■ 文｜東莞市動物疫病預(yù)防控制中心 張漢霞 鄒濰力 姚婉儀 彭家杰 殷三鴻 謝翠美 胡浩光 李希國＊

呋喃唑酮對人體有致癌、致畸副作用，農(nóng)業(yè)部公告第250號《食品動物中禁止使用的藥品及其他化合物清單》中規(guī)定硝基呋喃類藥物及其代謝物為禁用藥物，在動物性食品中不得檢出。呋喃唑酮屬于硝基呋喃類廣譜抗生素，曾被應(yīng)用于水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)。硝基呋喃類原型藥在生物體內(nèi)代謝迅速，其代謝產(chǎn)物因和蛋白質(zhì)結(jié)合而保持長時間穩(wěn)定，故常利用對其代謝物的檢測來反應(yīng)硝基呋喃類藥物的殘留狀況。

膠體金快速檢測技術(shù)是目前基層鎮(zhèn)街檢測機(jī)構(gòu)在水產(chǎn)品質(zhì)量安全監(jiān)測中最常用的方法，但在日常組織的能力比對中，仍存在基層檢測結(jié)果不合格的情況。本文通過隨機(jī)選取八個膠體金試劑盒產(chǎn)品，驗證了其在鳊魚、鯉魚、黃骨魚、草魚、南美白對蝦等不同基質(zhì)水產(chǎn)品中呋喃唑酮代謝物的檢測準(zhǔn)確率情況，進(jìn)而將其應(yīng)用于基層鎮(zhèn)街檢測機(jī)構(gòu)中，查找影響基層水產(chǎn)品中呋喃唑酮代謝物快速檢測準(zhǔn)確率的因素。實驗結(jié)果表明，樣品基質(zhì)、檢測人員技術(shù)能力、試劑盒質(zhì)量等因素是影響水產(chǎn)品中呋喃唑酮代謝物快速檢測準(zhǔn)確率的關(guān)鍵因素。

一、試劑盒現(xiàn)場驗證

1.材料與方法

在市場上隨機(jī)選取A、B、C、D、E、F、G、H等8個不同廠家的呋喃唑酮代謝物膠體金快速檢測試劑盒，并邀請廠家售后工程師參與現(xiàn)場驗證。在市場購置鳊魚、鯉魚、黃骨魚、草魚、南美白對蝦等五種不同基質(zhì)的水產(chǎn)品，按GB/T 30891-2014的要求制備成肉糜，經(jīng)液質(zhì)聯(lián)用法（農(nóng)業(yè)部783號公告-1-2006）檢測，呋喃唑酮代謝物含量低于0.5μg/kg的樣品作為空白樣品，按說明書為每個試劑盒稱取不同基質(zhì)樣品共20份，通過添加呋喃唑酮代謝物標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)后制備成陽性樣品，具體樣品情況見表1。

表1 驗證樣品情況

2.現(xiàn)場驗證結(jié)果

驗證現(xiàn)場由各試劑盒廠家工程師進(jìn)行實驗操作，在120min的現(xiàn)場驗證時間內(nèi)，A、B、C、D、F五個產(chǎn)品的驗證結(jié)果全部符合要求，且總檢測用時A＜B＜D＜F＜C。產(chǎn)品E未在規(guī)定時間內(nèi)完成檢測，G、H兩個產(chǎn)品均出現(xiàn)了假陰性的問題。具體驗證結(jié)果見表2。

二、基層能力比對

1.材料與方法

根據(jù)現(xiàn)場驗證情況，選取準(zhǔn)確率 100%且用時最短的A、B兩個產(chǎn)品用于全市基層檢測機(jī)構(gòu)的快檢能力比對，其中選取A產(chǎn)品的13家，選取B產(chǎn)品的16家，作為比對另有3家機(jī)構(gòu)選取了G產(chǎn)品。選取經(jīng)液質(zhì)法（農(nóng)業(yè)部783號公告-1-2006）上機(jī)檢測，呋喃唑酮代謝物含量低于0.5μg/kg的寶石鱸魚肉肉糜作為空白樣品，按試劑盒說明書要求分別稱取各自重量的樣品，通過添加呋喃唑酮代謝物標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)后，制備成濃度為1.0μg/kg的呋喃唑酮代謝物陽性樣品。各基層檢測機(jī)構(gòu)現(xiàn)場抽取4份樣品，帶回各自實驗室檢測，12小時內(nèi)上報檢測結(jié)果。

2.比對結(jié)果

每家基層檢測機(jī)構(gòu)4份樣品檢測結(jié)果均正確的記為“合格”。使用A產(chǎn)品的13家檢測機(jī)構(gòu)，比對合格率為92%,假陰性率2%，項目正確率98%。使用B產(chǎn)品的16家檢測機(jī)構(gòu)，比對合格率為75%，假陰性率34%，項目正確率66%。使用G產(chǎn)品的3家檢測機(jī)構(gòu)，比對合格率為33.3%，假陰性率42%，項目正確率58%。

三、結(jié)果分析與討論

1.樣品基質(zhì)的影響

現(xiàn)場驗證時選擇了鳊魚、鯉魚、黃骨魚、草魚、南美白對蝦等五種基質(zhì)樣品，基層能力比對時選擇了寶石鱸樣品，研究顯示寶石鱸魚肉的粗脂肪含量高達(dá)5.23%，是其他淡水魚的近2倍。試劑盒A產(chǎn)品采用了過色譜小柱的樣品凈化濃縮技術(shù)，可以較好的去除脂肪等雜質(zhì)；而試劑盒B產(chǎn)品采用了氮吹濃縮技術(shù)，需自行采取去油脂措施。因此在現(xiàn)場驗證環(huán)節(jié)針對五種脂肪含量低的樣品基質(zhì)，A、B兩個產(chǎn)品均能以100%的正確率通過驗證，而在基層的能力比對環(huán)節(jié)，因?qū)毷|魚肉樣品中過多的脂肪影響了產(chǎn)品的比對準(zhǔn)確性，其比對正確率分別下降為98%、66%，表明樣品基質(zhì)特別是脂肪含量影響快檢結(jié)果的準(zhǔn)確性。

2.檢測技術(shù)能力的影響

A、B兩個試劑盒產(chǎn)品雖然采取了不同的樣品濃縮技術(shù)，但針對技能熟練的檢測人員，能夠根據(jù)樣品實際情況采取相應(yīng)措施，同樣可以準(zhǔn)確的完成檢測。譬如在驗證環(huán)節(jié)采用的草魚樣品，根據(jù)《中國食物成分表》顯示其脂肪含量也高達(dá)5.2g/100g，但驗證環(huán)節(jié)由其廠家工程師進(jìn)行操作，對脂肪含量高的樣品提取液，自行采取了高速冷凍離心分層的方法，將脂肪層懸浮在離心管上層實現(xiàn)分離，并準(zhǔn)確吸取中間層有機(jī)溶液進(jìn)行后續(xù)的氮吹濃縮，因此在現(xiàn)場驗證環(huán)節(jié)B產(chǎn)品的正確率也達(dá)到100%，但在基層能力比對環(huán)節(jié)，因各基層檢測機(jī)構(gòu)人員能力層次不一，缺乏檢測經(jīng)驗，遇到問題樣品不能及時采取有效措施去除干擾，因此在該環(huán)節(jié)中B產(chǎn)品的比對正確率下降至66%，表明檢測人員技術(shù)能力影響結(jié)果的準(zhǔn)確性。

3.試劑盒質(zhì)量的影響

A-H八個試劑盒產(chǎn)品在現(xiàn)場驗證環(huán)節(jié)均由技能嫻熟的廠家工程師進(jìn)行實驗操作，其正確率能夠反應(yīng)出試劑盒質(zhì)量對結(jié)果準(zhǔn)確性的影響。其中G產(chǎn)品在驗證環(huán)節(jié)的正確率就僅為95%，而在基層比對環(huán)節(jié)中受各因素影響其正確率進(jìn)一步降低為58%，因此篩選質(zhì)量可靠的試劑盒產(chǎn)品是保證準(zhǔn)確率的主要因素。針對基層檢測機(jī)構(gòu)人員變動頻繁，缺乏實操經(jīng)驗，僅能按照說明書完成操作的情況，篩選A類抗干擾能力強(qiáng)的產(chǎn)品更為適合。

四、結(jié)論

提升基層檢測機(jī)構(gòu)水產(chǎn)品中呋喃唑酮代謝物的快檢準(zhǔn)確率，首先要選取經(jīng)過各級部門驗證合格的試劑盒產(chǎn)品，其次需要提高基層檢測人員的能力水平，制定定期培訓(xùn)機(jī)制，針對不同基質(zhì)樣品在提取、離心、凈化、濃縮等過程中易出現(xiàn)的問題點進(jìn)行實操培訓(xùn)講解，增強(qiáng)其識別雜質(zhì)含量異常樣品的檢測能力，防止因檢測結(jié)果誤判而導(dǎo)致問題樣品流入市場。