張振興,胡 騎,楊欽鴻,2,薛曉巖,2,趙孝慈,3,宋建領(lǐng)*

(1.云南省畜牧獸醫(yī)科學(xué)院,云南省熱帶亞熱帶動物病毒病重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,農(nóng)業(yè)農(nóng)村部部省共建跨境動物疫病防控重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,云南昆明 650224;2.西南林業(yè)大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院,云南昆明 650224;3.永平縣動物疫病預(yù)防控制中心,云南永平 672600)

豬繁殖與呼吸綜合征(Porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)又稱“豬藍(lán)耳病”,是由豬繁殖與呼吸綜合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)引起的一種急性、高度傳染的病毒性傳染病,嚴(yán)重威脅生豬養(yǎng)殖業(yè)[1-3]。PRRS主要傳播方式為空氣傳播、精液傳播、垂直傳播等[4],感染后臨床癥狀為母豬繁殖性障礙,母豬早產(chǎn)、流產(chǎn)、產(chǎn)木乃伊胎、死胎等,甚至導(dǎo)致母豬死亡,會造成仔豬嚴(yán)重的呼吸系統(tǒng)疾病甚至死亡[5]。生豬被PRRSV感染后會導(dǎo)致豬免疫功能紊亂,從而引起豬群繼發(fā)性感染,甚至造成與其他傳染病的混合感染,從而加重疫情[6-8]。2017年我國農(nóng)業(yè)部印發(fā)《國家高致病性豬藍(lán)耳病防治指導(dǎo)意見(2017-2020)》,明確表示2017-2020年為PRRS免疫預(yù)防退出的過渡階段,2022年農(nóng)業(yè)農(nóng)村部又印發(fā)《國家動物疫病強(qiáng)制免疫指導(dǎo)意見(2022-2025)》,要求各地方可根據(jù)本轄區(qū)內(nèi)生豬疫病發(fā)生情況對PRRS實(shí)行強(qiáng)制免疫[9]。為掌握云南省PRRS疫苗免疫政策轉(zhuǎn)折、過渡階段實(shí)際免疫情況,從而進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)PRRS風(fēng)險(xiǎn)防控的薄弱環(huán)節(jié),本實(shí)驗(yàn)室對2016-2020年云南省部分生豬養(yǎng)殖場PRRS疫苗免疫效果進(jìn)行動態(tài)化監(jiān)測,以期為云南省PRRS防控提供科學(xué)依據(jù),為云南省生豬養(yǎng)殖業(yè)健康可持續(xù)發(fā)展提供保障。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 樣品 樣品采集時(shí)間為2016年1月至2020年12月,采集范圍包括云南省9個(gè)州市188個(gè)未受野毒感染的健康豬場(包含180個(gè)PRRS免疫場和8個(gè)非免場),以隨機(jī)抽樣為原則,每個(gè)豬場采集樣品10～50份,共采集血液樣品4 179份(PRRS免疫場4 098份)。

1.1.2 主要試劑 豬繁殖與呼吸綜合征病毒抗體檢測試劑盒(IDEXX PRRS X3),北京愛德士元亨生物科技有限公司產(chǎn)品,購自昆明中云美生物技術(shù)有限公司。

1.1.3 主要儀器 酶標(biāo)儀(HTX),美國伯騰儀器有限公司產(chǎn)品;離心機(jī)(X-15R),美國貝克曼庫爾特有限公司產(chǎn)品。

1.2 方法

1.2.1 血清分離與樣品檢測 用采血管采集血液后在恒溫箱中斜放靜置4～6 h,待血液完全凝固后放置在4 ℃冰箱2 h,2 h后吸取血清至已滅菌的1.5 mL離心管中并進(jìn)行編號,保存在-20 ℃冰箱待檢。按照豬繁殖與呼吸綜合征病毒抗體檢測試劑盒說明書進(jìn)行操作,操作過程基本如下[10]:試驗(yàn)所需試劑恢復(fù)至18～26 ℃后在抗原包被板中依次加入稀釋后的樣品血清、陰性血清和陽性血清后在18～26 ℃條件下進(jìn)行孵育→連續(xù)洗滌3次→加入酶標(biāo)抗體后在18～26 ℃條件下孵育→連續(xù)洗滌5次→加入底物后在18～26 ℃條件下孵育→加入終止液→測定并且分析樣品和對照的OD650。試驗(yàn)有效性判定標(biāo)準(zhǔn)為陽性標(biāo)準(zhǔn)樣品OD650平均值-陰性標(biāo)準(zhǔn)樣品OD650平均值≥0.150、陰性標(biāo)準(zhǔn)樣品OD650平均值≤0.150,PRRSV抗體檢測結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)按說明書標(biāo)準(zhǔn)(表1)。樣品與陽性對照比值(S/P)=(被檢樣品OD650-陰性對照OD650)/(陽性對照OD650-陰性對照OD650)。

表1 豬繁殖與呼吸綜合征病毒抗體檢測結(jié)果的判定標(biāo)準(zhǔn)

1.2.2 數(shù)據(jù)處理 樣品檢測結(jié)果運(yùn)用Excel 2007進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理與分析。

2 結(jié)果

2.1 2016-2020年云南省PRRSV抗體檢測結(jié)果

2016-2020年,采集的云南省保山、楚雄、大理、紅河、昆明、普洱、曲靖、西雙版納、玉溪等9個(gè)地州(市)188個(gè)未受野毒感染的健康豬場共4 179份血清樣品,PRRSV抗體陽性樣品2 932份,PRRSV抗體陰性樣品1 247份,云南省2016-2020年豬場PRRSV抗體陽性率為70.16 %。

2.2 不同年份豬場PRRSV抗體檢測結(jié)果

不同年份PRRSV抗體檢測結(jié)果顯示,整體上,PRRSV抗體陽性率在2016-2020年呈現(xiàn)逐年下降的趨勢,其中2016年度PRRSV抗體陽性率最高,全年度共檢測32個(gè)豬場的712份血清樣品,PRRSV抗體陽性樣品數(shù)量為548份,PRRSV抗體陽性率為76.97%;2020年度PRRSV抗體陽性率最低,全年度共檢測30個(gè)豬場754份血清樣品,PRRSV抗體陽性樣品數(shù)量為426份,PRRSV抗體陽性率為56.50%(表2)。

表2 不同年份豬場豬繁殖與呼吸綜合征病毒抗體檢測結(jié)果

2.3 不同地區(qū)豬場PRRSV抗體檢測結(jié)果

對來源于9個(gè)州(市)豬場的血清樣品進(jìn)行PRRSV抗體檢測結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì),結(jié)果顯示,9個(gè)州市樣品的PRRSV抗體陽性率存在差異,其中保山市的PRRSV抗體陽性率最高,330份血清樣品中PRRSV抗體陽性樣品280份,PRRSV抗體陽性率為84.85%;其次為玉溪市和普洱市,分別檢測317份、450份,PRRSV抗體陽性樣品數(shù)量為258份、363份,PRRSV抗體陽性率率分別為81.39%、80.67%;PRRSV抗體陽性率最低的為曲靖市,1 225份血清樣品中PRRSV抗體陽性樣品數(shù)量為709份,PRRSV抗體陽性率為57.88%(表3)。

表3 不同地區(qū)豬場豬繁殖與呼吸綜合征病毒抗體檢測結(jié)果

3 討論

PRRS是危害生豬養(yǎng)殖的重要傳染病之一,目前市面上還沒有能有效根治該病的藥物和方法[11],且由于PRRSV具有高度變異性,使的變異毒株毒力進(jìn)一步增強(qiáng),導(dǎo)致PRRS具有了更加廣泛的傳播途徑和更高的病死率[12]。疫苗免疫是預(yù)防和控制PRRS的主要方法,通過對采集自云南省9個(gè)州市188個(gè)健康豬場的血清樣品進(jìn)行PRRSV抗體檢測,結(jié)果表明,2016-2020年的5年中,2016-2018年云南省部分地區(qū)PRRS疫苗抗體陽性率分別為76.97%、76.32%、75.75%,達(dá)到了我國農(nóng)業(yè)農(nóng)村部要求的PRRS疫苗抗體陽性率70%的標(biāo)準(zhǔn);2019-2020年云南省部分地區(qū)PRRS疫苗抗體陽性率分別為63.68%、56.50%,并沒有達(dá)到70%的標(biāo)準(zhǔn),而且從整體來看,5年的PRRS抗體陽性率呈現(xiàn)出持續(xù)下降的趨勢。分析原因,一是受到我國2017年取消了PRRS強(qiáng)制性免疫政策影響[13],很多生豬養(yǎng)殖場會根據(jù)自身養(yǎng)殖經(jīng)營情況和經(jīng)驗(yàn)制定符合自身發(fā)展的免疫防護(hù)策略;二是2018年以來,非洲豬瘟傳入我國,很多生豬養(yǎng)殖場由于人力和資源有限,防控重點(diǎn)轉(zhuǎn)移到非洲豬瘟上,導(dǎo)致PRRS免疫無法做到全覆蓋;三是可能由于有些州市因自身財(cái)政緊缺,無法根據(jù)轄區(qū)內(nèi)動物疫病流行情況將PRRS疫苗采購納入財(cái)政預(yù)算有關(guān)[14]。

云南省9個(gè)州(市)不同豬場PRRSV抗體檢測結(jié)果顯示,部分地區(qū)PRRSV抗體陽性率保持在較高水平如保山市、玉溪市、普洱市,PRRSV抗體陽性率分別達(dá)到了84.85%、81.39%、80.67%;也有個(gè)別州市PRRSV抗體陽性率偏低,如昆明市、大理州、曲靖市,PRRSV抗體陽性率分別為67.42%、61.89%、57.88%。原因可能有:一是可能與各州市生豬養(yǎng)殖場PRRS防疫水平、防疫理念等不一有關(guān),很多生豬養(yǎng)殖場工作人員沒有經(jīng)過系統(tǒng)的獸醫(yī)培訓(xùn),在進(jìn)行PRRSV疫苗免疫過程中未按照相關(guān)規(guī)范程序進(jìn)行免疫,也可能由于沒有充分考慮免疫頻率、免疫劑量、疫苗質(zhì)量對疫苗免疫的影響[15];二是可能與各州市生豬養(yǎng)殖場選擇疫苗免疫程序不同有關(guān),孫雪通過研究發(fā)現(xiàn)不同免疫程序?qū)RRS疫苗免疫效果有不同的影響,其通過試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)PRRS弱毒苗免疫后豬體內(nèi)能迅速產(chǎn)生抗體,而PRRSV滅活苗免疫后產(chǎn)生抗體較晚,在加強(qiáng)免疫后才產(chǎn)生特異性抗體,PRRS弱毒苗能更有效的激發(fā)生豬只產(chǎn)生體液免疫和細(xì)胞免疫反應(yīng)[16];三是可能是由于考慮到PRRSV的變異和重組使得不同疫苗毒株無法提供有效的交叉保護(hù),甚至?xí)a(chǎn)生應(yīng)激反應(yīng)等副反應(yīng),很多防護(hù)較好的健康豬場沒有使用PRRS疫苗有關(guān)[7]。在本次調(diào)查中,PRRS非免場抗體陽性率達(dá)到80%以上,確認(rèn)為感染PRRSV弱毒株導(dǎo)致,但由于生豬為隱性帶毒,不影響生豬生產(chǎn)性能,未再進(jìn)行PRRSV疫苗免疫。

4 結(jié)論

對云南省9個(gè)州市進(jìn)行了PRRSV抗體檢測,通過5年的探究和數(shù)據(jù)分析初步摸清了這些地區(qū)的PRRS疫苗免疫情況。云南省9個(gè)州(市)不同豬場PRRSV抗體檢測結(jié)果能一定程度上反映出不同地區(qū)對PRRS的重視程度以及疫苗免疫的普及程度和免疫效果[17]。對于PRRS的預(yù)防,應(yīng)加強(qiáng)生產(chǎn)管理,保持健康飼養(yǎng),在生產(chǎn)中堅(jiān)持自繁自養(yǎng)、整進(jìn)整出,把好種源關(guān)頭,科學(xué)合理用藥[18]?？茖W(xué)合理選擇疫苗、制定疫苗免疫程序,提高疫苗免疫效果仍然是預(yù)防PRRS的首選策略,各地區(qū)各豬場應(yīng)該重視PRRS疫苗接種,加強(qiáng)PRRS血清學(xué)、病原學(xué)檢測,多管齊下,才能更加利于PRRS疫情的防控。