張秋萍，王春民，吳春霞，姚雪漫

（蘇州市疾病預防控制中心，江蘇 蘇州 215004）

鐵皮石斛、靈芝、黃芪等是人們生活中常用的中藥之一，屬于藥食同源類物質(zhì)。鐵皮石斛具有增強機能、提高免疫等功效，靈芝則補益安神。近年保健品產(chǎn)業(yè)蓬勃發(fā)展，鐵皮石斛、靈芝除了傳統(tǒng)藥用，在保健方面也呈現(xiàn)出優(yōu)越的抗氧化、抗衰老、補氣養(yǎng)血等功效[1-2]。隨著需求量的增大，人們?yōu)榱丝刂撇∠x害、提高產(chǎn)量，施用了多種農(nóng)藥。不規(guī)范的農(nóng)藥使用方式會對食品和藥品的質(zhì)量產(chǎn)生負面影響。因此，建立高效、快速、準確的多種類高通量方法對于藥食同源物質(zhì)中農(nóng)藥殘留的測定具有重要意義[3-4]。

常用的農(nóng)藥殘留測定方法有生物傳感器法、酶聯(lián)免疫法、氣相色譜法、液相色譜法以及色譜質(zhì)譜聯(lián)用法等[5-6]。目前，常規(guī)農(nóng)藥殘留檢測方法需要使用單組分標準品進行質(zhì)譜參數(shù)的逐一調(diào)諧和選擇，導致檢測成本高、工作量大。氣相色譜的保留指數(shù)原理很好地解決了這個問題，可以大大提高工作效率[7-9]。因此，為了實現(xiàn)高效、準確、有機溶劑用量少的檢測目標，本文運用保留指數(shù)原理，結(jié)合QuEChERS 前處理方法，建立了食藥同源樣品中多品種農(nóng)藥殘留的氣相色譜-三重四極桿串聯(lián)質(zhì)譜測定方法。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

10 種農(nóng)藥標準品：丙環(huán)唑、甲拌磷、毒死蜱、三唑磷、氯氟氰菊酯、腐霉利、苯醚甲環(huán)唑、五氯硝基苯、三唑酮和氧樂果（1 000 μg·mL-1），壇墨質(zhì)檢科技股份有限公司，臨用時用乙酸乙酯配成10 mg·L-1混合標準儲備液；內(nèi)標溶液：甲醇中環(huán)氧七氯B（1 000 μg·mL-1），臨用時用乙酸乙酯稀釋至5 mg·L-1作為內(nèi)標使用液；C7～C40正構(gòu)烷烴混標（1 000 μg·mL-1）；乙腈，色譜純，德國Meker 公司；乙酸乙酯，色譜純，德國Meker 公司；正己烷，色譜純，德國Meker 公司；QuEChERS 提取鹽包（4 g 硫酸鎂、1 g 氯化鈉、1 g 檸檬酸鈉、0.5 g 檸檬酸氫二鈉）；QuEChERS 凈化包（885 mg 硫酸鎂、150 mg PSA、15 mg GCB）；陶瓷均質(zhì)子，CNW 公司。

1.2 儀器與設備

氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀（GCMS-TQ8040，Shimadzu公司）；臺式離心機（ThermoFisher 公司）；水平振蕩器（KB5010，海門市貝爾儀器制造有限公司）；自動氮吹濃縮儀（瑞科公司）；電子分析天平（AX204，Mettler 公司）；純水系統(tǒng)（Millipore 公司）。

1.3 實驗方法

1.3.1 樣品前處理

將鐵皮石斛、靈芝、黃芪分別粉碎，取50 mL 離心管分別加入一份QuEChERS 提取鹽包。分別稱取5.0 g粉碎均勻的樣品放入上述離心管中，加入10 mL 乙腈、1 顆陶瓷均質(zhì)子，蓋上離心管蓋，渦旋分散后，將離心管置于水平振蕩器振蕩30 min。振蕩后以10 000 r·min-1離心5 min；吸取6 mL 上清液至15 mL離心管中，加入QuEChERS 凈化鹽包，渦旋分散后，振蕩30 min，5 000 r·min-1離心5 min，準確吸取2 mL上清液置于10 mL 玻璃試管，采用氮吹儀吹至近干，用乙酸乙酯渦旋溶解后定容至1 mL。吸取20 μL 環(huán)氧七氯B（5 mg·L-1）內(nèi)標溶液加入上述溶液中，渦旋2 min，轉(zhuǎn)移至微量離心管中，以10 000 r·min-1離心5 min，吸取上清液轉(zhuǎn)移至進樣瓶。

1.3.2 儀器條件

（1）色譜條件。Rtx-5MS 色譜柱（30 m×0.25 mm，0.25 μm）；載氣：氦氣；不分流進樣；柱流量：1.0 mL·min-1；進樣量：1.0 μL；進樣口溫度：280 ℃。程序升溫條件：初始溫度50 ℃，保持1 min；以40 ℃·min-1升溫至120 ℃，保持1 min；以5 ℃·min-1升溫至240 ℃，保持1 min；以12 ℃·min-1升溫至300 ℃，保持7 min。

（2）質(zhì)譜條件。離子源模式：EI 源；離子化能量：70 eV；接口溫度：280 ℃；離子源溫度240 ℃；溶劑延遲時間：3 min。

1.3.3 標準溶液配制

用乙酸乙酯將10 mg·L-1標準儲備液配制濃度為0.025 mg·L-1、0.050 mg·L-1、0.100 mg·L-1、0.250 mg·L-1、0.500 mg·L-1和1.00 mg·L-1的混合系列標準溶液。分別吸取1 mL 標準系列溶液，加入20 μL 內(nèi)標儲備液，使每個標準系列內(nèi)標濃度為0.100 mg·L-1。

2 結(jié)果與分析

2.1 氣質(zhì)聯(lián)用法建立

選用正構(gòu)烷烴標準溶液C7～C40，進樣濃度為5 μg·mL-1，識別C7～C40各個峰，并導入數(shù)據(jù)庫中，系統(tǒng)將自動計算并生成包含目標化合物的方法文件。選用1.3.3 項混合標準溶液曲線點250 μg·L-1，按方法進行檢測。結(jié)果顯示，10 種農(nóng)藥殘留的實測保留時間和軟件給定的保留時間基本吻合，時間差均小于0.05 min。10 種農(nóng)藥殘留方法參數(shù)及保留時間見表1。

表1 10 種農(nóng)藥質(zhì)譜參數(shù)、保留時間表

2.2 樣品前處理方法選擇

根據(jù)文獻報道，食品及中草藥中農(nóng)藥殘留提取及凈化方法主要有液液萃取、快速溶劑萃取、固相萃取法以及色譜凝膠等，這些前處理方法具有操作復雜、有機溶劑用量大、成本高、不利于人體健康以及污染環(huán)境等不足[10]。隨著各項吸附材料的研發(fā)，QuEChERS 法被逐漸運用到農(nóng)藥殘留前處理中。該方法使用商業(yè)化的試劑包提取樣品，然后將一部分清液用凈化包處理，最后直接上樣分析。QuEChERS 具有方便快捷、經(jīng)濟實用、使用的有機試劑較少等優(yōu)點，同時還具有環(huán)保高效的特點，能夠簡化實驗流程，提高工作效率，可滿足日常農(nóng)藥殘留殘檢測中的檢出限、重復性、回收率等相關技術(shù)要求。

2.3 線性范圍和定量限

按照上文建立的方法對10 種農(nóng)藥殘留進行定量分析，結(jié)果顯示在0.025～1.000 mg·L-1，10 種農(nóng)藥的線性關系均良好，相關系數(shù)（R2）大于0.997。本方法檢出限采用3 倍信噪比（S/N≥3）計算，為0.001～0.002 mg·kg-1；方法的定量限采用10 倍信噪比（S/N≥10）計算，為0.002 5～0.006 0 mg·kg-1，可滿足樣品中農(nóng)藥殘留檢測的要求。詳見表2。

表2 10 種農(nóng)藥相關系數(shù)、檢出限、定量限、回收率及相對標準偏差表（n=6）

2.4 準確度

將3個水平標準溶液50 μg·L-1、100 μg·L-1、500 μ·L-1添加到空白樣品中進行加標回收率實驗。如表2 所示，50 μg·L-1、100 μg·L-1、500 μ·L-13 個加標水平對應的回收率分別為87.5%～109.3%、91.3%～108.2%、91.2%～108.5%，相對標準偏差分別1.05%～6.35%、0.85%～6.28%、0.62%～5.68%，表明該方法的準確度能夠滿足農(nóng)藥檢測需求。

2.5 樣品測定

分別于藥店、超市、網(wǎng)購不同渠道采購鐵皮石斛、靈芝、黃芪樣品，共10 份，按照1.3.1 項方法處理，然后使用本文建立的方法進行上機測試。其中5 份鐵皮石斛樣品中檢出苯醚甲環(huán)唑，含量在0.293～0.598 mg·kg-1，未超過《食品安全國家標準 食品中農(nóng)藥最大殘留限量》（GB 2763—2021）中規(guī)定藥用植物鐵皮石斛（干基）中苯醚甲環(huán)唑的最大殘留限量（2 mg·kg-1）。樣品測定結(jié)果見表3。

表3 樣品中農(nóng)藥殘留檢測結(jié)果表 單位：mg·kg-1

3 結(jié)論

本文結(jié)合氣相色譜保留指數(shù)法和QuEChERS 前處理方法，成功建立了采用氣相色譜-三重四極桿質(zhì)譜聯(lián)用法測定藥食同源物質(zhì)中10種農(nóng)藥殘留的分析方法。該方法準確度高，精密度良好，操作簡便，重復性好，非常適用于食藥同源樣品中農(nóng)藥殘留的測定。