錨蛋白重復序列22(ANKRD22)對人肝癌細胞的影響及其機制

蔡浚哲 劉松柏 費曉斌 劉鵬 朱昌毫 王興 潘耀振

摘要： 目的 探討錨蛋白重復序列22（ANKRD22）對人肝癌細胞增殖、 侵襲和遷移的影響及其分子機制。方法 通過TCGA數(shù)據(jù)庫分析正常肝組織及肝細胞癌組織中ANKRD22的表達水平及其與預后的關系。通過qRT-PCR和Western Blot檢測人正常肝細胞 （L-02） 和人肝癌細胞系 （Huh7、 Hep G2、 MHCC-97H、 SK-HEP-1、 SMMC-7721） 中ANKRD22的表達情況。通過CCK-8、 EdU、 劃痕實驗及Transwell檢測ANKRD22對肝癌細胞增殖、 侵襲和遷移能力的影響。通過Western Blot檢測ANKRD22與細胞周期蛋白、 EMT相關蛋白之間的關系。通過KEGG、 ssGSEA分析進一步探究ANKRD22在肝癌細胞中的作用機制， 并進行實驗驗證。計量資料兩組間比較采用成組t檢驗， 多組間比較采用單因素方差分析， 進一步兩兩比較采用LSD-t檢驗。結果 TCGA數(shù)據(jù)庫中ANKRD22在肝細胞癌組織中較正常肝組織高表達 （t=5. 083， P<0. 05）， 且ANKRD22高表達患者的總生存期及疾病相關生存期均顯著低于ANKRD22低表達的患者 （P值均<0. 05）。肝癌細胞系中ANKRD22的表達量均高于正常肝細胞 （P值均<0. 05）。增殖實驗結果提示， ANKRD22過表達組的EdU陽性率、 增殖速度均高于空載對照 （Vector） 組 （t值分別為19. 60、 6. 72， P值均<0. 001）； si-ANKRD22#2組及si-ANKRD22#3組的EdU陽性率、 增殖速度較si-NC組均降低 （P值均<0. 001）。Cyclin E1、 Cyclin D1、 CDK7、 CDK4在過表達組中表達高于Vector組 （t值分別為3. 54、 4. 95、6. 34、 5. 19， P值均<0. 01）； 在si-ANKRD22#2組及si-ANKRD22#3組中表達均低于si-NC組 （P值均<0. 001）。P27在過表達組中表達低于 Vector 組（t=6. 12， P<0. 001）， 在 si-ANKRD22#2 組及 si-ANKRD22#3 組中表達均高于 si-NC 組（P 值均<0. 001）。侵襲、 遷移實驗結果提示， ANKRD22過表達組的遷移速度、 穿膜數(shù)量 （遷移組和侵襲組） 均高于Vector組 （t值分別為5. 01、 25. 60、 3. 67， P值均<0. 05）； si-ANKRD22#2組及si-ANKRD22#3組的遷移速度、 穿膜數(shù)量 （遷移組和侵襲組） 較si-NC組均降低 （P值均<0. 01）。N-cadherin、 Vimentin、 Snail在過表達組中表達高于Vector組 （t值分別為12. 13、 8. 85、 13. 97，P值均<0. 001）， 在si-ANKRD22#2組及si-ANKRD22#3組中表達均低于si-NC組 （P值均<0. 001）； E-cadherin在過表達組中表達低于Vector組 （t=4. 98， P<0. 01）， 在si-ANKRD22#2組及si-ANKRD22#3組中表達均高于si-NC組 （P值均<0. 001）。KEGG富集分析及ssGSEA分析提示， ANKRD22在肝細胞癌中與PI3K/AKT/mTOR信號通路相關， 在過表達組中， p-AKT/AKT、p-PI3K/PI3K、 p-mTOR/mTOR 均較 Vector 組升高（t 值分別為 12. 21、 3. 43、 9. 75， P 值均<0. 01）； 在 si-ANKRD22#2 組及si-ANKRD22#3組中表達均低于si-NC組 （P值均<0. 001）。結論 ANKRD22在肝癌細胞中高表達， 能促進肝癌細胞的增殖、侵襲和遷移能力， 并且能促進PI3K/AKT/mTOR信號通路的激活。

關鍵詞： ?癌， ?肝細胞； ?錨蛋白重復； ?細胞增殖； ?細胞運動

基金項目： ?國家自然科學基金 （81960431， ?81960535）； ?貴州省科技計劃項目 （黔科合支撐 〔2021〕 一般444）

Effect of ankyrin-repeat domain-containing protein 22 on human hepatoma cells and its mechanism

CAI Junzhe1， LIU Songbai2， FEI Xiaobin1， LIU Peng3， ZHU Changhao4， WANG Xing1， 4， PAN Yaozhen1， 4.（1. College of Clinical Medicine， Guizhou Medical University， Guiyang 550000， China；2. Department of Hepatobiliary Surgery， The Affiliated Baiyun Hospital of Guizhou Medical University， Guiyang 550000， China； 3. Department of Hepatobiliary Surgery， The Affiliated Hospital of Guizhou Medical University， Guiyang 550000， China； 4. Department of Hepatobiliary Surgery， The Affiliated Cancer Hospital of Guizhou Medical University， Guiyang 550000， China）

Corresponding author： ?PAN Yaozhen， ?panyaozhen@gmc.edu.cn ?（ORCID： ?0000-0002-9300-382X）

Abstract：

ObjectiveTo investigate the effect of ankyrin-repeat domain-containing protein 22 （ANKRD22） on the proliferation， invasion， and migration of human hepatoma cells and its molecular mechanism. Methods The TCGA database was used to analyze the expression level of ANKRD22 in normal liver tissue and hepatocellular carcinoma tissue and its association with prognosis. Western Blot and qRT-PCR were used to measure the expression of ANKRD22 in human normal liver cells （L-02） and human hepatoma cells （Huh7， HepG2， MHCC-97H， SK-HEP-1， and SMMC-7721）； CCK-8 assay， EdU， wound healing assay， and Transwell assay were used to observe the effect of ANKRD22 on the proliferation， invasion， and migration of hepatoma cells； Western Blot was used to investigate the association of ANKRD22 with cyclins and EMT-related proteins； KEGG and ssGSEA analyses were performed to investigate the mechanism of action of ANKRD22 in hepatoma cells， and related experiments were conducted for validation. The independent-samples t-test was used for comparison of continuous data between two groups； a one-way analysis of variance was used for comparison between multiple groups， and the least significant difference t-test was used for further comparison between two groups. Results In the TCGA database， the expression level of ANKRD22 in hepatoma tissue was significantly higher than that in normal liver tissue （t=5.083， P<0.05）， and the patients with a high expression level of ANKRD22 had longer overall survival and disease-related survival than those with a low expression level of ANKRD22 （P<0.05） . The expression level of ANKRD22 in various human hepatoma cell lines was higher than that in human normal liver cells （all P<0.05） . Cell proliferation assay showed that the ANKRD22 overexpression group had significantly higher EdU positive rate and proliferation rate than the Vector group （t=19.60 and 6.72， both P<0.001）， and compared with the si-NC group， the si-ANKRD22#2 group and the si-ANKRD22#3 group had significantly lower EdU positive rate and proliferation rate （all P<0.001） . Compared with the Vector group， the overexpression group had significantly higher expression levels of Cyclin E1， Cyclin D1， CDK7， and CDK4 （t=3.54， 4.95， 6.34， and 5.19， all P<0.01）， and the si-ANKRD22#2 group and the si-ANKRD22#3 group had significantly lower expression levels than the si-NC group （all P<0.001） . The overexpression group had a significantly lower expression level of P27 than the Vector group （t=6.12， P<0.001）， and the si-ANKRD22#2 group and the si-ANKRD22#3 group had a significantly higher expression level than the si-NC group （both P<0.001） . Invasion and migration experiments showed that compared with the Vector group， the ANKRD22 overexpression group had significantly higher migration rate and number of crossings through the membrane （migration group and invasion group） （t=5.01，25.60， and 3.67， all P<0.05）， and compared with the si-NC group， thesi-ANKRD22#2 group and the si-ANKRD22#3 group had significantly lower migration rate and number of crossings through the membrane （migration group and invasion group）（all P<0.01） . The overexpression group had significantly higher expression levels of N-cadherin， Vimentin， and Snail than the Vector group （t=12.13， 8.85， and 13.97， all P<0.001）， and the si-ANKRD22#2 group and the si-ANKRD22#3 group had significantly lower expression levels than the si-NC group （all P<0.001）； the overexpression group had a significantly lower expression level of E-cadherin than the Vector group （t=4.98， P<0.01）， and the si-ANKRD22#2 group and the si-ANKRD22#3 group had a significantly higher expression level than the si-NC group （both P<0.001） . The KEGG enrichment analysis and the ssGSEA analysis showed that ANKRD22 was associated with the PI3K/AKT/mTOR signaling pathway in hepatocellular carcinoma， and the overexpression group had significantly higher expression levels of p-AKT/AKT， p-PI3K/PI3K， and p-mTOR/mTOR than the Vector group （t=12.21， 3.43， and 9.75， all P<0.01）， and the si-ANKRD22#2 group and the si-ANKRD22#3 group had significantly lower expression levels than the si-NC group （all P<0.001） . Conclusion ANKRD22 is highly expressed in hepatoma cells and can promote the proliferation， invasion， and migration of hepatoma cells and the activation of the PI3K/AKT/mTOR signaling pathway.

Key words： ?Carcinoma， ?Hepatocellular； ?Ankyrin Repeat； ?Cell Proliferation； ?Cell Movement

Research funding： ? National Natural Science Foundation of China （81960431， ? 81960535）； ?Science and Technology Fund of?Guizhou Province ?（QKHZC ［2021］ YB444）

肝細胞癌 （HCC） 是世界上第六常見的惡性腫瘤， 并且是全球癌癥死亡第四大相關因素［1］ ， 并逐漸呈現(xiàn)上升趨勢［2］ 。HCC在早期可無癥狀， 確診時常已發(fā)展至中晚期［3］ ， 而晚期HCC患者可選擇的治療方案十分有限［4］ 。尤其在我國， 相關藥物仍未能滿足臨床上的諸多需求［5］ 。因此， 繼續(xù)尋找HCC相關的生物標志物具有重要價值。

錨蛋白重復序列22 （ankyrin-repeat domain-containing protein 22， ANKRD22）屬于錨蛋白（ANK）重復序列家族［6］ ， 是一種人N-肉豆蔻?；鞍祝?］ ， 含有4個重復的錨蛋白基序， 共有191個氨基酸， 并且在氨基酸87和109之間具有假定的單通道跨膜區(qū)域［8］ 。ANKRD22在多種惡性腫瘤中高表達， 但其在HCC中的作用尚不明確。本研究通過對ANKRD22進行過表達或者敲低， 來分析其對人HCC細胞增殖、 侵襲和遷移的影響及其分子機制。

1 材料與方法

1. 1 實驗材料 人正常肝細胞株L-02及肝癌細胞株Huh7、 Hep G2、 MHCC-97H、 SK-HEP-1和SMMC-7721均購于中國科學院上海分院細胞庫； DMEM培養(yǎng)基、 0. 25%胰蛋白酶、 10%胎牛血清等均購于美國Gibco公司； 過表達慢病毒購于中國上海吉凱基因公司； siRNA購于中國廣州銳博生物科技有限公司； Lipo3000 購于美國invitrogen公司； ANKRD22及相關抗體均購于中國武漢三鷹公司。

1. 2 生物信息學分析 在TCGA數(shù)據(jù)庫 （https： //portal.gdc. cancer. gov/） 中下載ANKRD22在正常肝組織及肝細胞癌組織中的相關數(shù)據(jù)， 運用R4. 2. 1軟件， 以 “l(fā)imma” 和“edgR” R包進行差異表達分析， 以 “survival” 和 “survminer” R包進行預后分析。然后將TCGA數(shù)據(jù)庫中篩選出的在HCC中與ANKRD22相關的基因進行KEGG富集分析尋找較多富集的通路， 并通過ssGSEA進行進一步分析。

1. 3 細胞培養(yǎng) 所有細胞株均使用含10%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基來進行培養(yǎng)， 細胞培養(yǎng)的環(huán)境為恒溫37 ℃、含5% CO2的無菌培養(yǎng)箱， 待細胞培養(yǎng)至對數(shù)期生長時提取以進行后續(xù)進一步實驗。

1. 4 細胞siRNA轉染 將對數(shù)期生長的細胞Huh7取2×105個接種于六孔板， 在細胞密度增至30%～40%時以Lipo3000為介質開始siRNA轉染。先以無血清培養(yǎng)基將Lipo3000及siRNA分別孵育5 min， 然后進行混合孵育15 min， 孵育結束后緩慢滴入六孔板中并搖勻， 放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)6 h后更換培養(yǎng)基， 24～48 h后可提取RNA并通過qRT-PCR驗證siRNA轉染效率， 48～72 h后可提取蛋白并通過Western Blot驗證siRNA轉染效率。

1. 5 細胞慢病毒感染 將對數(shù)期生長的細胞MHCC-97H取1×105個接種于培養(yǎng)瓶內， 約24 h后開始病毒感染， 依照病毒的MOI值將病毒吸入培養(yǎng)瓶內并搖勻， 放入培養(yǎng)箱24 h后更換培養(yǎng)基， 約48 h后可提取RNA并通過qRT-PCR驗證病毒轉染效率， 約72 h后可提取蛋白并通過Western Blot驗證病毒轉染效率。

1. 6 qRT-PCR實驗 收集待處理的細胞， 使用Trizol試劑以提取細胞的總RNA， 使用PrimeScriptTM RT Reagent試劑盒進行逆轉錄以得到cDNA， 使用SYBR?Premix Ex TaqTM試劑盒進行qRT-PCR分析， 每組分別設置5個復孔，反應條件為95 ℃、 30 s， 95 ℃、 5 s， 60 ℃、 30 s， 擴增40個循環(huán)， 得到的結果使用Bio-Rad CFX Manager進行分析， 以GAPDH基因作為內參， 使用公式2?ΔΔCt計算得到目的基因相對于GAPDH的表達量。

1. 7 Western Blot實驗 收集待處理的細胞， 加入裂解液以提取細胞的總蛋白， 使用SDS-PAGE凝膠進行電泳以分離蛋白， 在300 mA下轉膜至PVDF膜上， 用5%脫脂牛奶室溫封閉2 h， 放入一抗4 ℃孵育過夜， 第二天放入二抗中室溫孵育2 h， 滴加顯影液后在化學發(fā)光儀中顯影。

1. 8 劃痕實驗 將對數(shù)期生長的細胞取5×105個接種于六孔板內， 待細胞覆蓋大于90%孔徑時， 以200 ?L規(guī)格槍頭垂直劃線， 并用PBS清洗后置于顯微鏡下拍照，放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48 h后再次拍照。

1. 9 CCK-8實驗 將對數(shù)期生長的細胞取3×103個接種于96孔板內， 待細胞貼壁后加入CCK-8試劑， 計為0 h，并用酶標儀檢測于450 nm處各孔吸光度值， 后分別于培養(yǎng)24 h、 48 h、 72 h、 96 h后重復檢測。

1. 10 EdU增殖實驗 將對數(shù)期生長的細胞取3×104個細胞接種于24孔板內， 待細胞貼壁后加入EdU工作液于培養(yǎng)箱內孵育2 h， 然后棄去培養(yǎng)基、 固定細胞， 用TritonX-100透膜后加入熒光染料進行染色， 待染色結束后用熒光顯微鏡進行觀察計數(shù)并計算陽性率。

1. 11 Transwell試驗 將對數(shù)期生長的細胞懸浮于無血清培養(yǎng)基中， 將含3×104個細胞的細胞懸液滴加于含或不含基質膠的上室內， 并將含20%胎牛血清的培養(yǎng)基滴加于下室內， 置于培養(yǎng)箱內培養(yǎng)24～48 h后吸去培養(yǎng)基， 用PBS清洗后加入4%多聚甲醛固定， 固定完成后用PBS清洗， 再加入0. 3%結晶紫固定， 染色結束后用PBS清洗， 待烘干后置于顯微鏡下觀察細胞數(shù)量。

1. 12 統(tǒng)計學分析 使用SPSS 25. 0統(tǒng)計軟件進行分析， 計量資料兩組間比較采用成組t檢驗， 多組間比較采用單因素方差分析， 進一步兩兩比較使用LSD-t檢驗， P<0. 05為差異具有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2. 1 ANKRD22在HCC中的表達 通過對TCGA數(shù)據(jù)庫進行分析， 結果提示ANKRD22在HCC組織中較正常肝組織高表達 （t=5. 083， P<0. 001）（圖1a）， 且ANKRD22高表達患者的總生存期及疾病相關生存期均顯著低于低表達的患者 （P值均<0. 05）（圖1b、 c）。進一步以qRT-PCR及Western Blot對肝癌細胞系中ANKRD22表達情況進行檢測， 結果提示肝癌細胞系中ANKRD22的表達量均高于正常肝細胞 （P值均<0. 05）（圖1d、 e）； 其中Huh7的表達量最高， MHCC-97H的表達量次之， 故以此2種細胞進行后續(xù)實驗。

2. 2 ANKRD22轉染后的表達情況 使用過表達慢病毒轉染 MHCC-97H， 使用 siRNA 轉染 Huh7， 并以 qRT-PCR 及 Western Blot 進行驗證。結果提示， 過表達組MHCC-97H的ANKRD22 mRNA （t=85. 21， P<0. 001） 及蛋白（t=35. 27， P<0. 001） 表達量均明顯高于空載對照組 （Vector組）（圖2a、 b）； 3個敲低組Huh7的mRNA及蛋白表達量均較陰性對照組 （si-NC組） 降低 （P值均<0. 01）， 其中si-ANKRD22#2組及si-ANKRD22#3組的敲低效果較為顯著（圖2c、 d）， 故繼續(xù)以si-ANKRD22#2及si-ANKRD22#3完成后續(xù)實驗。以上結果提示過表達組和敲低組均構建成功。

2. 3 ANKRD22對肝癌細胞增殖能力的影響 EdU增殖實驗結果提示， 過表達組的陽性率高于 Vector 組（t=19. 60， P<0. 001）； si-ANKRD22#2組及si-ANKRD22#3組的陽性率較si-NC組均降低 （P值均<0. 001）（圖3a、 b）。CCK-8實驗結果提示， 過表達組的增殖速度高于Vector組 （t=6. 72， P<0. 01）； si-ANKRD22#2組及si-ANKRD22#3組的增殖速度均較si-NC組降低 （P值均<0. 05）（圖3c）。Western Blot結果提示， Cyclin E1、 Cyclin D1、 CDK7、 CDK4在過表達組中表達高于Vector組 （t值分別為3. 54、 4. 95、 6. 34、5. 19， P值均<0. 01）； 在si-ANKRD22#2組及si-ANKRD22#3組中表達均低于si-NC組 （P值均<0. 001）。P27在過表達組中表達低于Vector組 （t=6. 12， P<0. 001）， 在si-ANKRD22#2組及si-ANKRD22#3組中表達均高于si-NC組 （P值均<0. 001）（圖3d）。

2. 4 ANKRD22對肝癌細胞侵襲、 遷移能力的影響 劃痕實驗結果提示， 過表達組MHCC-97H的遷移速度高于Vector組 （t=5. 01， P<0. 01）； si-ANKRD22#2組及si-ANKRD22#3組的遷移速度均較si-NC組降低 （P值均<0. 01）（圖4a、b） 。Transwell實驗結果提示， 過表達組的穿膜數(shù)量高于Vector組 （遷移組： t=25. 60， P<0. 001； 侵襲組： t=3. 67， P<0. 05）； si-ANKRD22#2組及si-ANKRD22#3組的穿膜數(shù)量均較si-NC組降低 （P值均<0. 01）（圖4c～e）。進一步通過Western Blot分別對Vector組、 過表達組、 si-NC組、 si-ANKRD22#2組、 si-ANKRD22#3組與EMT相關蛋白之間的關系進行驗證， 結果提示N-cadherin、 Vimentin、 Snail在過表達組中表達高于Vector組 （t值分別為12. 13、 8. 85、13. 97， P值均<0. 001）， 在si-ANKRD22#2組及si-ANKRD22#3組中表達均低于si-NC組 （P值均<0. 001）； E-cadherin在過表達組中表達低于Vector組 （t=4. 98， P<0. 01）， 在si-ANKRD22#2組及si-ANKRD22#3組中表達均高于si-NC組 （P值均<0. 001）（圖4f）。

2. 5 ANKRD22在肝癌細胞中的作用機制 KEGG富集分析結果提示， ANKRD22在HCC組織中富集于PI3K/AKT/mTOR、 JAK/STAT、 NF-κB等多條信號通路， 其中在PI3K/AKT/mTOR信號通路上的富集最為顯著 （圖5a）。ssGSEA富集分析結果提示， ANKRD22在HCC組織中正向顯著富集于PI3K/AKT/mTOR信號通路 （圖5b）。通過Western Blot對ANKRD22在肝癌細胞中對AKT、 PI3K、mTOR的磷酸化水平進行驗證， 結果提示在過表達組中，p-AKT/AKT、 p-PI3K/PI3K、 p-mTOR/mTOR均較Vector組升高 （t值分別為12. 21、 3. 43、 9. 75， P值均<0. 01）； 在si-ANKRD22#2 組及 si-ANKRD22#3 組中， p-AKT/AKT、 p-PI3K/PI3K、 p-mTOR/mTOR 均較 si-NC組降低（P值均<0. 001）（圖5c）。

3 討論

2021年統(tǒng)計數(shù)據(jù)［9］ 顯示， 我國肝癌患者數(shù)量占全球近50%， 肝癌作為在我國惡性腫瘤中發(fā)病率第4位、 致死率第2位的疾?。?0］ ， 仍需繼續(xù)高度關注。

ANK是自然界中最常見的蛋白質基序之一， 廣泛參與多種細胞過程［11］。ANKRD22作為ANK家族中的一員， 可能與人體內的多種生物學功能有關。當前相關研究表明ANKRD22與多種惡性腫瘤相關， 其中Liu等［12］ 發(fā)現(xiàn)ANKRD22可以通過上調E2F1介導的MELK表達促進膠質瘤增殖、 遷移、 侵襲和上皮-間充質轉化； Wu等［13］ 發(fā)現(xiàn)ANKRD22可以通過調節(jié)NuSAP1表達激活Wnt/β-連環(huán)蛋白通路來促進乳腺癌； Yin等［14］ 發(fā)現(xiàn)ANKRD22可以通過上調E2F1的轉錄來促進非小細胞肺癌的進展； Wu等［15］ 發(fā)現(xiàn)ANKRD22可以通過調節(jié)Wnt/β-連環(huán)蛋白信號通路從而影響甲狀腺癌細胞的生長和遷移。因此筆者假設ANKRD22在肝癌細胞中也能起到促癌作用， 并且通過相關驗證發(fā)現(xiàn)ANKRD22的確對肝癌細胞的增殖、侵襲和遷移起促進作用。但是， Pan等［16］ 發(fā)現(xiàn)ANKRD22通過與E-syt1合作從而促進結直腸癌的代謝重編程；Chen等［17］發(fā)現(xiàn)ANKRD22可以通過逆轉PMN-MDSC的免疫抑制作用從而成為卵巢癌治療的新靶點； Qiu等［18］發(fā)現(xiàn)ANKRD22可能在前列腺癌的進程中起負向作用。說明ANKRD22在人體中有著復雜的生物學功能， 在肝癌細胞中也有可能有著更多的生物學功能， 本研究發(fā)現(xiàn)ANKRD22與PI3K/AKT/mTOR信號通路相關， 但具體作用方式尚不明確。

本研究通過TCGA數(shù)據(jù)庫發(fā)現(xiàn)ANKRD22在人HCC組織中高表達且與患者的生存時間呈負相關。隨后通過細胞實驗發(fā)現(xiàn)， 在肝癌細胞中， ANKRD22較正常肝細胞中高表達且ANKRD22的表達水平與肝癌細胞的增殖、 侵襲和遷移能力呈正相關。為進一步探究ANKRD22在肝癌細胞中的作用機制， 通過富集分析發(fā)現(xiàn)其與PI3K/AKT/mTOR信號通路相關， 并通過實驗證明ANKRD22的表達量與AKT、 PI3K、 mTOR的磷酸化水平呈正相關， 筆者推測ANKRD22通過影響PI3K/AKT/mTOR信號通路從而促進肝癌的進展。此外， PI3K/AKT/mTOR信號通路在肝癌中與代謝重編程［19］ 、 上皮-間充質轉化［20］ 、 脂質合成［21］等多種生物學功能相關， ANKRD22具體如何作用于PI3K/AKT/mTOR信號通路影響肝癌細胞的增殖、 侵襲和遷移，ANKRD22是否通過其他機制調控肝癌細胞生長等方面尚不明確， 仍需繼續(xù)進行后續(xù)研究進一步探索。

利益沖突聲明： 本文不存在任何利益沖突。

作者貢獻聲明： 蔡浚哲、 劉松柏、 費曉斌負責實驗操作；劉鵬、 朱昌毫負責資料收集與數(shù)據(jù)分析； 王興負責課題設計； 潘耀振指導撰寫論文并最后定稿。

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收稿日期：2023-10-13； 錄用日期：2023-11-17

本文編輯：王瑩