李 赟 楊旭華 李鐵全 田 瑾 白利鵬

(太原市動物防疫檢疫中心，山西太原 230027）

基層獸醫(yī)實驗室在開展非洲豬瘟等動物疫病監(jiān)測、流行病學(xué)調(diào)查、疫情診斷等疫病防控中起著重要作用。而實驗室動物疫病檢測工作具有專業(yè)性強，生物安全水平高的特點。人員是實驗室工作開展的基本要素，檢測工作的規(guī)范性、人員整體素質(zhì)水平直接決定著檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。基層實驗室人員學(xué)歷普遍不高，很多非專業(yè)院校畢業(yè)，水平不扎實、試驗中操作不嚴(yán)謹(jǐn)、無消毒滅菌及自我保護(hù)意識，給實驗室檢測數(shù)據(jù)的輸出及生物安全帶來極大隱患[1]。因此，加強實驗室人員管理，建立標(biāo)準(zhǔn)化試驗流程，增加人員培訓(xùn)是提高實驗室檢測結(jié)果準(zhǔn)確、減少安全事件發(fā)生、保障實驗室工作順利開展的基礎(chǔ)。

1 存在的問題

1.1 樣品試劑接收隨意，保存方式不規(guī)范

大多基層實驗室就收樣環(huán)節(jié)無明確規(guī)程。首先未設(shè)置接樣崗位，無固定接樣人員[2,3]；樣品接收時不了解該樣品用于檢測的項目，采集的樣品是否符合文件或檢測要求；采樣單是否填寫完善，尤其是免疫背景，采樣數(shù)量，采樣人員聯(lián)系方式不核對。其次不檢查樣品；不核實樣品實際數(shù)量與采樣單是否一致，樣品編碼是否準(zhǔn)確且具有唯一性；不檢查樣品是否存在管破裂、溢灑、污染、霉變及是否溶血或采樣量是否滿足需求等問題。第三點是樣品的保存不符合要求，未根據(jù)檢測項目開展時間和樣品類型分類保存；通常3 d 內(nèi)開展檢測的樣品均可放置于4℃環(huán)境。血清、各類拭子、組織樣品、OP液、精液等可冷凍保存。超出3 d 檢測的，可置于冷凍環(huán)境，但全血、雞蛋等樣品不能冷凍[4]。同時要注意玻璃制品不應(yīng)冷凍，防止管壁凍裂樣品溢出造成整體污染。樣品存放后不完善接樣信息；樣品保存過程中不規(guī)劃，隨意凍融也是常見現(xiàn)象。在試劑的驗收入庫上，主要體現(xiàn)在不注意試劑生產(chǎn)日期及有效期，保存溫度不按說明書執(zhí)行。比如不同類型不同企業(yè)的抗原保存溫度不一致；核酸提取試劑盒存放溫度不一致，有的需冷藏，有的常溫即可，試劑盒中蛋白酶需拿出單獨-18℃保存等細(xì)節(jié)不注意。試劑保存溫度不當(dāng)、抗原等物質(zhì)失活，均導(dǎo)致試驗無法開展。

1.2 試驗操作僅憑經(jīng)驗，細(xì)節(jié)把控不嚴(yán)謹(jǐn)

一是不嚴(yán)格按照試驗說明書操作，例如采用ELISA檢測方法時，試驗開始前包被板是否需要預(yù)洗；洗板時次數(shù)、每孔加液量及是否需靜置；顯色劑A 和B 的加樣方式；加樣后顯色時的環(huán)境溫度等細(xì)節(jié)均不按照規(guī)定操作，造成非特異性反應(yīng)增加或試驗無果。稀釋樣品時，忽略混勻步驟或次數(shù)隨機，造成樣品稀釋倍數(shù)不準(zhǔn)。二是移液器槍頭不及時更換，吸取同一液體時，基于不同人員手法熟練程度不同，當(dāng)無法做到懸空加樣，碰觸到已添加樣品孔時，未立刻更換吸頭，造成后續(xù)整排孔污染。三是加樣順序隨機，如陰陽性對照品在整個樣品添加過程中，添加順序形不成規(guī)程，建議1 個實驗室同類試驗布板及加樣順序做統(tǒng)一規(guī)定。四是PCR 核酸檢測時，混樣數(shù)量不結(jié)合檢測樣品背景及檢測目的變化，而是固定不變，造成混樣基數(shù)過多，弱陽性檢不出，或基數(shù)較少試劑產(chǎn)生浪費。五是肉眼判定結(jié)果無第二人復(fù)核，如虎紅平板凝集試驗，試管凝集試驗和血凝（抑制）等試驗，主觀隨意性大，不同人判定易造成不同結(jié)果。同時還有人為操作隨意的習(xí)慣影響檢測準(zhǔn)確性。如孵育包被板時多板疊摞，溫度感受不均；洗板后拍板不徹底，或力氣過大造成包被板液體殘留或整排脫落，樣品位置混淆。

1.3 忽視試驗環(huán)境溫濕度，時間意識差

環(huán)境溫濕度對試驗結(jié)果的影響很大[5]，例如做血凝（抑制）試驗，若不人為控制溫度，冬天和夏天凝集反應(yīng)時間差異大，抗原抗體還未充分結(jié)合，就加入紅細(xì)胞，造成反應(yīng)不充分；或為提高溫度直接把凝集板放于空調(diào)暖風(fēng)直吹處、包被板不覆膜直接放培養(yǎng)箱，造成液體蒸發(fā)嚴(yán)重，總之，應(yīng)在試驗期間保證整體或局部溫濕度的穩(wěn)定，才能盡量減少對試驗結(jié)果的影響。同時多項目同時開展時，未做好規(guī)劃，造成洗板機、酶標(biāo)儀等多板需同時使用，而儀器數(shù)量有限，導(dǎo)致包被板內(nèi)物質(zhì)因等待機器，被動反應(yīng)時間加長；虎紅平板凝集試驗，一次性混合份數(shù)太多，造成判定結(jié)果時最先混合好的孔已過最佳判定時間；血凝抑制試驗一次性做數(shù)10 個板，不卡頭尾板加樣時間，造成每板反應(yīng)時間把握不準(zhǔn)，使反應(yīng)不充分或反應(yīng)過度；基層實驗室常規(guī)開展的試驗人工操作步驟多，溫濕度、時間不進(jìn)行有效規(guī)劃把控勢必影響結(jié)果。

1.4 設(shè)備使用不按規(guī)程，維護(hù)保養(yǎng)不及時

人員在操作儀器設(shè)備中使用的方法不科學(xué)，在移液器等常用設(shè)備上形成暴力粗放型操作習(xí)慣。比如移液器裝配吸頭時為安裝牢固而猛烈撞擊；高量程二檔吸入液體時速度過快，液體反沖進(jìn)移液器造成設(shè)備污染；試驗完畢的移液器未調(diào)至最大量程[6]。離心機離心時不配平；離心用玻璃管導(dǎo)致管壁破裂；離心完畢不及時消毒。洗板機使用完畢不用蒸餾水沖洗，停用時間稍長，造成板孔管堵塞。生物安全柜使用期間物品遮擋里外通風(fēng)口，導(dǎo)致風(fēng)向亂流；高效過濾器不按規(guī)定時間更換[7]。諸如此類操作均會造成設(shè)備讀數(shù)不準(zhǔn)或頻繁故障，同時部分實驗室的儀器只使用不養(yǎng)護(hù)校準(zhǔn)，設(shè)備精準(zhǔn)度下降而不知，造成試驗結(jié)果誤差增大或錯誤。

1.5 試驗相關(guān)記錄不完善，報告不規(guī)范

很多試驗人員檢測出結(jié)果后，簡單記錄報告主管部門后完畢，不注重檢測過程的原始痕跡保存。應(yīng)該從接樣后任務(wù)下達(dá)、試驗開展后設(shè)備的使用記錄、原始圖譜數(shù)據(jù)、結(jié)果匯總、試驗報告、樣品留樣記錄等應(yīng)形成本實驗室一套完整的管理體系[8]，均屬人員工作的一部分，也為今后追溯提供依據(jù)。同時試驗人員出具報告不規(guī)范，報告內(nèi)容無檢測依據(jù)、不填寫使用的主要儀器設(shè)備、不寫判定標(biāo)準(zhǔn)、無三級簽字、章證不完善等均是常見現(xiàn)象。

1.6 生物安全意識不足，自我保護(hù)意識差

實驗室人員生物安全意識直接影響自身健康和公共衛(wèi)生安全[9]?；鶎訉嶒炇胰藛T在自身防護(hù)、試驗安全操作及環(huán)境消毒滅菌方面意識不足。一是表現(xiàn)在人員出入實驗室無屏障；試驗期間手套口罩不能全程佩戴，破損后不及時更換等。二是不規(guī)范的試驗操作造成安全隱患，如離心機使用期間管蓋密封不嚴(yán)造成樣品溢灑；應(yīng)在生物安全柜內(nèi)的操作而直接在試驗臺進(jìn)行；生物安全柜不區(qū)分凈區(qū)、污區(qū)，操作上空間交叉造成污染，樣品液體流入排風(fēng)口不易清理；使用過的試劑敞口堆砌，PCR 試驗提取或擴增板未經(jīng)消毒隨意扔置，造成氣溶膠傳播[10]。三是試驗后做不到有效消毒，試驗垃圾無專業(yè)處理渠道是普遍現(xiàn)象。不能有效利用酒精、84 消毒液等液體消毒劑進(jìn)行局部清潔，未養(yǎng)成儀器設(shè)備定期消毒習(xí)慣；同時PCR 實驗室不通風(fēng)，不利于氣溶膠擴散；工作服及非一次性試驗耗材長久不消毒清洗。

2 應(yīng)采取的措施和建議

2.1 人員工作精準(zhǔn)定位，嚴(yán)格執(zhí)行實驗室各項制度規(guī)程

根據(jù)實驗室人員數(shù)量，將接樣、出具報告、不同類試驗的開展、儀器設(shè)備的維護(hù)管理、標(biāo)準(zhǔn)查新、檔案管理等工作細(xì)化至崗位個人，保證試驗人員持證上崗。要熟練掌握負(fù)責(zé)崗位的主要內(nèi)容、相關(guān)操作和該崗位的風(fēng)險點，人數(shù)少的實驗室可以1 人多崗，總之專崗專人，提高試驗人員的責(zé)任心和使命感，制定考核標(biāo)準(zhǔn)，作為年底考核依據(jù)。引導(dǎo)試驗人員除關(guān)注試驗結(jié)果外，還要熟練掌握并執(zhí)行實驗室的各項制度和規(guī)程。包括樣品接收、存放和管理、試劑耗材的使用、不同試驗操作、試驗結(jié)果的報告流程，尤其是儀器設(shè)備的使用維護(hù)、保養(yǎng)和校準(zhǔn)，制定制度并嚴(yán)格執(zhí)行；要細(xì)化每項試驗的標(biāo)準(zhǔn)化操作流程。總之，有完整的標(biāo)準(zhǔn)化操作規(guī)程并嚴(yán)格執(zhí)行是試驗成功的關(guān)鍵[11,12]。

2.2 持續(xù)開展人員專業(yè)培訓(xùn)，摒棄墨守成規(guī)的試驗習(xí)慣

基層人員流動性大，而獸醫(yī)實驗室檢測技術(shù)專業(yè)性強，要求人員短時間內(nèi)掌握每一項試驗的原理、每一步所用試劑的目的，而不應(yīng)只局限于流水線作業(yè)。一旦出現(xiàn)問題，應(yīng)有能力分析原因，找出問題所在。當(dāng)今檢測技術(shù)更新很快，為保證試驗方法的有效性和結(jié)果的準(zhǔn)確性，應(yīng)制定詳細(xì)的培訓(xùn)計劃。試驗人員要不斷了解新檢測技術(shù)、掌握先進(jìn)方法、完善試驗步驟、規(guī)范操作流程；掌握不同類試驗的優(yōu)缺點、敏感性和特異性。在老帶新的過程中，要吸收老一輩試驗員的經(jīng)驗，但對長期錯誤性操作方式或行為堅決改進(jìn)。只有不斷提升實驗室全體人員的綜合能力，實驗室的檢測診斷水平才能持續(xù)提升。

2.3 提高人員生物安全意識，杜絕污染等安全事件發(fā)生

事實證明提升人員自身生物安全意識，是做好實驗室生物安全工作的基礎(chǔ)，大多數(shù)生物安全事故均來自人員意識不到位，應(yīng)樹立實驗室工作生物安全第一的原則[13,14]。嚴(yán)格按照《實驗室生物安全通用要求》 (GB 19489-2008)與《病原微生物實驗室生物安全通用準(zhǔn)則》（WS 233-2017)開展工作[15,16]，制定實驗室生物安全負(fù)責(zé)人負(fù)責(zé)總體工作。做好人員自身生物安全防護(hù)，實驗室試劑樣品的安全使用；同時建立實驗室環(huán)境生物安全管理章程，使生物安全的宣傳教育真正做到長效化。

3 結(jié)語

獸醫(yī)實驗室的工作包括多方面，而人作為實驗室的基本要素，對實驗室檢測診斷能力起著決定性作用。只有意識到長久以來一直存在的問題，根據(jù)各問題不斷改進(jìn)，提升人員各個環(huán)節(jié)規(guī)范化的意識和檢測人員的專業(yè)技術(shù)水平，保證人員工作綜合能力穩(wěn)步提升，才能保障基層獸醫(yī)實驗室在動物疫病防控中的技術(shù)支撐作用。