosine-1-phosphate,S1P)是一種生物活性脂質(zhì)分子,與G蛋白偶聯(lián)鞘氨醇1-磷酸受體(sphingosine-1-phosphate receptor,S1PR)結(jié)合后可以介導(dǎo)炎癥反應(yīng),而靶向干預(yù)S1P-S1PR軸可以減輕RA患者的病理性炎癥[23]。由此可見,差異表達(dá)基因從不同途徑調(diào)控炎癥反應(yīng),從而參與RA的發(fā)生、發(fā)展。

本研究共篩選出10個核心基因,分別為MMP9、AGT、CECR2、FGR、Hist1h3c、APOB、CDH3、MMP15、Hist2h4、NPPB。MMP9是一種明膠酶,在細(xì)胞的增殖及遷移、免疫炎癥等生理和病理過程中起著重要的作用。透明質(zhì)酸是關(guān)節(jié)滑液的主要成分,在關(guān)節(jié)中起著重要的潤滑作用。有學(xué)者發(fā)現(xiàn),RA患者與滑液中的透明質(zhì)酸濃度降低,MMP9活性增加,說明滑液中透明質(zhì)酸濃度的降低可能與MMP9活性的升高有關(guān)[24]。研究顯示,在RA中,MMP9參與FLSs的增殖,并促進(jìn)FLSs的介導(dǎo)炎癥反應(yīng)和軟骨降解[25]。以上研究表明MMP9基因表達(dá)上調(diào)與機(jī)體的炎癥反應(yīng)過程密切相關(guān),MMP9基因可能是治療RA的重要靶點。FGR是一種酪氨酸激酶,參與調(diào)控多種生物學(xué)過程,如細(xì)胞增殖、細(xì)胞遷移、抗凋亡等。近年有研究表明,FGR可能與炎癥性免疫性疾病的發(fā)展密切相關(guān)[26]。還有研究顯示,在造血系統(tǒng)中缺乏Src家族激酶(FGR、HCK和LYN)的小鼠完全免受炎癥作用的影響,說明Src家族激酶可以誘發(fā)體內(nèi)炎癥反應(yīng)[27]。因此FGR可能為RA的治療靶點之一,這或可為開發(fā)RA的新治療策略提供了新思路。APOB是由一種由肝臟合成的載脂蛋白,能夠?qū)⑷槊宇w粒、低密度脂蛋白、極低密度脂蛋白運載轉(zhuǎn)移到血管中。APOB基因或其調(diào)控區(qū)域發(fā)生突變,可導(dǎo)致低β脂蛋白血癥和高膽固醇血癥等疾病[28]。研究表明,APOB通過與表達(dá)于免疫細(xì)胞表面的烯醇酶1相互作用來增強(qiáng)炎癥反應(yīng),從而加重關(guān)節(jié)炎[29]。因此,靶向干預(yù)APOB及其與烯醇酶1的相互作用或許可以作為治療RA等炎癥性疾病的新策略。盡管目前極少或尚未有研究表明AGT、CECR2、CDH3、Hist1h3c、Hist2h4、MMP15和NPPB這7個核心基因與RA相關(guān),但其可能是RA發(fā)病機(jī)制研究的新靶點,今后尚需進(jìn)一步行動物實驗研究和臨床研究加以證實。

綜上所述,MMP9、FGR、APOB等核心基因可能通過參與調(diào)控免疫炎癥反應(yīng)來參與RA的發(fā)生和發(fā)展,這些靶點或許可為RA的臨床治療提供新思路。