苑彬

（河北省廊坊市安次區(qū)農(nóng)業(yè)農(nóng)村局 河北廊坊 065000）

免疫接種作為防控動(dòng)物疫病的主要手段，在實(shí)際養(yǎng)殖過(guò)程中起著至關(guān)重要的作用。動(dòng)物免疫抗體檢測(cè)是檢驗(yàn)動(dòng)物免疫接種效果，了解動(dòng)物體內(nèi)抗體水平，掌握抗體消長(zhǎng)規(guī)律的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)技術(shù)。在動(dòng)物疫病防控和流行病調(diào)查等工作中發(fā)揮著重大作用。然而，實(shí)際生產(chǎn)和檢測(cè)過(guò)程中涉及動(dòng)物免疫抗體檢測(cè)的環(huán)節(jié)眾多，除了臨床疫苗接種工作外，實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)的各個(gè)環(huán)節(jié)也是影響動(dòng)物免疫抗體檢測(cè)結(jié)果的重要方面。為有效提高動(dòng)物免疫抗體檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性，本文對(duì)影響動(dòng)物免疫抗體檢測(cè)結(jié)果的因素進(jìn)行了具體分析總結(jié)，并探尋了有效的應(yīng)對(duì)之策，以期能為動(dòng)物免疫抗體檢測(cè)工作提供參考。

1 生理因素影響

疫苗免疫效果的好壞與動(dòng)物的身體狀況、飼養(yǎng)水平、母源抗體水平、健康狀況以及遺傳因素等均有著密切的相關(guān)性。研究表明，動(dòng)物機(jī)體的免疫應(yīng)答在一定程度上受遺傳因素的影響，不同品種、不同種群或者同一群體的不同個(gè)體對(duì)同一抗原的免疫刺激所產(chǎn)生的抗體強(qiáng)弱各不相同[1]。此外，母源抗體水平的干擾以及部分免疫抑制類疾病的產(chǎn)生都會(huì)對(duì)動(dòng)物機(jī)體的免疫系統(tǒng)產(chǎn)生損傷，導(dǎo)致動(dòng)物機(jī)體免疫應(yīng)答能力下降，抗體水平不達(dá)標(biāo)。另外，日常的飼養(yǎng)管理水平的高低不僅會(huì)直接影響動(dòng)物的營(yíng)養(yǎng)狀況和健康狀況，同時(shí)也會(huì)對(duì)動(dòng)物機(jī)體的免疫力產(chǎn)生影響。動(dòng)物在飼養(yǎng)條件良好的條件下，體況良好，生長(zhǎng)迅速，抗病力較強(qiáng)；反之，飼養(yǎng)條件不達(dá)標(biāo)的情況下，動(dòng)物圈舍及環(huán)境中病原微生物含量巨大，動(dòng)物機(jī)體極易受到野毒侵襲，進(jìn)而干擾免疫抗體的產(chǎn)生，影響免疫檢測(cè)結(jié)果。部分資料表明，疫苗免疫前使用磺胺類、氯霉素類免疫抑制藥物也會(huì)影響動(dòng)物機(jī)體免疫應(yīng)答的產(chǎn)生，導(dǎo)致免疫抗體檢測(cè)結(jié)果不準(zhǔn)確[2]。因此，為防止此類現(xiàn)象的產(chǎn)生，在免疫接種前一周內(nèi)禁止飼喂除多維等抗應(yīng)激類藥物之外的其他化學(xué)藥物。

2 免疫因素影響

2.1 疫苗的選擇和存儲(chǔ)

疫苗是影響動(dòng)物免疫結(jié)果的首要因素，隨著世界生物技術(shù)領(lǐng)域的不斷發(fā)展，目前在動(dòng)物養(yǎng)殖生產(chǎn)過(guò)程中廣泛應(yīng)用的疫苗種類越來(lái)越多。但是，不同類型疫苗的使用、運(yùn)輸和存儲(chǔ)方法各不相同，比如：滅活苗的儲(chǔ)存條件是2～8 ℃，需要冷藏處理；減毒疫苗的最佳儲(chǔ)存條件是-15～-25 ℃之間，需要冷凍處理[3]。因此，要保證疫苗的性狀和效果，就必須要按照相應(yīng)的要求進(jìn)行儲(chǔ)存和運(yùn)輸，特別是夏季疫苗轉(zhuǎn)運(yùn)過(guò)程中必須注意降溫措施，可以使用冷藏車或者加入冰袋進(jìn)行降溫。此外，注意疫苗的甄別，市場(chǎng)上針對(duì)同一動(dòng)物疫病的疫苗種類眾多，廣大養(yǎng)殖戶在進(jìn)行疫苗選擇的過(guò)程中需結(jié)合本地流行毒株進(jìn)行有效甄別，選擇最適合本場(chǎng)的疫苗種類，切勿貪圖便宜。

2.2 免疫操作

正確的免疫操作步驟和方法是影響免疫效果的關(guān)鍵，為保證良好的免疫效果，首先要制定規(guī)范的操作流程，嚴(yán)格進(jìn)行免疫接種人員培訓(xùn)，保證接種環(huán)節(jié)流暢，接種部位合理，接種劑量充足，不漏免，不打飛針。其次，要加強(qiáng)疫苗配制環(huán)節(jié)的管理，對(duì)于干粉劑疫苗使用之前需先使用疫苗稀釋液進(jìn)行配置，配置比例務(wù)必嚴(yán)格按照使用說(shuō)明進(jìn)行，保證計(jì)算準(zhǔn)確，稀釋濃度合理。最后，為防止疫苗注射過(guò)程中造成傳染病的接觸傳播，通常會(huì)在接種前使用碘酊對(duì)注射部位進(jìn)行消毒，但在碘酊未干的情況下直接注射疫苗，碘酊則會(huì)跟隨針頭一同進(jìn)入動(dòng)物體內(nèi)，進(jìn)而干擾疫苗的免疫效果，進(jìn)而導(dǎo)致免疫抗體檢測(cè)結(jié)果不準(zhǔn)確[4]。

2.3 免疫程序

免疫程序?qū)?dòng)物疫苗免疫的時(shí)間、方式、次數(shù)及疫苗種類等進(jìn)行了詳細(xì)的計(jì)劃，合理的免疫程序是免疫成功的前提條件。實(shí)際生產(chǎn)過(guò)程中，免疫時(shí)間不合理，免疫次數(shù)不達(dá)標(biāo)，免疫方式不正確等，均會(huì)使疫苗的免疫效果大打折扣。因此，廣大養(yǎng)殖戶在制定免疫程序時(shí)務(wù)必要對(duì)當(dāng)?shù)氐囊卟×餍星闆r進(jìn)行詳細(xì)的調(diào)查，再結(jié)合本養(yǎng)殖場(chǎng)的實(shí)際情況及抗體消長(zhǎng)規(guī)律，進(jìn)行合理的免疫規(guī)劃，同時(shí)按照實(shí)際情況進(jìn)行細(xì)微調(diào)整，保證免疫程序的合理性和科學(xué)性[5]。

3 樣品采集因素

血液、尿囊液、組織液、胸腹腔積液、唾液、鼻腔分泌等送檢樣品，在采樣送檢的過(guò)程中，一旦操作不當(dāng)或者運(yùn)輸、保存條件不合格，均會(huì)造成樣本污染或者失效，進(jìn)而導(dǎo)致免疫抗體檢測(cè)結(jié)果出現(xiàn)偏差。尤其是血液樣品在送檢樣品中出現(xiàn)頻次最高，一旦處理不當(dāng)極易發(fā)生污染、溶血、腐敗等現(xiàn)象。因而，在采集血液樣本時(shí)務(wù)必注意不可劇烈震蕩，避免陽(yáng)光直射，運(yùn)輸過(guò)程中加冰袋，切記反復(fù)凍融，樣本到達(dá)實(shí)驗(yàn)室后盡早檢測(cè)，避免長(zhǎng)時(shí)間保存。此外，樣品采集時(shí)間與疫苗接種時(shí)間有一定的相關(guān)性，過(guò)早或過(guò)晚采集樣本都會(huì)對(duì)抗體檢測(cè)結(jié)果產(chǎn)生一定影響[6]。通常減毒疫苗的抗體產(chǎn)生時(shí)間早，而滅活疫苗產(chǎn)生抗體的時(shí)間較晚。在實(shí)際生產(chǎn)過(guò)程中送檢樣品的采集要根據(jù)疾病的發(fā)展規(guī)律和抗體消長(zhǎng)規(guī)律制定合理的采集時(shí)間，從而保證抗體檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。

4 實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)因素影響

4.1 檢測(cè)人員

實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)人員的操作水平和專業(yè)技術(shù)素養(yǎng)是保證免疫抗體檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確與否的關(guān)鍵所在。實(shí)驗(yàn)室內(nèi)無(wú)論是樣品登記，組織破碎，樣品提取還是技術(shù)檢測(cè)及其他各個(gè)環(huán)節(jié)都是由檢測(cè)人員具體操作完成的。部分檢測(cè)人員專業(yè)知識(shí)不扎實(shí)，對(duì)試驗(yàn)儀器和設(shè)備使用不熟練，責(zé)任性差，容易出現(xiàn)重復(fù)加樣、漏檢、加樣劑量不準(zhǔn)確，重復(fù)使用一次性試驗(yàn)耗材，樣品污染、檢測(cè)結(jié)果判斷不準(zhǔn)確等情況，這些都會(huì)對(duì)動(dòng)物免疫抗體檢測(cè)結(jié)果造成影響。要保證檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性，首先要保證人員的專業(yè)性和操作的熟練程度，上崗前對(duì)檢測(cè)技術(shù)人員進(jìn)行專業(yè)的技能和操作培訓(xùn)，使其熟練掌握相關(guān)的檢測(cè)方法和原理的同時(shí)，還要加強(qiáng)責(zé)任感和使命感的培養(yǎng)，樹立其高度的敬業(yè)精神和負(fù)責(zé)任的態(tài)度，從而保證其在工作中能過(guò)恪盡職守，認(rèn)真負(fù)責(zé)，避免因人為操作失誤出現(xiàn)的試驗(yàn)結(jié)果偏差。

4.2 檢測(cè)器械及耗材

實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)器械的靈敏度和準(zhǔn)確性，直接關(guān)系到免疫抗體檢測(cè)結(jié)果的真實(shí)性和可靠性。在實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行免疫抗體檢測(cè)的過(guò)程中，使用的檢測(cè)器械種類眾多：冰箱、恒溫培養(yǎng)箱，酶標(biāo)儀、分光光度計(jì)、核酸提取儀等抗體檢測(cè)常用儀器，在使用過(guò)程中要注意加強(qiáng)對(duì)儀器的維護(hù)和保養(yǎng)，定期對(duì)實(shí)驗(yàn)儀器進(jìn)行檢測(cè)和校準(zhǔn)。同時(shí)，嚴(yán)格按照實(shí)驗(yàn)室規(guī)定對(duì)儀器進(jìn)行清洗、消毒和保管保證實(shí)驗(yàn)儀器的精準(zhǔn)度。

對(duì)于實(shí)驗(yàn)過(guò)程中一定會(huì)用到的移液槍、移液管、容量瓶、吸頭、96 孔微型版、離心管等實(shí)驗(yàn)器具和耗材，要做到專區(qū)專用，一次性耗材不得重復(fù)利用。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后對(duì)操作臺(tái)面或者是器具等進(jìn)行擦拭和消毒，避免污染情況的產(chǎn)生，保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。

4.3 檢測(cè)試劑

目前，實(shí)驗(yàn)室常用的免疫抗體檢測(cè)方法主要包括血清學(xué)檢測(cè)和分子生物學(xué)檢測(cè)技術(shù)。這兩種檢測(cè)技術(shù)多采用成品試劑盒進(jìn)行，市場(chǎng)上可供選擇的商品化試劑盒種類繁多，雖然都已經(jīng)經(jīng)過(guò)農(nóng)業(yè)農(nóng)村部審核通過(guò)，但是不同廠家和不同批次的試劑盒產(chǎn)品質(zhì)量仍然存在一定的差異性。在實(shí)際檢測(cè)過(guò)程中，檢測(cè)人員要正視不同廠家試劑之間的差異性，嚴(yán)格按照試劑說(shuō)明書進(jìn)行使用和操作，堅(jiān)決不使用破損、污染、過(guò)期的試劑。

此外，為保證免疫抗體檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性，防止假陽(yáng)性現(xiàn)象的產(chǎn)生，在試劑配制過(guò)程中要嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作規(guī)則，保證加樣槍、蒸餾水、容器等的清潔，避免試劑被污染。同時(shí)，為避免因加樣次數(shù)頻繁造成的污染可能性，可以提前對(duì)試劑進(jìn)行預(yù)混合分裝，將所有的試劑小量分裝，減少加樣次數(shù)，并與其他物品分開(kāi)保存，放置于不同的冰箱內(nèi)，保證試劑的準(zhǔn)確性。

5 結(jié)語(yǔ)

綜上所述，影響動(dòng)物免疫抗體檢測(cè)結(jié)果的因素主要有生理因素、免疫因素、樣品因素和實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)因素等幾大方面。要避免上述因素對(duì)試驗(yàn)結(jié)果的影響，不僅要把控疫苗質(zhì)量，建立科學(xué)合理的免疫程序和免疫操作流程，還要加強(qiáng)采樣時(shí)間和采樣過(guò)程的管理，保證樣品的質(zhì)量。同時(shí)，加強(qiáng)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)人員的管理和培訓(xùn)，定期對(duì)試驗(yàn)設(shè)備進(jìn)行養(yǎng)護(hù)和校準(zhǔn)，選擇優(yōu)良的試驗(yàn)試劑，嚴(yán)格按照試劑說(shuō)明書進(jìn)行操作，確保動(dòng)物免疫抗體檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性，從而更好地指導(dǎo)生產(chǎn)。■