射血分?jǐn)?shù)保留的心力衰竭患者心房利鈉肽前體A 基因多態(tài)性與5 年全因死亡的關(guān)系

馬江云 陳金煥 徐勝華

心力衰竭是各種原因引起心肌病變發(fā)展至終末階段的共同表現(xiàn)，5 年病死率約50%，10 年病死率超90%，嚴(yán)重危害人類生命健康[1]。射血分?jǐn)?shù)保留的心力衰竭（heart failure with preserved ejection fraction，HFpEF）是指左心室射血分?jǐn)?shù)（left ventricular ejection fraction，LVEF）＞50%的心力衰竭，主要表現(xiàn)為心臟舒張功能及順應(yīng)性降低而非收縮功能降低[2]。研究指出，心房利鈉肽前體A（natriuretic peptide precursor A，NPPA）基因多態(tài)性與心血管疾病的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)，但其與HFpEF 患者5 年全因死亡的關(guān)系研究較少[3]。此外，氨基末端腦鈉肽前體（Nterminal pro-brain natriuretic peptide，NT-proBNP）被證實(shí)在各種臨床收縮性心力衰竭的診治、病情和預(yù)后評(píng)估方面具有較好的參考價(jià)值[4-5]。本研究探討NPPA 基因多態(tài)性與HFpEF 患者5 年全因死亡的相關(guān)性及對(duì)NT-proBNP 水平的影響，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下。

1 對(duì)象和方法

1.1 對(duì)象 選擇2013 年1 月至2016 年1 月杭州市第九人民醫(yī)收治的HFpEF 患者233 例，男133例，女100 例，年齡39～88（65.93±11.43）歲，體重指數(shù)（body mass index，BMI）19.8～27.6（23.82±1.81）kg/m2。根據(jù)5 年全因死亡（包括心血管死亡和非心血管死亡）情況分為死亡組31 例和存活組202 例。納入標(biāo)準(zhǔn)：符合心力衰竭診斷標(biāo)準(zhǔn)[6]；LVEF≥50%。排除標(biāo)準(zhǔn)：血液系統(tǒng)疾??；嚴(yán)重肝腎功能障礙；嚴(yán)重呼吸系統(tǒng)疾病、腦血管疾??；惡性腫瘤；精神疾病；妊娠或哺乳期；存在其他可引起檢測指標(biāo)異常的疾?。ㄈ绺腥尽?yīng)激、發(fā)熱等）。本研究經(jīng)本院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)審查通過（批準(zhǔn)文號(hào)：WH8675），患者或家屬均知情同意。

1.2 方法

1.2.1 一般資料收集 收集并比較兩組患者一般資料，包括性別、年齡、民族、BMI、飲酒史、吸煙史、紐約心臟病協(xié)會(huì)（New York Heart Association，NYHA）心功能分級(jí)、既往病史[糖尿病、冠心病、高血壓、慢性阻塞性肺疾病（chronic obstructive pulmonary disease，COPD）、心房顫動(dòng)、慢性腎功能不全、貧血]、既往用藥。

1.2.2 血脂、NT-proBNP、心功能指標(biāo)檢測 采集兩組患者入院時(shí)（治療前）外周靜脈血6 mL，抗凝處理后保存于-80 ℃冷藏室，由專業(yè)檢測人員統(tǒng)一檢測。兩組患者均取2 mL 血液標(biāo)本，采用杭州艾康生物技術(shù)有限公司CCM-101 型血脂分析儀測定血脂指標(biāo)，包括總膽固醇（total cholesterol，TC）、甘油三酯（triglyceride，TG）、低密度脂蛋白膽固醇（low density lipoprotein cholesterol，LDL-C）、高密度脂蛋白膽固醇（high density lipoprotein cholesterol，HDL-C）。另取2 mL 血液標(biāo)本，3 500 r/min 離心5 min，取上清液，采用蘇州光景生物科技有限公司的試劑盒、時(shí)間分辨熒光免疫層析法檢測血清NT-proBNP 水平，比較不同基因型患者血清NT-proBNP 水平。采用蘇州飛依諾科技有限公司VINNO M50 型數(shù)字化彩色超聲診斷儀測定心功能指標(biāo)，包括LVEF、左心室輸出量、左心室舒張末容積、左心室收縮期橫徑、A 峰、E 峰。

1.2.3 NPPA 基因檢測 兩組患者均取入院2 mL血液標(biāo)本，解凍后提取DNA，采用徐州賽恩生物試劑有限公司全血基因組DNA 快速提取試劑盒，以熒光PCR 技術(shù)進(jìn)行NPPA 基因擴(kuò)增及基因型測序，共檢測NPPA 基因的2 個(gè)單核苷酸基因多態(tài)性位點(diǎn)，即rs5063 位點(diǎn)、rs5065 位點(diǎn)。rs5063 位點(diǎn)正引物為5'-GACCAGAGCTAATCCCATGTACA-3'，負(fù)引物為5'-GCTTTCCTGGCCCTACCTT-3'；rs5065 位點(diǎn)正引物為5'-AAGTGTTGACAGGAAGCTGC-3'，負(fù)引物為5'-AAGTTCAGAGGATGGGCACA-3'，材料均購自廣州銳博生物科技有限公司。采用美國Invitrogen 公司Taq DNA Poly-merase High Fidelity 試劑進(jìn)行電泳鑒定。采用美國ABI 公司ABI3730 XL 全自動(dòng)DNA 測序儀進(jìn)行基因型測序,分析rs5063、rs5065 位點(diǎn)基因是否存在多態(tài)性，并比較兩組患者NPPA 基因rs5063、rs5065 位點(diǎn)基因型、等位基因分布情況。

1.2.4 治療和隨訪方法 兩組患者出院后5 年均嚴(yán)格按照《心力衰竭合理用藥指南》給予利尿劑、血管擴(kuò)張劑、血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制劑或血管緊張素Ⅱ受體拮抗劑、β 受體阻滯劑、洋地黃類正性肌力藥物及醛固酮受體拮抗劑等聯(lián)合治療[7]。通過門診或電話隨訪，出院后第1 年每3 個(gè)月隨訪1 次，第2～5年每6 個(gè)月隨訪1 次，隨訪截至2021 年1 月，統(tǒng)計(jì)隨訪期間兩組患者存活情況。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 22.0 統(tǒng)計(jì)軟件。符合正態(tài)分布的計(jì)量資料以表示，多組間比較采用單因素方差分析，兩兩比較采用SNK-q檢驗(yàn)，組間比較采用兩獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)。計(jì)數(shù)資料組間比較采用χ2檢驗(yàn)。通過Cox 回歸模型進(jìn)行多因素回歸分析，運(yùn)用R 語言隨機(jī)森林模型對(duì)5 年全因死亡影響因素進(jìn)行重要性排序。P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組患者一般資料比較 死亡組患者的NYHA 心功能分級(jí)Ⅳ級(jí)、COPD、心房顫動(dòng)、慢性腎功能不全患者占比高于對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.05）。兩組患者其他指標(biāo)比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＞0.05），見表1。

表1 兩組患者一般資料比較

2.2 兩組患者血脂、NT-proBNP、心功能指標(biāo)比較死亡組患者的NT-proBNP 水平高于存活組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；兩組患者血脂及其他心功能指標(biāo)比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＞0.05），見表2。

表2 兩組患者血脂、NT-proBNP、心功能指標(biāo)比較

2.3 NPPA 基因擴(kuò)增結(jié)果 基因分型檢測結(jié)果顯示，rs5063 位點(diǎn)基因型包括AA、AG、GG；rs5065 位點(diǎn)基因型包括AA、AG、GG，rs5063、rs5065 均存在多態(tài)性。見圖1。

圖1 NPPA 基因擴(kuò)增電泳圖

2.4 兩組患者NPPA 基因多態(tài)性比較 死亡組NPPA 基因rs5063 位點(diǎn)AA 基因型、A 等位基因占比高于存活組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.05）。兩組患者rs5065 位點(diǎn)基因型、等位基因分布比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＞0.05），見表3。

表3 兩組患者NPPA 基因多態(tài)性比較[例（%）]

2.5 HFpEF 患者5 年全因死亡的影響因素分析NYHA 分級(jí)、COPD、心房顫動(dòng)、慢性腎功能不全、NT-proBNP、rs5063 位點(diǎn)AA 基因型均為HFpEF 患者5 年全因死亡的影響因素（均P＜0.05），見表4。影響因素從高到底依次為NT-proBNP、慢性腎功能不全、rs5063 基因型、COPD、NYHA 心功能分級(jí)、心房顫動(dòng)，見圖2。

圖2 各影響因素的排序圖

表4 5 年全因死亡的Cox 回歸分析

2.6 NPPA 基因多態(tài)性對(duì)NT-proBNP 水平的影響NPPA 基因rs5063 與rs5065 位點(diǎn)AA、AG、GG 患者NT-proBNP 水平比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.01）。NPPA 基因rs5063 與rs5065 位點(diǎn)AG、GG 基因型患者NT-proBNP 水平低于AA 型患者，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.05），見表5。

表5 NPPA 基因多態(tài)性對(duì)NT-proBNP 水平的影響

3 討論

近年來，HFpEF 的患病率呈逐漸升高趨勢，進(jìn)一步了解與研究HFpEF 發(fā)病機(jī)制對(duì)指導(dǎo)臨床治療意義重大[9-10]。NPPA 基因作為研究疾病遺傳易感性的候選基因受到人們的關(guān)注，NPPA 基因多態(tài)性與急性左心衰患者的易感性顯著相關(guān)[11]。

本研究NPPA 基因擴(kuò)增結(jié)果顯示，rs5063 位點(diǎn)基因型包括AA、AG、GG；rs5065 位點(diǎn)基因型包括AA、AG、GG，rs5063、rs5065 均存在多態(tài)性。筆者推測NPPA 基因rs5063、rs5065 位點(diǎn)的基因多態(tài)性可能與HFpEF 的發(fā)生、發(fā)展有關(guān)。NPPA 基因定位于染色體1P36，編碼心房鈉尿肽（atrial natriuretic peptide，ANP），而ANP 作為一種利尿劑控制細(xì)胞外液量和電解質(zhì)的平衡[12-13]。相關(guān)動(dòng)物學(xué)研究顯示，通過有效措施下調(diào)ANP 表達(dá)水平，有助于改善心功能，發(fā)揮防治慢性心力衰竭的作用[14]。研究發(fā)現(xiàn)，ANP 參與調(diào)節(jié)電解質(zhì)平衡和血壓，其調(diào)控基因NPPA 基因突變可通過引起ANP 的水平變化，進(jìn)而激活炎癥和心肌纖維化引起心房顫動(dòng)[15]。本研究結(jié)果顯示，死亡組患者NPPA 基因rs5063 位點(diǎn)等位基因A 的分布比例高于存活組患者，等位基因G 的分布比例低于存活組患者，提示NPPA 基因rs5063 位點(diǎn)等位基因A、等位基因G 可增加患者5 年全因死亡率。李文安等[16]通過對(duì)急性左心衰患者研究發(fā)現(xiàn)，NPPA 基因rs5063、rs5065 位點(diǎn)的基因多態(tài)性均為急性左心衰的獨(dú)立危險(xiǎn)因子，與本研究結(jié)果存在一定差異。造成此項(xiàng)差異的原因可能與兩項(xiàng)研究的對(duì)象不同有關(guān)。本研究通過Cox 回歸分析發(fā)現(xiàn)NPPA 基因rs5063位點(diǎn)AA 基因型為HFpEF 患者5 年全因死亡的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，進(jìn)一步證實(shí)了NPPA 基因rs5063 位點(diǎn)基因突變可增加HFpEF 患者5 年全因死亡發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)。筆者認(rèn)為突變型ANP 較野生型ANP 具有更強(qiáng)和更持續(xù)的利鈉、利尿作用，激活炎癥和心肌纖維化，從而促進(jìn)HFpEF 患者心功能損傷，增加死亡率。

研究證實(shí)，血清NT-proBNP 水平變化與HFpEF 患者心功能指標(biāo)存在顯著相關(guān)性，與HFpEF 的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)[17]。本研究發(fā)現(xiàn)，NPPA 基因rs5063 與rs5065 位點(diǎn)AG、GG 基因型患者NT-pro-BNP 水平低于AA 型患者。NPPA 基因使ANP 活性增強(qiáng)，導(dǎo)致鈉負(fù)荷增加、心房擴(kuò)張或血容量增加，從而引起B(yǎng)NP 的合成、釋放增多，引起NT-proBNP 水平升高。李文安等[16]的研究也證實(shí)急性左心衰患者NPPA 基因多態(tài)性與NT-proBNP 有較強(qiáng)的關(guān)聯(lián)性。而NT-proBNP 被證實(shí)具有擴(kuò)血管、利尿、抗心肌纖維化和抑制交感神經(jīng)的作用，其血清水平越高，慢性心力衰竭患者5 年全因死亡率越高[18-19]。據(jù)此筆者認(rèn)為NPPA 基因rs5063 與rs5065 位點(diǎn)基因突變可通過上調(diào)血清NT-proBNP 水平，促進(jìn)HFpEF 的疾病進(jìn)展，增加患者5 年全因死亡風(fēng)險(xiǎn)。

此外，本研究還發(fā)現(xiàn)，NYHA 心功能分級(jí)、COPD、心房顫動(dòng)、慢性腎功能不全均為HFpEF 患者5 年全因死亡的影響因素，因此對(duì)于NYHA 心功能分級(jí)較高及合并COPD、心房顫動(dòng)、慢性腎功能不全的HFpEF 患者，應(yīng)加強(qiáng)關(guān)注及進(jìn)行相關(guān)治療，或可降低5年全因死亡風(fēng)險(xiǎn)。

綜上所述，NPPA 基因多態(tài)性可能通過上調(diào)NT-proBNP 水平增加HFpEF 患者5 年全因死亡風(fēng)險(xiǎn)，成為HFpEF 的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。但本研究存在樣本量較少的不足，研究結(jié)果可能存在一定誤差，仍需擴(kuò)大樣本量進(jìn)一步驗(yàn)證。