熊明 趙貞堯 李婷 謝九艷 葛媛媛 張晶晶 楊嘯 曹運奕 袁帥 龐玲玲 姚粟

關(guān)鍵詞：養(yǎng)寵人群，高通量測序，可培養(yǎng)技術(shù)，微生物多樣性

0 引言

隨著飼養(yǎng)寵物成為一種十分普遍的家庭生活方式，飼寵衛(wèi)生問題受到廣大養(yǎng)寵人關(guān)注。衣物作為寵物和養(yǎng)寵人互動接觸的重要媒介，可為微生物生長定植提供適宜環(huán)境，促使微生物在衣物—養(yǎng)寵人—寵物間的傳遞轉(zhuǎn)移。部分微生物可能對養(yǎng)寵人或?qū)櫸锝】诞a(chǎn)生不良影響，如導(dǎo)致異味、使衣物受損甚至引起皮膚感染等[1-2]。

微生物在紡織品上的定植過程主要包括粘附、增殖和形成生物膜三個階段[3]。Callewaer t、Sterndorff等人[4-5]的研究證實衣物的微生物群落組成可能與衣物材質(zhì)、外界環(huán)境、穿著者皮膚、洗滌方式等因素直接相關(guān)。其中，材質(zhì)成分差異導(dǎo)致的衣物理化性質(zhì)不同，可能是影響微生物在衣物定植的關(guān)鍵因素。天然纖維主要由植物源纖維素和動物源蛋白質(zhì)組成。棉、羊毛、絲綢等常見天然纖維織成的衣物自帶的天然營養(yǎng)物質(zhì)及吸附汗液、皮脂，均為微生物定植提供良好條件[6]。盡管材質(zhì)對衣物微生物影響已有大量研究，但針對特定人群，尤其是養(yǎng)寵人群，其衣物材質(zhì)對微生物群落結(jié)構(gòu)特征的影響仍不清晰。

為解析材質(zhì)對養(yǎng)寵人群衣物微生物群落結(jié)構(gòu)特征的影響，本研究擬通過高通量測序技術(shù)及傳統(tǒng)的分離培養(yǎng)法，探究棉、羊毛、絲綢材質(zhì)衣物中微生物種類及其分布規(guī)律。為后續(xù)紡織、日化、洗護家電等行業(yè)的抗菌技術(shù)實現(xiàn)專業(yè)化、細分化升級奠定基礎(chǔ)，同時為保障特定人群健康、構(gòu)建家庭環(huán)境健康微生態(tài)環(huán)境提供數(shù)據(jù)支撐。

1 材料與方法

1.1 樣品信息

本研究分別于2022年4月—6月開展樣品采集工作，選取來自南京、杭州兩座城市的6位養(yǎng)寵人，收集其棉質(zhì)、毛質(zhì)、絲質(zhì)居家衣物，共計18件。養(yǎng)寵人群特點，如調(diào)研參研者性別、飼養(yǎng)寵物種類、飼養(yǎng)寵物類型以及飼養(yǎng)寵物習(xí)慣等，詳見表1。

1.2 試劑與儀器

生物安全柜，ESCO；隔水式培養(yǎng)箱，上海一恒科學(xué)儀器有限公司；高速冷凍離心機，Eppendorf；P C R 儀，B i o m e t r a ；微量核酸蛋白分析儀，Biochrom；電泳儀 BIO-RAD；恒溫培養(yǎng)箱，上海一恒科學(xué)儀器有限公司；高壓滅菌鍋，HIRAYAMA；MALDI-TOF-MS儀，BRUKER；電泳儀，BIO-RAD；凝膠成像儀，BIO-RAD ；-20℃冰箱，海爾。

TSA培養(yǎng)基、R2A培養(yǎng)基均購于BD；強化梭菌培養(yǎng)基、MEA培養(yǎng)基、PDA培養(yǎng)基均購于北京陸橋技術(shù)股份有限公司；Dixon改良培養(yǎng)基購于青島海博生物技術(shù)有限公司；QIAamp Fast DNA StoolMini Kit購于QIAGEN；真菌DNA提取試劑盒（美國Omega Bio-Tek公司）；PCR引物，合成于生工生物工程（上海）股份有限公司；PCR MasterMix DL 2000Marker購于北京全式金生物技術(shù)有限公司。

1.3 實驗方法

1.3.1 樣品制備

根據(jù)文獻調(diào)研，選擇衣物與皮膚、外環(huán)境常接觸的領(lǐng)口、袖口、腋下作為采樣位點。參考《紡織品微生物檢測技術(shù)》[7]，選擇稱量法處理并制備待測樣品，具體步驟為：收集養(yǎng)寵人衣物樣品，用無菌剪刀在領(lǐng)口、袖口、腋下均勻剪下并準確稱取25 g衣物樣品，剪碎后加入到盛有225 mL的無菌生理鹽水的均質(zhì)袋中，用拍擊式振蕩器拍打1～2 min，充分混勻，獲得1∶10的樣品稀釋液。

1.3.2 分離培養(yǎng)方法

將1∶10的樣品稀釋液逐級梯度稀釋，制成1∶100、1∶1000的稀釋液。好氧細菌的分離培養(yǎng)：吸取三種稀釋梯度的稀釋液分別于TSA培養(yǎng)基平板、R2A培養(yǎng)基平板，均勻涂布，置于30℃和37℃下好氧培養(yǎng)2～3天；厭氧細菌的分離培養(yǎng)：吸取稀釋液涂布于強化梭菌培養(yǎng)基平板，置于30℃下厭氧培養(yǎng)7天；絲狀真菌及酵母菌的分離培養(yǎng)：將三種稀釋梯度的稀釋液分別涂布于PDA、MEA平板，置于20℃和28℃好氧培養(yǎng)3～7天，將稀釋液分別涂布于Dixon培養(yǎng)基平板，30℃好氧培養(yǎng)3～7天。培養(yǎng)過程中連續(xù)觀察，選取菌落形態(tài)不相同的菌株進行分離純化，記錄其形態(tài)特征。將選取的單菌落通過平板劃線法進行純化，得到單菌落后再次通過平板劃線法進行分離純化。

1.3.3 菌種鑒定

采用MALDI-TOF MS對細菌菌株進行初步鑒定。挑取純菌菌體并在300 μL超純水中混勻，向混勻的菌液中添加900 μL無水乙醇并充分振蕩，離心去上清，加入50 μL 70% 甲醇重懸菌體，加入50μL乙腈并反復(fù)吹打，混勻懸液；將制備的懸液按照MALDI-TOF MS 檢測規(guī)程進行鑒定分析，以確定菌株分類學(xué)地位。結(jié)果得分為2.00～3.00，表示菌株可鑒定至種水平；結(jié)果得分為1.70～1.99，表示菌株可鑒定至屬水平；結(jié)果得分低于1.69，表示鑒定結(jié)果不可信。

對于無法通過M A L DI-T OF MS方法得到可信鑒定結(jié)果的細菌菌株，提取細菌菌株的基因組DNA，采用細通用引物27F/1492R 擴增細菌的16SrDNA。PCR反應(yīng)條件：94℃，5 min，1 cycle；94℃，1 min；55℃，1 min；72℃，1.5 min，30 cycles；72℃，10min，1 cycle，得到的PCR產(chǎn)物送至生工生物工程（上海）股份有限公司進行測序。根據(jù)測序結(jié)果，將菌株的16S rRNA基因序列測序結(jié)果上傳至EzBioCloud服務(wù)器（www.ezbiocloud.net/identify）進行相似性搜索，與已發(fā)表的有效模式菌株進行比較，確定菌株的分類學(xué)地位。

對于真菌菌株，提取真菌菌株的基因組DNA，分別采用分子標記引物對絲狀真菌和酵母菌的核酸序列進行PCR擴增，絲狀真菌采用引物TIS5/ITS4，酵母菌采用引物NL1/NL4。PCR反應(yīng)條件：95℃ 5min；95℃ 30 s，55℃（TIS5/ITS4）或53℃（酵母菌）45 s，72℃ 45 s，共27個循環(huán)；72℃ 10 min。得到的PCR產(chǎn)物送至生工生物工程（上海）股份有限公司進行測序。根據(jù)測序結(jié)果，用菌株的26S rDNA和ITS基因作為靶序列，在GenBank數(shù)據(jù)庫中用BLAST程序搜索同源序列，挑選與靶序列最相近的參考菌株系列進行比較，獲得菌株的分類學(xué)地位。

1.3.4 樣品基因組提取與高通量測序

利用QIAamp DNA提取試劑盒，提取衣物樣品種的宏基因組DNA。以質(zhì)檢合格的宏基因組DNA為模板，使用16S rRNA基因V3/V4區(qū)和ITS基因的I T S1區(qū)通用引物進行PCR擴增。PCR擴增體系：5×FastPfu 緩沖液 8 μL，2.5 mmol/L dNTPs4 μL，10 μmol/L 上、下游引物各 2 μL，F(xiàn)astPfu 酶 1 μL，DNA 30 ng，ddH2O 補足至 40 μL。PCR 反應(yīng)條件：95℃ 5 min；95℃ 30 s，55℃ 45 s，72℃ 45 s，共27個循環(huán)；72℃ 10 min。使用 Agencourt AMPure XP 磁珠對 PCR 擴增產(chǎn)物進行純化并溶于洗脫緩沖液中，完成文庫的構(gòu)建。使用 Agilent 2100 Bioanalyzer 對構(gòu)建文庫的片段范圍及濃度進行檢測，檢測合格的文庫利用 HiSeq2500 平臺進行擴增子測序。

1.3.5 高通量測序結(jié)果分析

數(shù)據(jù)分析主要包括測序數(shù)據(jù)過濾、Tag拼接、OTU聚類、物種注釋和物種復(fù)雜度分析等流程。利用QIIME 2的DADA2方法對下機數(shù)據(jù)進行質(zhì)控，去除低質(zhì)量序列、嵌合體并得到Clean Data。使用軟件 FLASH（Fast Length Adjustment of Short reads，v1.2.11），利用重疊關(guān)系將雙末端測序得到的成對Reads 組裝成一條序列，得到高變區(qū)的Tags。利用軟件USEARCH（v7 .0.1090）將拼接好的Tags聚類為OTU，并采用RDP classifier貝葉斯算法對OTU 代表序列進行分類學(xué)分析，并在界、門、綱、目、科、屬和種水平統(tǒng)計分析各樣本的群落組成。利用QIIME2中q2-diversity方法進行Alpha多樣性分析，chao指數(shù)、shannon指數(shù)共同表征樣品的 Alpha 多樣性。

2 結(jié)果與分析

2.1 養(yǎng)寵人群衣物樣品α多樣性指數(shù)分析

Alpha多樣性指數(shù)用于估計特定生態(tài)系統(tǒng)內(nèi)物種多樣性，通常包括Chao1、ace、shannon、simpson和coverage指數(shù)。其中，以Chao1指數(shù)評估樣品物種總數(shù)，指數(shù)值越大，表示樣品物種豐富度越高。以shannon指數(shù)評估物種多樣性，shannon指數(shù)越大，表示樣品物種多樣性越高。

綜合上述兩項指數(shù)，分析養(yǎng)寵人群衣物微生物群落結(jié)構(gòu)。細菌方面，如圖1A所示，棉質(zhì)樣品Chao1指數(shù)平均值為757.4，高于絲質(zhì)樣品（平均值為662.0）和毛質(zhì)樣品（平均值為492.4），棉質(zhì)樣品具有較高的細菌物種總數(shù)；如圖1B所示，絲質(zhì)樣品Shannon指數(shù)平均值為3.56，高于毛質(zhì)樣品（平均值為3.25）和棉質(zhì)樣品（平均值為2.40），絲質(zhì)樣品具有較高的細菌物種多樣性。真菌方面，如圖1C所示，毛質(zhì)樣品Chao1指數(shù)平均值為353.2，高于棉質(zhì)樣品（平均值為296.5）和絲質(zhì)樣品（平均值為186.9），毛質(zhì)樣品具有較高的真菌物種總數(shù)；如圖1D所示，毛織樣品Shannon指數(shù)平均值為3.95，高于棉質(zhì)樣品（平均值為3.84）和絲質(zhì)樣品（平均值為3.50），毛質(zhì)樣品具有較高的真菌物種多樣性。

2.2 養(yǎng)寵人群衣物樣品微生物聚類分析

Beta多樣性用于比較不同組別樣品之間的多樣性，是衡量不同組別樣品間微生物組成相似度的指標。如圖2A所示，衣物細菌樣品在PCA圖中整體較為分散，棉質(zhì)衣物樣品中C1、C2、C3、C4分布位置較為集中，毛質(zhì)、絲質(zhì)衣物樣品在圖中分布較為分散，不同材質(zhì)衣物細菌的β多樣性沒有顯著性差異；如圖2B所示，部分衣物真菌樣品在PCA圖中較為集中，棉質(zhì)衣物樣品C4、C5，絲質(zhì)衣物樣品S1、S3、S4、S6分布位置較為集中，其余樣品在圖中分布較為分散，不同材質(zhì)衣物真菌的Beta多樣性沒有顯著性差異。

2.3 養(yǎng)寵人群衣物樣品微生物組成及豐度分析

進一步分析養(yǎng)寵人群衣物樣品的細菌組成及相對豐度。在門水平上，變形菌門（Proteobacteria）是三類材質(zhì)衣物樣品中的絕對優(yōu)勢菌門，在三類材質(zhì)衣物中占比分別73.1%、65.9%、51.7%。此外，厚壁菌門（Firmicutes）、放線菌門（Actinobacteria）及擬桿菌門（Bacteroidetes）也是三類衣物中的優(yōu)勢菌門。在屬水平上，統(tǒng)計相對豐度超過1%的細菌菌屬。棉質(zhì)衣物樣品中優(yōu)勢細菌菌屬為水棲桿菌屬（Enhydrobacter），其相對豐度達到47.2%，值得注意的是，對比序列相似性能夠發(fā)現(xiàn)，屬水平鑒定為水棲桿菌屬（Enhydrobacter）的OTU與奧斯陸莫拉菌（Moraxella osloensis）呈現(xiàn)100%的序列相似性。Yan等人[8]發(fā)現(xiàn)水棲桿菌屬（Enhydrobacter）在棉質(zhì)衣物中檢出的相對豐度高于聚酯和混紡衣物，由此推測水棲桿菌屬（Enhydrobacter）在棉質(zhì)衣物中可能具有較強的定植能力；馬賽菌屬（Massilia）、不動桿菌屬（A c i n e t o b a c t e r）及卟啉單胞菌屬（Porphyromonas）是毛質(zhì)衣物樣品中的優(yōu)勢細菌菌屬，相對豐度分別為16.3%、14.0%、7.7%；絲質(zhì)衣物樣品中不動桿菌屬（Acinetobacter）和葡萄球菌屬（Staphylococcus）是部分樣品的優(yōu)勢細菌菌屬，相對豐度分別為18.1%和5.2%。

分析養(yǎng)寵人群衣物樣品的真菌組成及相對豐度。在門水平上，子囊菌門（Ascomycota）在三類材質(zhì)衣物中的占比分別為39.1%、53.8%、59.7%，擔子菌門（Basidiomycota）在三類材質(zhì)衣物中的占比分別為60.0%、43.4%、38.9%，上述兩菌門為衣物樣品中的絕對優(yōu)勢菌門。在屬水平上，統(tǒng)計相對豐度超過1%的真菌菌屬。棉質(zhì)衣物樣品優(yōu)勢菌為節(jié)擔菌屬（Wallemia）、馬拉色氏菌屬（Malassezia）、枝孢霉屬（Cladosporium），其相對豐度分別在27.1%、11.8%、11.0%之間；毛質(zhì)衣物樣品優(yōu)勢菌屬為曲霉屬（Aspergillus）、節(jié)擔菌屬（Wallemia），其相對豐度分別在18.9%、15.9%；絲質(zhì)衣物樣品優(yōu)勢菌屬為曲霉屬（Aspergillus）、馬拉色氏菌屬（Malassezia）、枝孢霉屬（C l a do sp or iu m），其相對豐度分別在19.8%、12.1%、10.8%。

2.4 養(yǎng)寵人群衣物樣品可培養(yǎng)微生物分析

通過可培養(yǎng)方法探究養(yǎng)寵人群衣物中微生物多樣性，在屬水平上統(tǒng)計三組樣品微生物分離種類及數(shù)量。本研究共從18件衣物樣品中分離獲得172株微生物，其中細菌123株，涵蓋25個屬。在這123株細菌中，從棉質(zhì)衣物中分離獲得45株細菌，分屬于15個屬；從毛質(zhì)衣物中分離獲得40株細菌，分屬于14個屬；從絲質(zhì)衣物中分離獲得38株細菌，分屬于12個屬。

在屬水平上，棉質(zhì)衣物分離頻次較高的菌屬主要是芽胞桿菌屬（B a c i l l u s）、葡萄球菌屬（S t a p hylo c o c cu s）；毛質(zhì)衣物分離頻次較高的菌屬主要是葡萄球菌屬（S t a p hylo c o c c u s）、芽胞桿菌屬（Bacillus）、馬賽菌屬（Massillia）；絲質(zhì)衣物分離頻次較高的菌屬主要是葡萄球菌屬（Staphylococcus）、芽胞桿菌屬（Bacillus）、考克氏菌屬（Kocuria）。其中，芽胞桿菌屬（Bacillus）、馬賽菌屬（Massillia）是常見環(huán)境菌屬，葡萄球菌屬（Staphylococcus）、考克氏菌屬（Kocuria）則為人與寵物皮膚常駐菌屬。

在種水平上，一共有4 9株細菌鑒定至種水平。棉質(zhì)衣物分離頻次較高的菌種主要是人葡萄球菌（Staphylococcus hominis）；毛質(zhì)衣物分離頻次較高的菌種主要是人葡萄球菌（Staphylococcushominis）、沃氏葡萄球菌（Staphylococcus warneri）、藤黃微球菌（Micrococcus luteus）；絲質(zhì)衣物分離頻次較高的菌種主要是人葡萄球菌（Staphylococcushominis）、印度考克氏菌（Kocuria indica）。其中，人葡萄球菌（Staphylococcus hominis）廣泛分布于三類衣物樣品中，是人類皮膚常駐菌種，通常在腋窩微生物群中豐度較高。

真菌分離獲得49株，涵蓋25個屬。其中從棉質(zhì)衣物中分離獲得27株真菌，分屬于15個屬；從毛質(zhì)衣物中分離獲得14株真菌，分屬于10個屬；從絲質(zhì)衣物中分離獲得8株真菌，分屬于7個屬。

在屬水平上，棉質(zhì)衣物分離頻次較高的菌屬主要是曲霉屬（Aspergillus）、青霉屬（Penicillium）、短梗霉屬（Aureobasidium）；毛質(zhì)衣物分離頻次較高的菌屬主要是枝孢霉屬（Cladosporium）；絲質(zhì)衣物種無分離頻次較高的菌屬。其中，短梗霉屬（Aureobasidium）在自然條件下主要分布于植物的莖、葉、花、果實表面，巖石表面和沿海水域，也從亞麻質(zhì)衣物中分離獲得過曲霉屬（Aspergillus）、青霉屬（Penicillium）、枝孢霉屬（Cladosporium）從自然環(huán)境、人體皮膚、寵物皮膚中有分離報道。

3 討論

本研究收集棉、毛、絲質(zhì)衣物樣品，通過高通量測序及傳統(tǒng)培養(yǎng)法分析材質(zhì)差異對養(yǎng)寵人衣物微生物產(chǎn)生的影響。高通量測序結(jié)果顯示，材質(zhì)對衣物微生物群落結(jié)構(gòu)沒有顯著性影響，但水棲桿菌屬（Enhydrobacter）、葡萄球菌屬等部分菌屬（Staphylococcus）在不同材質(zhì)中的分布存在差異；通過傳統(tǒng)培養(yǎng)法，共收集獲得172株微生物，其中細菌123株，真菌49株。

衣物微生物受到穿著者影響，人類皮膚微生物群落可能直接影響衣物的微生物群落結(jié)構(gòu)，Y a n 等人[ 8 ]研究結(jié)果表明，水棲桿菌屬（Enhydrobacter）、微球菌屬（Micrococci）、丙酸桿菌屬（Propionibacterium）等皮膚常駐菌也是衣物中的高頻檢出菌種。本研究中棉、毛、絲質(zhì)衣物作為天然纖維織物均具有較好的保水性，微生物易通過代謝人類皮脂、汗液定植于織物中。高通量測序結(jié)果顯示，在門水平上三類衣物微生物群落結(jié)構(gòu)相似，變形菌門（Proteobacteria）是絕對優(yōu)勢細菌菌門，子囊菌門（Ascomycota）和擔子菌門（Basidiomycota）是絕對優(yōu)勢真菌菌門。相似的微生物群落結(jié)構(gòu)可能與樣品采集部位有關(guān)。本研究采集衣物的領(lǐng)口、腋下、袖口等部位，腋窩貼近衣物的腋下和袖口部位屬于皮膚潮濕區(qū)，變形菌門（Proteobacteria）在該區(qū)域占據(jù)絕對優(yōu)勢[9]，變形菌門（Proteobacteria）也是寵物貓、寵物狗皮膚中的常駐菌，廣泛分布于寵物貓、寵物狗的口腔、鼻孔、腋下、爪等部位[10- 11]。此外，子囊菌門（Ascomycota）、擔子菌門（Basidiomycota）是人類和寵物貓狗皮膚常駐真菌[12-14]。此前有研究顯示，飼養(yǎng)寵物可能為家庭成員引入更多的外源微生物，相對而言養(yǎng)狗的成年人皮膚細菌群落種類更加豐富[15]。寵物與養(yǎng)寵人的微生物群可能存在交互共享，衣物可能作為中間媒介參與了微生物的交互傳遞過程，衣物微生物群落構(gòu)成可能與兩者的微生物群密切相關(guān)。

衣物材質(zhì)不同可能導(dǎo)致微生物群落組成出現(xiàn)差異。棉質(zhì)織物主要由植物纖維組成，其中纖維素占比在9 0%以上，部分微生物通過外葡聚糖酶、內(nèi)切葡聚糖酶、β-葡萄糖苷酶等生物酶將纖維素逐級分解，纖維素降解可能導(dǎo)致纖維結(jié)構(gòu)斷裂、機械強度下降[5]。細菌方面，水棲桿菌屬（Enhydrobacter）作為人體皮膚常駐細菌在棉質(zhì)衣物中高豐度檢出，該菌屬可能通過內(nèi)切葡萄糖酶推動纖維素的糖化及利用過程[16]，這可能是其在棉質(zhì)衣物中高豐度定植的關(guān)鍵因素。其屬下的奧斯陸莫拉菌（Moraxella osloensis）在中國人群皮膚中高豐度富集，并在洗衣機、晾曬后衣物等人類相關(guān)環(huán)境中檢出。Kubota等[17]人推測可能產(chǎn)生4-甲基-3-己烯酸（4-methyl-3-hexenoic acid，4M3H）導(dǎo)致晾曬后衣物出現(xiàn)“濕抹布般的臭味”。副球菌屬（Paracoccus）在棉質(zhì)衣物中檢出豐度較高，該細菌菌屬廣泛分離于水、土壤、污泥等自然環(huán)境中。Jacksch等人[18]也發(fā)現(xiàn)副球菌屬具有在洗衣機中長期定植的潛力。副球菌屬（Paracoccus）通常被認為是纖維素降解模式菌，常用于農(nóng)業(yè)廢棄物降解[19]，其高效的纖維素水解能力可能是其在棉質(zhì)衣物上高豐度定植的關(guān)鍵。真菌方面，節(jié)擔菌屬（Wallemia）是棉質(zhì)衣物中檢出豐度最高的真菌菌屬，該菌屬在家庭空氣、家庭灰塵中廣泛分布。Yin等人[20]的研究證實節(jié)擔菌屬（Wallemia）可能通過高活性的纖維素酶促使纖維素降解并轉(zhuǎn)化為有機物，這可能有利于其在棉質(zhì)織物真菌群落中占據(jù)優(yōu)勢。

毛質(zhì)織物和絲質(zhì)織物主要由角蛋白組成，部分微生物通過角蛋白水解酶水解蛋白結(jié)構(gòu)中的二硫鍵，從而導(dǎo)致羊毛或蠶絲劣化[21]。細菌方面，馬賽菌屬（Massilia）在羊毛衣物中被高頻檢出。作為常見環(huán)境菌屬，馬賽菌屬（Massilia）常分布于水、土壤、巖石表層、空氣中。Michela等人[22]的研究證實，綿羊毛處理殘留物作為改良劑可能提高土壤中馬賽菌屬（Massilia）的豐度，證明潛在的羊毛纖維利用能力可能使其成為羊毛織物中的優(yōu)勢細菌。葡萄球菌屬（Staphylococcus）在絲質(zhì)衣物中被高頻檢出。作為人體皮膚常駐菌，葡萄球菌屬（Staphylococcus）在不同粒徑規(guī)格的絲素蛋白處理下具有較高的存活率[23]，推測葡萄球菌（Staphylococcus）可能通過角蛋白酶降解并利用絲素蛋白。真菌方面，相較棉質(zhì)織物，馬拉色氏菌屬（Malassezia）在毛質(zhì)和絲質(zhì)織物中豐度較高，作為人類、寵物皮膚常駐菌，除附著在衣物上的皮脂成分，羊毛和蠶絲中角蛋白基質(zhì)可能為馬拉色氏菌屬（Malassezia）在織物中的高豐度提供適宜的底物[24]。

結(jié)合養(yǎng)寵人群衣物生境特點，綜合分析衣物樣品中微生物群落結(jié)構(gòu)特點和分離菌株特性，重點關(guān)注衣物中具有潛在致病、致異味特性的菌株。參考《人間傳染病目錄》篩選潛在條件致病菌，本研究中分離獲得的具有潛在致病特性的條件致病菌，包括蠟樣芽胞桿菌（Bacillus cereus）[25]、表皮葡萄球菌（Staphylococcusepidermidis）、人葡萄球菌（Staphylococcus hominis）、曲霉屬（Aspergillus）[26]、枝孢霉屬（Cladosporium）[27]等；人體、衣物異味可能是由于部分微生物降解人體皮脂、汗液代謝產(chǎn)生的揮發(fā)性有機化合物（VOCs）導(dǎo)致，如異戊二酸、乙酸、4-甲基-3己烯酸等[17， 28]。在本研究中，分離獲得的具有潛在致異味特性的關(guān)鍵菌屬包括，表皮葡萄球菌（Staphylococcus epidermidis）、奧斯陸莫拉氏菌（Moraxella osloensis）[17， 29]、藤黃微球菌（Micrococcus luteus）[28]等。

4 結(jié)論

本研究針對養(yǎng)寵人群不同材質(zhì)衣物微生物群落結(jié)構(gòu)開展調(diào)研分析。高通量測序結(jié)果顯示，衣物材質(zhì)差異不會對養(yǎng)寵人群衣物的微生物物種總數(shù)和多樣性產(chǎn)生顯著性影響，變形菌門（Proteobacteria）是三類材質(zhì)衣物樣品中的絕對優(yōu)勢細菌菌門，子囊菌門（Ascomycota）和擔子菌門（Basidiomycota）是三類材質(zhì)衣物中的絕對優(yōu)勢真菌菌門；培養(yǎng)法共分離獲得172株微生物菌種，包括來自25個屬的細菌123株，25個屬的真菌49株。本研究首次通過高通量測序技術(shù)和培養(yǎng)法全面解析養(yǎng)寵人群不同材質(zhì)衣物微生物特征，分離獲得關(guān)鍵微生物菌種資源，為后續(xù)抗菌織物的開發(fā)及衣物健康洗護研究奠定了基礎(chǔ)。