崔本科,王巖,盧云鳳,杜鵑,翟羽涵

肺動脈高壓(pulmonary arterial hypertension,PAH)是一種惡性心血管疾病,以肺血管床阻塞性重構(gòu)和進(jìn)行性阻力增加為特征,最終導(dǎo)致右心功能障礙[1]。目前針對PAH發(fā)病機(jī)制的研究主要集中在肺血管平滑肌細(xì)胞,但由于其調(diào)控通路中信號分子的復(fù)雜性,其機(jī)制仍不清楚。最近的研究證實(shí),線粒體通過感知缺氧、氧化應(yīng)激和凋亡在PAH發(fā)病中發(fā)揮重要作用[2],提示線粒體代謝可能是PAH的關(guān)鍵調(diào)節(jié)因素。線粒體自噬作為線粒體質(zhì)量控制的必要手段,可選擇性地清除受損線粒體碎片,防止線粒體和細(xì)胞功能障礙[3]。報(bào)道稱線粒體自噬的激活導(dǎo)致肺動脈平滑肌細(xì)胞過度增殖,增加肺血管阻力[4],但其調(diào)控PAH的確切分子機(jī)制尚未可知。線粒體翻譯延伸因子Tu(mitochondrial translation elongation factor Tu,TUFM)部分位于線粒體外膜上,與蛋白質(zhì)翻譯延伸合成、氧化磷酸化和蛋白質(zhì)控有關(guān)[5]。其表達(dá)異?？赏ㄟ^引起線粒體呼吸鏈?zhǔn)Ш夂?或促進(jìn)電子泄露,導(dǎo)致活性氧產(chǎn)生,影響細(xì)胞穩(wěn)態(tài)[6]。最近的PAH模型大鼠線粒體蛋白質(zhì)組分析鑒定了TUFM的差異表達(dá)[7],但關(guān)于TUFM在PAH進(jìn)展中的生物學(xué)作用知之甚少。因此,本研究旨在揭示TUFM對PAH發(fā)生發(fā)展的影響,并探討其可能的調(diào)控機(jī)制,報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 材料與動物

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動物:36只健康雄性Sprague-Dawley大鼠(200～220 g,4～5周齡),由北京華阜康生物科技股份有限公司提供,許可證號:SCXK(京)2021-0004。所有大鼠均飼養(yǎng)于遼寧省人民醫(yī)院動物實(shí)驗(yàn)中心,標(biāo)準(zhǔn)飼養(yǎng)條件,自由飲食,適應(yīng)1周后進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

1.1.2 試劑耗材:大鼠肺動脈平滑肌細(xì)胞(PASMC)購自北京中科質(zhì)檢生物技術(shù)有限公司;野百合堿(MCT,貨號C2401,美國Sigma-Aldrich);蛋白定量檢測試劑盒(貨號:14G30C40,武漢博士德公司);蘇木素—伊紅(HE)染色試劑盒(貨號:G1120,北京索萊寶公司);TUFM、CD31、Bcl2相關(guān)X蛋白(Bax)抗體(貨號:ab173300、ab222783、ab182734,美國Abcam公司);α平滑肌肌動蛋白(α-SMA)抗體(貨號:BM0002,美國BOSTER公司);人微管相關(guān)蛋白輕鏈3(LC3)、芐氯素1重組蛋白(BECN1)、P62、凋亡酶激活因子(Apaf)、β肌動蛋白(β-actin)抗體(貨號:3868、3495、39749、8723、4970,美國CST公司);B淋巴細(xì)胞瘤2(Bcl2)抗體(貨號:ET1702-53,美國HUABIO公司);磷酸腺苷活化蛋白激酶(AMPK)、磷酸化(p)-AMPK、哺乳動物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、p-mTOR抗體(貨號:bs-5551R、bs-2771R、bs3494R、bs3495R);細(xì)胞計(jì)數(shù)(CCK-8)檢測試劑盒(貨號:HY-K0301,美國MCE公司)。

1.1.3 主要實(shí)驗(yàn)儀器:脈沖多普勒儀(Vevo 2100,Visualsonics公司);透射電子顯微鏡(HT 7700,日本HITACHI公司);Cytation3多功能酶標(biāo)儀(美國BioTek公司);Chemi Doc XRS化學(xué)發(fā)光凝膠成像分析系統(tǒng)(美國Bio-Rad公司);160HR高速冷凍離心機(jī)(美國賽默飛公司);倒置式生物顯微鏡(日本Olympus公司)。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法 2022年1月—2023年6月于遼寧省人民醫(yī)院中心實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

1.2.1 PAH實(shí)驗(yàn)動物模型構(gòu)建及分組:將36只大鼠隨機(jī)分成6組:空白對照(Ctrl)組,模型(PAH)組,TUFM過表達(dá)(OE)組,OE陰性對照(OE-NC)組,短發(fā)夾RNA(Sh)敲除TUFM(Sh)組和Sh陰性對照(Sh-NC)組,每組6只。Ctrl組僅給予等量生理鹽水,其余5組根據(jù)文獻(xiàn)[8],將溶解于0.5 mmol/L鹽酸(pH=7.4)溶液的1% MCT(60 mg/kg)一次性腹腔注射誘導(dǎo)肺源性心臟病大鼠模型?；诿绹鴩疑锛夹g(shù)信息中心相關(guān)序列(NM_001106295.1),選擇具有平滑肌22α(SM22a)基因的血清型腺相關(guān)病毒(AAV9)作為平滑肌特異性啟動子。對于OE和Sh組,在給予MCT的同時將1 ml含有1012GC/ml滴度的敲低或過表達(dá)的AAV9分別注射到大鼠尾靜脈中,OE-NC組和Sh-NC組使用等體積的相應(yīng)空溶劑作為陰性對照,4周后進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。序列如下:Sh-TUFM:上游,5′-CCCUGGUCAUGCAGAUUAUTT-3′和下游,5′-AUAAUCUGCAUGACCAGGGTT-3′和Sh-NC:上游,5′-UUCUCCGAACGUGUCACGUTT-3′,下游,5′-ACGUGACACGU-UCGGAGAATT-3′。

1.2.2 細(xì)胞模型制備及分組處理:PASMC聚集至80%～90%時,更換為無血清改良Eagle培養(yǎng)基,置于37℃培養(yǎng)箱內(nèi)饑餓處理24 h,更換常規(guī)培養(yǎng)基,隨機(jī)分為常氧(Norm)組、低氧(Hyp)組、小干擾RNA(SiRNA)-1組、SiRNA-2組、Si-NC組、OE-NC組和OE組。Norm組和Hyp組分別置于常氧(21%O2, 5%CO2,74%N2,37℃)和低氧(3%O2,5%CO2,92%N2,37℃)培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h;Si-NC組、SiRNA-1組、SiRNA-2組、OE-NC組和OE組細(xì)胞分別轉(zhuǎn)染攜帶Si-NC、Si-TUFM-1組、Si-TUFM-2、OE-NC和OE-TUFM質(zhì)粒,孵育6 h后,放入低氧培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h。序列如下,Si-TUFM-1:上游,5′-CACCGAGUUUGGCUAUAAATT-3′和下游,5′-UUUAUAGCCAAACUCGGUGTT-3′; Si-TUFM-2:上游,5′-GGGCUAAGUUCAAGAAGUATT-3′和下游,5′-UACUUCUUGAACUUAGCCCTT-3′; Si-NC:上游,5′-UUCUCCGAACGUGUCACGUTT-3′,下游:5′-ACGUGACACGUUCGGAGAATT-3′。

1.2.3 血流動力學(xué)測定和組織收集:各組大鼠使用2.5%戊巴比妥鈉(50 mg/kg)麻醉并固定在工作臺上。脈沖多普勒檢測肺動脈多普勒信號,并測量肺動脈加速時間(PAAT)。每次測量重復(fù)3次,計(jì)算平均值。使用頸靜脈右心導(dǎo)管插管直接檢測血流動力學(xué)數(shù)據(jù):經(jīng)頸行正中切口,鈍性分離右頸外靜脈,將3F聚乙烯導(dǎo)管插入主肺動脈,參照文獻(xiàn)[9]方法測量肺動脈壓力。用生理鹽水沖洗右肺和右心組織以清除血液,液氮冷凍,-80℃保存。左肺用4%多聚甲醛固定,石蠟切片行組織學(xué)檢查。

1.2.4 大鼠肺小動脈形態(tài)學(xué)檢測:根據(jù)HE染色試劑盒說明書,石蠟切片行HE染色,光學(xué)顯微鏡下觀察肺內(nèi)小動脈病理情況。在低倍視野下隨機(jī)選取外徑(ED)50～200 μm的血管,分析血管內(nèi)徑肥大情況。測量ED和中膜厚度(MT),并按照文獻(xiàn)[10]根據(jù)MT百分比(MT%=2×MT/ED×100%)計(jì)算動脈重塑。

1.2.5 免疫熒光共染色檢測TUFM定位:石蠟切片用過氧化氫處理后,5%牛血清白蛋白封閉,然后分別與TUFM、α-SMA或CD 31單克隆抗體在4°C下孵育過夜。洗滌未結(jié)合的一抗后,滴加異硫氰酸熒光素標(biāo)記的羊抗鼠IgG、Cy3標(biāo)記的羊抗兔IgG二抗在37°C下孵育30 min。用磷酸鹽緩沖液(PBS)代替一抗作為陰性對照。二氨基聯(lián)苯胺(DAB)顯色,蘇木精復(fù)染并封片,熒光顯微鏡下觀察拍照記錄。

1.2.6 蛋白免疫印跡法(Western blot)檢測TUFM、自噬、凋亡和AMPK/mTOR相關(guān)蛋白表達(dá):將收集的肺組織和PASMC細(xì)胞加入含有苯甲磺酰氟和磷酸酶抑制劑的蛋白裂解緩沖液,冰上裂解30 min。二喹啉甲酸法測定蛋白濃度,等量的蛋白通過十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳,轉(zhuǎn)膜后將聚偏二氟乙烯膜用5%脫脂牛奶封閉2 h,分別加入TUFM、LC3、BECN1、P62、Bax、Bcl2、AMPK、p-AMPK、mTOR、p-mTOR(抗體稀釋倍數(shù)1∶1 000)和β-actin(1∶10 000),4℃孵育過夜。次日,將膜與含有辣根過氧化物酶的二抗在室溫下孵育1 h。洗滌后,使用增強(qiáng)化學(xué)發(fā)光法對條帶顯影,以β-actin作為內(nèi)參,Image J軟件進(jìn)行灰度值測定分析。

1.2.7 CCK-8法檢測細(xì)胞增殖活力:根據(jù)說明書使用CCK-8試劑盒檢測細(xì)胞活力。用上述不同條件處理細(xì)胞,然后胰蛋白酶消化并均勻接種到96孔板中。每孔加入100 μl CCK-8混合液,37°C下孵育2 h。分別在12、24和36 h利用酶標(biāo)儀測量450 nm處吸光度。

1.2.8 透射電鏡檢測細(xì)胞線粒體結(jié)構(gòu):將PASMC細(xì)胞按照上述方式處理24 h后,戊二醛固定,用PBS洗滌3次。然后用1%鋨酸處理,再次用PBS沖洗,并用丙醇脫水。將細(xì)胞包埋在環(huán)氧樹脂和2%醋酸鈾-飽和乙醇溶液中。通過透射電子顯微鏡觀察不同處理組的線粒體結(jié)構(gòu)和自噬小體。

2 結(jié) 果

2.1 PAH模型大鼠肺動脈TUFM表達(dá)水平及定位 Western blot結(jié)果顯示,與Ctrl組比較,PAH組大鼠肺動脈TUFM蛋白表達(dá)顯著升高(P<0.05,圖1A、B)。熒光共染結(jié)果顯示,綠色熒光標(biāo)記的TUFM與紅色熒光標(biāo)記的PASMC標(biāo)志物α-SMA在肺小動脈內(nèi)膜重合為黃色熒光,存在共定位;而TUFM與內(nèi)皮細(xì)胞標(biāo)志物CD31未見明顯重合和共定位(圖1C)。

注:A.Western blot檢測PAH大鼠肺動脈TUFM蛋白表達(dá);B.灰度值統(tǒng)計(jì)圖;C.免疫熒光檢測TUFM定位(×200)。Marker.目的蛋白;TUFM.線粒體翻譯延伸因子TU;DAPI.4’,6’-二脒基-2-苯基吲哚;Merge.合并。與Ctrl組比較,*P<0.05,**P<0.01。

2.2 TUFM對PAH大鼠血流動力學(xué)的影響 與Ctrl組比較,PAH組肺動脈收縮壓(PASP)升高,PAAT縮短(P<0.05);與PAH組比較,OE組PASP顯著升高,PAAT明顯縮短(P<0.01);與PAH組比較,Sh組PASP降低,PAAT延長(P<0.05),見圖2。

注:A. 頸靜脈右心導(dǎo)管插管檢測PASP;B.脈沖多普勒超聲檢測PAAT。與Ctrl組比較,*P<0.05,**P<0.01;與PAH組比較,#P<0.05,##P<0.01。

2.3 TUFM對PAH大鼠肺動脈重構(gòu)的影響 HE染色結(jié)果顯示,與Ctrl組比較,PAH組大鼠遠(yuǎn)端肺小動脈管壁呈向心性增厚,管腔狹窄幾乎堵塞,MT百分比顯著升高(P<0.05);與PAH組比較,Sh組肺小動脈管壁厚度和管腔狹窄度有所改善;OE組肺小動脈管壁厚度明顯高于PAH組(P<0.05),見圖3。

注:與Ctrl組比較,*P<0.05,**P<0.01;與PAH組比較,#P<0.05。

2.4 TUFM對PAH大鼠線粒體自噬和細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)的影響 Western blot結(jié)果顯示,與Ctrl組比較,PAH組大鼠肺動脈TUFM、BECN1、LC3II/I和Bcl2蛋白表達(dá)升高,P62、Bax和Apaf蛋白表達(dá)降低(P<0.05);與PAH組比較,OE組肺動脈TUFM、BECN1、LC3II/I和Bcl2表達(dá)顯著升高,P62、Bax和Apaf表達(dá)明顯降低(P<0.05),Sh組TUFM、BECN1、LC3II/I和Bcl2表達(dá)降低,P62、Bax和Apaf表達(dá)升高(P<0.01),見圖4。

注:與Ctrl組比較,*P<0.05,**P<0.01;與PAH組比較,#P<0.05,##P<0.01。

2.5 缺氧對PASMC細(xì)胞TUFM蛋白表達(dá)的影響 與Norm組比較,Hyp組細(xì)胞缺氧刺激可上調(diào)TUFM表達(dá)(P<0.01),見圖5。

注:**P<0.01。

2.6 缺氧對PASMC細(xì)胞線粒體自噬和凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)的影響 與Si-NC組比較,SiRNA-1和SiRNA-2組細(xì)胞P62和Bax蛋白表達(dá)升高,BECN1、LC3II/I、Bcl2和TUFM表達(dá)降低(P<0.05);與OE-NC組比較,OE組細(xì)胞P62和Bax蛋白表達(dá)降低,BECN1、LC3II/I、Bcl2和TUFM表達(dá)升高(P<0.05),見圖6。

2.7 缺氧對PASMC細(xì)胞線粒體結(jié)構(gòu)的影響 透射電鏡發(fā)現(xiàn),Si-NC組和OE-NC組在缺氧條件下線粒體輕微腫脹,但膜仍完整;部分損傷的線粒體嵴減少,損傷線粒體包裹在自噬體中。SiRNA-1和SiRNA-2組細(xì)胞線粒體結(jié)構(gòu)完整,嵴存在,膜完整,僅有少量自噬溶酶體。OE組可見部分線粒體損傷崩解,嵴斷裂消失,以及一些含有受損線粒體片段的自噬小體,見圖7。

圖7 透射電鏡檢測缺氧對PASMC細(xì)胞線粒體結(jié)構(gòu)的影響(×8 000,箭頭代表自噬小體)

2.8 TUFM對缺氧誘導(dǎo)PASMC細(xì)胞增殖活性的影響 CCK-8法檢測結(jié)果顯示，與Si-NC組比較,SiRNA-1和SiRNA-2組細(xì)胞增殖活性顯著降低(P<0.05);與OE-NC組比較,OE組細(xì)胞增殖活性明顯升高(P<0.01),見圖8。

注:與Si-NC組比較,*P<0.05,**P<0.01;與OE-NC組比較,#P<0.05。

2.9 TUFM對缺氧誘導(dǎo)PASMC細(xì)胞AMPK/mTOR通路相關(guān)蛋白表達(dá)的影響 與Si-NC組比較,SiRNA-1和SiRNA-2組細(xì)胞p-AMPK表達(dá)降低,p-mTOR表達(dá)升高(P<0.05);與OE-NC組比較,OE組細(xì)胞p-AMPK表達(dá)升高,p-mTOR表達(dá)降低(P<0.05),見圖9。

注:*P<0.05,**P<0.01。

3 討 論

PAH是一種進(jìn)行性致死疾病,以肺小動脈重塑導(dǎo)致肺動脈阻力增加為特征,最終發(fā)展為右心功能障礙或右心衰竭。PAH發(fā)病機(jī)制復(fù)雜,涉及遺傳、缺氧、氧化應(yīng)激、糖代謝失衡等多方面因素,其病理主要包括PASMC過度增殖和/或抑制凋亡以及膠原和彈性蛋白等細(xì)胞外基質(zhì)的積累。但由于其分子機(jī)制不完全清楚,臨床缺乏有效治療藥物,預(yù)后仍然較差。因此,迫切需要探索能有效抑制PASMC增殖并改善肺動脈重塑的靶向藥物和內(nèi)在機(jī)制。

線粒體作為細(xì)胞穩(wěn)態(tài)的中心監(jiān)護(hù)者,協(xié)調(diào)多種細(xì)胞生物過程,如細(xì)胞周期進(jìn)程、線粒體動力學(xué)和細(xì)胞代謝等,與PAH的發(fā)病機(jī)制和病理過程密切相關(guān)[11]。TUFM是線粒體DNA翻譯表達(dá)的重要因子,在線粒體功能調(diào)控中起關(guān)鍵作用。既往研究顯示,TUFM可控制線粒體DNA編碼肽的氨基酸延伸,并且其水平的變化能夠影響多種細(xì)胞生物活性[6, 12-13]。最近的PAH肺動脈蛋白質(zhì)組學(xué)研究發(fā)現(xiàn),PAH與正常個體之間存在TUFM差異表達(dá)[7]。因此,結(jié)合PAH的發(fā)病機(jī)制以及TUFM與線粒體功能的關(guān)系,推測TUFM可能參與PAH的發(fā)生發(fā)展。本研究在MCT誘導(dǎo)PAH大鼠模型中發(fā)現(xiàn),與空白對照組相比,PAH大鼠和細(xì)胞模型中TUFM表達(dá)明顯增加,且主要定位于肺小動脈中膜平滑肌細(xì)胞,而不聚集于內(nèi)層內(nèi)皮細(xì)胞,與PAH主要病變細(xì)胞相一致[14]，這提示低氧誘導(dǎo)的PAH發(fā)生發(fā)展過程中TUFM可能起到一定程度的作用,但其中機(jī)制尚不明確。

為了探索TUFM是否參與PAH的發(fā)展及其在病理過程中的作用,本研究引入TUFM敲低或過表達(dá)質(zhì)粒的AAV9腺相關(guān)病毒,構(gòu)建MCT處理的TUFM沉默或過表達(dá)大鼠模型。4周后,TUFM的缺失抑制了PAH的發(fā)展,改善PAH小鼠血流動力學(xué)情況和肺小動脈血管重構(gòu),而過表達(dá)TUFM則加重PAH病理結(jié)構(gòu)損傷。此外,與自噬呈負(fù)相關(guān)的自噬底物P62在Sh組中的表達(dá)水平高于PAH組,表明在無TUFM的情況下肺動脈線粒體自噬減少。自噬產(chǎn)物L(fēng)C3II/I和BECN1水平降低也顯示了Sh組線粒體自噬減少。據(jù)報(bào)道,PAH的發(fā)生與PASMC的自噬激活、過度增殖和凋亡抵抗密切相關(guān)[14],存在自噬/凋亡互反饋調(diào)節(jié)機(jī)制,逆轉(zhuǎn)自噬/凋亡失衡可有效改善血管重構(gòu),從而降低肺動脈壓。研究發(fā)現(xiàn),BECN1/Bcl-2在調(diào)控自噬/凋亡平衡中發(fā)揮關(guān)鍵調(diào)控作用[15]。另外,本研究發(fā)現(xiàn)TUFM沉默促進(jìn)PASMC細(xì)胞增殖的同時,引起抗凋亡基因Bcl-2表達(dá)下調(diào),而凋亡促進(jìn)因子Bax和Apaf表達(dá)上調(diào),反之亦然。因此,TUFM的缺失減輕了體內(nèi)PAH的發(fā)展,這可能歸因于線粒體自噬和凋亡調(diào)節(jié)。

為了探討TUFM基因沉默抑制線粒體自噬和增殖/凋亡的分子機(jī)制,筆者重點(diǎn)研究了已知的信號分子AMPK和mTOR來闡明可能的途徑。據(jù)報(bào)道,AMPK和mTOR通過調(diào)控自噬激活激酶1(ULK1)調(diào)節(jié)自噬,Lin等[16]報(bào)道,雙酚A可通過激活A(yù)MPK/mTOR/ULK1信號通路激活促進(jìn)卵巢顆粒細(xì)胞自噬。Gui等[17]發(fā)現(xiàn),紅景天苷通過AMPK/mTOR/ULK1通路上調(diào)細(xì)胞自噬,減輕低氧誘導(dǎo)的肺動脈平滑肌細(xì)胞增殖和凋亡抵抗。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn),AMPK和mTOR的總蛋白水平不受TUFM水平的影響,但p-AMPK和p-mTOR的磷酸化激活受TUFM表達(dá)的調(diào)節(jié)。這說明AMPK和mTOR的活性在一定程度上受TUFM調(diào)控。此外,線粒體自噬標(biāo)志物P62、BECN1和LC3II/I均受TUFM和p-AMPK/p-mTOR的調(diào)節(jié)。既往研究提示,AMPK通過磷酸化其Ser-555和Ser-777位點(diǎn)來刺激ULK1,而mTOR通過磷酸化ULK1中的不同Ser殘基(Ser-757)來抑制自噬[18]。而且mTOR抑制劑和/或AMPK激活劑預(yù)處理內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激可擴(kuò)大自噬的“生存窗口”。 這些研究表明,AMPK/mTOR通路在線粒體自噬中起樞紐作用,并調(diào)節(jié)線粒體功能和穩(wěn)態(tài)。最近有學(xué)者提出,AMPK/mTOR誘導(dǎo)的線粒體自噬增強(qiáng)通過控制一些蛋白的濃縮和溶解來調(diào)節(jié)編碼關(guān)鍵線粒體蛋白的核mRNA[19]。而且,TUFM是AMPK和mTOR的上游分子,這一點(diǎn)通過敲低或過表達(dá)的狀態(tài)得到證實(shí)。這些結(jié)果提示,TUFM通過參與線粒體蛋白的合成,影響線粒體功能和穩(wěn)態(tài),進(jìn)而調(diào)節(jié)整個細(xì)胞的功能。

本研究也存在一些局限性,首先,盡管缺氧可以部分模擬PAH的體內(nèi)環(huán)境,但它并不完全代表MCT誘導(dǎo)PAH的發(fā)病機(jī)制,TUFM研究需要一種模擬PAH的良好體外刺激。其次,遺憾的是沒有使用AMPK或mTOR的干擾劑來進(jìn)一步證實(shí)信號通路。鑒于線粒體功能調(diào)控在細(xì)胞周期過程中的重要性和復(fù)雜性,下一步的研究將從線粒體的功能和代謝調(diào)控兩個方面來探討PAH的發(fā)生機(jī)制。

綜上所述,抑制TUFM可通過激活A(yù)MPK/mTOR信號通路抑制PAH肺動脈平滑肌細(xì)胞線粒體自噬,改善PASMC在缺氧條件下的增殖/凋亡失衡,這說明PAH肺動脈平滑肌細(xì)胞過度增殖至少部分是由于TUFM被激活促進(jìn)線粒體自噬而導(dǎo)致的,這為改善PAH肺動脈重塑提供了新的靶點(diǎn)。

利益沖突：所有作者聲明無利益沖突

作者貢獻(xiàn)聲明

崔本科:設(shè)計(jì)研究方案,實(shí)施研究過程,論文撰寫;王巖:提出研究思路,分析實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù),論文審核;盧云鳳:實(shí)施研究過程,資料搜集整理;杜鵑:進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析;翟羽涵:論文修改