DOI：10.3969/j.issn.10001565.2024.04.005

摘要：建立杞黃醒腦顆粒的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，為其質(zhì)量控制提供依據(jù).采用薄層色譜法（TLC）對杞黃醒腦顆粒中枸杞子、淫羊藿、丹參、仙茅、當(dāng)歸、何首烏進(jìn)行鑒別，采用高效液相色譜法（HPLC）測定制劑中二苯乙烯苷的含量.色譜柱 Waters Bridge C18柱（4.6×250 mm， 5 μL），流動相為甲醇-水（體積比36∶64），檢測波長 320 nm，流速 1.0 mL/min，柱溫 30 ℃.結(jié)果表明枸杞子、淫羊藿、丹參、仙茅、當(dāng)歸、何首烏的TLC圖譜主斑點清晰，分離度好，陰性對照無干擾；二苯乙烯苷在0.195 6～2.934 0 μg（R2=0.999 5，n=6）內(nèi)線性關(guān)系良好，精密度、重復(fù)性、穩(wěn)定性的RSD均小于2.0%，加樣回收率為96.38%～100.19%，RSD為1.48%.該質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)項目設(shè)置合理，操作便捷、準(zhǔn)確，可用于杞黃醒腦顆粒的質(zhì)量控制.

關(guān)鍵詞：杞黃醒腦顆粒；質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)；二苯乙烯苷；薄層色譜法；高效液相色譜法

中圖分類號：R927；R917文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A文章編號：10001565（2024）04037309

Quality standard of Qihuang Xingnao Granules

SHAO Zhenzhen1 ， ZHAO Ziwei1， LIU Xiaomeng1， LI Lili2， ZHANG Yali3， HA Jing1

（1.School of Chemical and Pharmaceutical Engineering， Hebei University of Science and Technology，

Shijiazhuang 050018， China; 2.Hebei Yuzhilin Pharmaceutical Company Limited， Xingtai 054400， China;

3.College of Sciences，Hebei University of Science and Technology，Shijiazhuang 050018， China）

Abstract： The quality standard of Qihuang Xingnao Granule is established to provide reference for its quality control. Thin layer chromatography （TLC） was used to identify Barbary wolfberry， Epimedium， Salvia miltiorrhiza， Rhizoma curculiginis， Angelica sinensis and Polygonum multiflorum in the granules. The content of diphenylvinyl glycosides in the preparation was determined by high performance liquid chromatography （HPLC）. The HPLC conditions were： Waters Bridge C18 column （4.6× 250 nm， 5 μL）， methanol-water （36∶64）， detection wavelength of 320 nm， flow rate of 1.0 mL/min， and a column temperature of 30 ℃. The main TLC spots of Barbary wolfberry， Epimedium， Salvia miltiorrhiza， Rhizoma curculiginis， Angelica sinensis and Polygonum multiflorum were clear， the separation was good， and the negative control had no interference. The stilbenside was linearly related in the range of 0.195 6 to 2.934 0 μg （R2=0.999 5， n=6）， the RSD of precision， repeatability and stability was less than 2.0%， the sample recovery rate ranged from 96.38% to 100.19%， and the RSD was 1.48%. The quality standard project is set reasonably， convenient and accurate， and can be used for the quality control of Qihuang Xingnao Granules.

Key words： Qihuang Xingnao Granules; quality standard; diphenylvinyl glycosides; TLC; HPLC

收稿日期：20231219;修回日期：20240108

基金項目：河北省自然科學(xué)基金資助項目（H20200824）

第一作者：邵珍珍（1998—），女，河北科技大學(xué)在讀碩士研究生，主要從事藥物分析研究. E-mail：3213065583@qq.com

通信作者：哈婧（1970—），女，河北科技大學(xué)教授，主要從事藥物分析研究.E-mail：hajing@hebust.edu.cn

杞黃醒腦顆粒是在傳統(tǒng)經(jīng)驗處方的基礎(chǔ)上，由熟地黃、枸杞子、何首烏、當(dāng)歸、丹參、淫羊藿等11味中藥組成的醫(yī)院制劑，本方中熟地黃滋陰補血、益精填髓［1］，何首烏補肝腎、益精血［2］，枸杞子滋補肝腎、益精明［3］，熟地黃與何首烏、枸杞子配伍滋補肝腎、益精填髓［4］.當(dāng)歸具有補血活血、調(diào)經(jīng)止痛的功效，而丹參具有活血祛瘀的功效.兩者合用祛瘀補虛瀉實，從而達(dá)到扶正祛邪，改善患者神志癥狀，治療癡呆的目的［5］.石菖蒲、遠(yuǎn)志具有化痰開竅、益智安神的功效［6］.茯苓能利竅去濕、開心益智［7］.肉蓯蓉具有補精益髓作用［8］.仙茅、淫羊藿二藥配伍，補腎陽，強筋骨，祛風(fēng)濕，相須為用，相得益彰［9］.諸藥合用，益氣生髓，活血祛瘀通絡(luò)，化濕祛濁，具有滋補肝腎、化瘀通絡(luò)、溫化寒痰、醒腦開竅、健腦益智的功效，主要用于癡呆癥及腦血管所致的智能及認(rèn)知障礙臨床綜合征的治療.本方在臨床應(yīng)用中效果較好，為保證制劑的質(zhì)量穩(wěn)定，安全有效，本文對杞黃醒腦顆粒的質(zhì)量控制方法進(jìn)行研究，采用薄層色譜（TLC）法鑒別制劑中的枸杞子、何首烏、當(dāng)歸、仙茅、淫羊藿和丹參，臣藥何首烏中主要有效成分二苯乙烯苷的含量采用高效液相色譜（HPLC）法測定，實驗表明采用的方法操作簡便，靈敏度高、重復(fù)性好，可用于杞黃醒腦顆粒的質(zhì)量控制.

1儀器與試藥

1.1儀器

KQ-5200B型超聲波清洗器（昆明超聲儀器有限公司）；LC-10ATVP島津液相色譜（日本島津）；電子分析天平（梅特勒-托利多股份公司）；101-2AB型干燥箱（泰斯特儀器廠）；電熱恒溫水浴鍋（北京市永光明醫(yī)療儀器有限公司）；硅膠G薄層板（Merck公司）；定量毛細(xì)管（5 μL）.

1.2試藥

杞黃醒腦顆粒（批號：20220301、20220302、20220303、20220304、20220305），杞黃醒腦顆粒陰性樣品（實驗室自制小樣）；枸杞子（121072-202112）對照藥材；丹參（120923-201816）對照藥材；仙茅（121505-202104）對照藥材；當(dāng)歸（120927-202118）對照藥材；何首烏（120934-202111）對照藥材；淫羊藿（121632-202103）對照藥材；淫羊藿苷（110737-202017）對照品；2，3，5，4′-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷（批號：110844-202116）對照品均購于中國食品藥品檢定研究院；水為娃哈哈飲用純凈水，液相所用（甲醇、乙腈）為色譜純，其他試劑均為分析純.

2方法與結(jié)果

2.1TLC鑒別

2.1.1枸杞子

杞黃醒腦顆粒供試品溶液：取杞黃醒腦顆粒粉末5 g，加入35 mL蒸餾水，煎煮15 min，涼后過濾，濾液中加入乙酸乙酯萃取，濃縮乙酸乙酯溶液，作為供試品溶液.

枸杞子對照藥材溶液：取枸杞子對照藥材0.5 g，按上法制備得到枸杞子對照藥材溶液.

枸杞子陰性對照溶液：取缺少枸杞子的陰性杞黃醒腦顆粒樣品粉末5 g，按上法制備得到枸杞子陰性對照溶液.

吸取杞黃醒腦顆粒供試品溶液和枸杞子陰性對照溶液8 μL，枸杞子對照藥材溶液6 μL，點樣（G型硅膠板），使用二氯甲烷-乙酸乙酯-甲酸（體積比為6∶4∶0.3）展開，取出，揮干后，365 nm下檢視.杞黃醒腦顆粒供試品和枸杞子對照藥材在TLC圖中標(biāo)記位置有分離度較好、顏色相同的熒光斑點，枸杞子陰性對照溶液沒有此斑點（圖1）.

2.1.2淫羊藿

杞黃醒腦顆粒供試品溶液：取杞黃醒腦顆粒粉末10 g，加入20 mL熱水后，進(jìn)行20 min超聲處理，冷卻后離心，加入20 mL乙酸乙酯對上清液萃取2次，蒸干2次所得提取溶液，用1 mL甲醇溶解.

淫羊藿對照藥材溶液：取淫羊藿對照藥材約1 g，按上法制備得到淫羊藿對照藥材溶液.

淫羊藿苷對照品：取淫羊藿苷對照品，制成約0.1 mg/mL（溶劑為甲醇）的淫羊藿苷對照品溶液.

淫羊藿陰性對照溶液：再取處方中缺少淫羊藿的陰性樣品顆粒，按上述杞黃醒腦顆粒供試品溶液的制備方法制備.

吸取杞黃醒腦顆粒供試品溶液、淫羊藿對照藥材溶液、淫羊藿陰性對照溶液10 μL，淫羊藿苷對照品溶液6 μL，點樣（G硅膠板），展開劑為乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水（體積比為10∶1∶1∶1），取出揮干，噴顯色劑（質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1%AlCl3），紫外365 nm檢視，杞黃醒腦顆粒供試品、淫羊藿對照藥材和淫羊藿苷對照品溶液在TLC圖中標(biāo)記位置有分離度較好、顏色相同的黃色熒光斑點，淫羊藿陰性對照溶液沒有此斑點（圖2）.

1.枸杞子陰性對照溶液;2.枸杞子對照藥材溶液;

3、4.杞黃醒腦顆粒供試品溶液

1.淫羊藿陰性對照溶液;2.淫羊藿苷對照品溶液;

3.淫羊藿對照藥材溶液；

4、5.杞黃醒腦顆粒供試品溶液

2.1.3丹參

杞黃醒腦顆粒供試品溶液：取杞黃醒腦顆粒粉末10 g，加入20 mL甲醇后，進(jìn)行15 min超聲處理，然后過濾，將所得濾液蒸干，得到濾液殘渣，用30 mL蒸餾水將殘渣溶解，加約20 mL的乙酸乙酯萃取2次，蒸干2次所得提取溶液，用1 mL甲醇溶解.

丹參陰性對照溶液：取處方中缺少丹參的陰性杞黃醒腦顆粒，同上述方法制備對照溶液.

丹參對照藥材：取丹參對照藥材約1 g，加入20 mL乙醇溶解，進(jìn)行15 min超聲處理，冷卻后，離心取上清液.

吸取上述溶液各6 μL，點樣（G硅膠板），使用三氯甲烷-甲苯-乙酸乙酯-甲醇-甲酸溶液（體積比為6∶4∶8∶1∶4）展開至薄層板約4 cm的位置，取出，揮干，再用60～90 ℃石油醚-乙酸乙酯（體積比為4∶1）展開至薄層板約8 cm的位置，取出，揮干，將薄層板置于365 nm和日光下檢視，杞黃醒腦顆粒供試品與丹參對照藥材在薄層板色譜標(biāo)記位置有分離度較好、顏色相同的斑點，丹參陰性對照溶液沒有此斑點（圖3）.

2.1.4仙茅

杞黃醒腦顆粒供試品溶液：取杞黃醒腦顆粒粉末10 g，加入30 mL乙醇溶解后，進(jìn)行15 min超聲處理，然后過濾得到濾液，將所得濾液蒸干，再加30 mL蒸餾水溶解，用水飽和正丁醇（約20 mL）萃取2次，蒸干2次所得提取溶液，用1 mL甲醇溶解.

仙茅陰性對照溶液：取處方中缺少仙茅的陰性杞黃醒腦顆粒，同上述方法制備對照溶液.

仙茅對照藥材溶液：取仙茅對照藥材約2 g，加入20 mL乙醇，進(jìn)行15 min加熱回流處理后，蒸干濾液，得到濾液殘渣，用1 mL乙醇溶解.

吸取上述杞黃醒腦顆粒供試品和仙茅陰性對照溶液各12 μL，仙茅對照藥材溶液8 μL，點樣（G硅膠板），展開劑為乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水（體積比為10∶1∶1∶1），揮干，噴顯色劑（體積分?jǐn)?shù)2%香草醛，體積a.365 nm下檢視；b.日光下檢視

1.丹參陰性對照溶液；2.丹參對照藥材溶液；3、4.杞黃醒腦顆粒供試品溶液

分?jǐn)?shù)10%硫酸乙醇），加熱至105 ℃顯色，日光下檢視.杞黃醒腦顆粒供試品與仙茅對照藥材在TLC圖中標(biāo)記位置有分離度較好、顏色相同的粉色斑點，仙茅陰性對照溶液沒有此斑點（圖4）.

2.1.5當(dāng)歸

杞黃醒腦顆粒供試品溶液：取杞黃醒腦顆粒粉末5 g，加入20 mL熱水后，進(jìn)行20 min超聲處理，冷卻后離心，加入20 mL乙酸乙酯對上清液萃取2次，蒸干2次提取液，用1 mL甲醇溶解.

當(dāng)歸陰性對照溶液：取處方中缺少當(dāng)歸的陰性杞黃醒腦顆粒，同上述方法制備對照溶液.

當(dāng)歸對照藥材：取當(dāng)歸對照藥材約0.5 g，用20 mL乙酸乙酯溶解，進(jìn)行20 min超聲處理，蒸干濾液，用1 mL乙醇溶解對照溶液.

分別吸取杞黃醒腦顆粒供試品和當(dāng)歸陰性對照溶液各8 μL，當(dāng)歸對照藥材6 μL，點樣（G硅膠板），以正己烷-乙酸乙酯（體積比為4∶1）展開，取出揮干，365 nm紫外燈下檢視，結(jié)果杞黃醒腦顆粒供試品與當(dāng)歸對照藥材在TLC圖中標(biāo)記位置有分離度較好、顏色相同的熒光斑點，當(dāng)歸陰性對照溶液沒有此斑點（圖5）.1.仙茅陰性對照溶液;2.仙茅對照藥材溶液;

3、4.杞黃醒腦顆粒供試品溶液

1.當(dāng)歸陰性對照溶液;2.當(dāng)歸對照藥材溶液;

3、4.杞黃醒腦顆粒供試品溶液

2.1.6何首烏

杞黃醒腦顆粒供試品溶液：取杞黃醒腦顆粒粉末2 g，加入50 mL乙醇，回流處理1 h后過濾，濾液濃縮至3 mL.

何首烏對照藥材溶液：取何首烏對照藥材約0.25 g，按上法制備得何首烏對照藥材溶液.

何首烏陰性對照溶液：取處方中缺少何首烏的陰性杞黃醒腦顆粒，按上法制備得何首烏陰性對照溶液.

分別吸取杞黃醒腦顆粒供試品溶液和何首烏陰性對照溶液各6 μL，何首烏對照藥材溶液4 μL，點樣（G硅膠板），首先用三氯甲烷-甲醇（體積比為7∶3）展開至薄層板約3.5 cm的位置，取出揮干，再用三氯甲烷-甲醇（體積比為20∶1）展開至薄層板約7 cm的位置，取出揮干，日光下檢視，杞黃醒腦顆粒供試品與何首烏對照藥材在TLC圖中標(biāo)記位置有分離度較好、顏色相同的熒光斑點，何首烏陰性對照溶液沒有此斑點（圖6）.

2.1.7熟地黃和肉蓯蓉

杞黃醒腦顆粒供試品溶液：取杞黃醒腦顆粒粉末5 g，加入20 mL熱水后，進(jìn)行20 min超聲處理，放涼后離心，上清液用水飽和正丁醇（20 mL）進(jìn)行2次萃取，合并水飽和正丁醇溶液，提取液用氨水（15 mL）洗滌2次，蒸干2次洗液，用1 mL甲醇溶解.

熟地黃和肉蓯蓉雙陰性溶液：取自制的缺熟地黃和肉蓯蓉的雙陰性杞黃醒腦顆粒樣品，同上法制備.

毛蕊花糖苷對照品：取毛蕊花糖苷對照品，制成約1 mg/mL（溶劑為甲醇）的毛蕊花糖苷對照品溶液.

分別吸取杞黃醒腦顆粒供試品溶液和熟地黃和肉蓯蓉雙陰性對照溶液各8 μL，毛蕊花糖苷對照品溶液4 μL，點樣（Gf板），用醋酸乙酯-甲醇-甲酸（體積比為16∶0.5∶2）展開，取出后揮干，波長254 nm紫外燈下檢視，結(jié)果顯示杞黃醒腦顆粒供試品與毛蕊花糖苷對照品薄層板色譜在圖中標(biāo)記位置有分離度較好、顏色相同的熒光斑點，熟地黃和肉蓯蓉雙陰性對照溶液沒有此斑點（圖7）.1.何首烏陰性對照溶液;2.何首烏對照藥材溶液;

3、4.杞黃醒腦顆粒供試品溶液

1.熟地黃和肉蓯蓉雙陰性對照溶液;2.毛蕊花糖苷對

照品溶液;3.杞黃醒腦顆粒供試品溶液

2.2二苯乙烯苷含量測定

2.2.1色譜條件

色譜柱為Waters Bridge C18柱（4.6×250 mm， 5 μL），流動相為甲醇-水（體積比為36∶64），檢測波長320 nm，流速1.0 mL/min，柱溫30 ℃.

2.2.2溶液制備

對照品溶液制備：精密稱定2，3，5，4′-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷對照品適量，用稀乙醇溶解定容，搖勻，配制成質(zhì)量濃度為195.6 μg/mL的對照品溶液.

杞黃醒腦顆粒供試品溶液的制備：取杞黃醒腦顆粒粉末約1.5 g，用體積分?jǐn)?shù)70%乙醇（50 mL）溶解后稱重，加熱回流60 min，提取，至室溫后再稱重，體積分?jǐn)?shù)為70%乙醇補足2次減失的質(zhì)量，搖勻后靜置，上層清液過濾，取續(xù)濾液得到杞黃醒腦顆粒供試品溶液.

杞黃醒腦顆粒陰性對照溶液的制備：取杞黃醒腦處方中缺何首烏的陰性自制樣品，同上述供試品溶液制備法，制備得到杞黃醒腦顆粒陰性對照溶液.

2.2.3專屬性實驗

分別精密吸取二苯乙烯苷對照品溶液5 μL、杞黃醒腦顆粒供試品溶液10 μL、杞黃醒腦顆粒陰性對照溶液各10 μL，按“2.2.1”項建立的色譜條件進(jìn)樣檢測，實驗結(jié)果如圖8所示，結(jié)果表明所建立的方法專屬性強.1.二苯乙烯苷

2.2.4線性關(guān)系考察

分別精密量取二苯乙烯苷溶液（0.195 6 mg/mL）1、2、4、8、12、15 μL，按“2.2.1”項下色譜條件分別進(jìn)樣.結(jié)果表明二苯乙烯苷在0.195 6～2.934 0 μg呈良好的線性關(guān)系，回歸方程為y=6×106x+38 699（R2=0.999 5）.實驗結(jié)果見圖9.

2.2.5精密度實驗

精密量取二苯乙烯苷溶液適量（0.1956 mg/mL），按“2.2.1”項下的色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6次，進(jìn)樣體積為5 μL，記錄下每次進(jìn)樣的峰面積，計算其RSD值為0.31%，小于2%，表明儀器精密度圖9線性關(guān)系實驗結(jié)果

Fig.9Results of linear relationship experiments良好.

2.2.6穩(wěn)定性實驗

取樣品適量，按照“2.2.2”項下方法制備供試品溶液，依次在0、2、6、10、12、18、24 h精密吸取同一供試品溶液，按“2.2.1”項下色譜條件分別進(jìn)樣，每次進(jìn)樣體積為10 μL，測定，計算RSD值為0.48%，表明供試品溶液至少在24 h內(nèi)穩(wěn)定.

2.2.7重復(fù)性實驗

取杞黃醒腦顆粒（批號：220301）粉末6份，每份約1.5 g，照“2.2.2”方法制備供試品溶液，進(jìn)樣測定，進(jìn)樣體積為10 μL，記錄每次進(jìn)樣峰面積值，實驗結(jié)果見表1，計算RSD為0.94%，表明該方法重復(fù)性良好.表1重復(fù)性實驗結(jié)果

Tab.1Results of the repeatability experiments序號m（杞黃醒腦）/gw（二苯乙烯苷）/（mg·g-1）w（平均值）/（mg·g-1）RSD/%11.500 41.754 321.501 21.797 631.500 91.763 341.501 41.779 151.499 91.787 361.501 71.762 41.774 00.94

2.2.8耐用性實驗

取樣品適量，按“2.2.2”制備所需溶液.按“2.2.1”色譜條件檢測，進(jìn)樣體積為10 μL，對不同品牌及規(guī)格的色譜柱、流速、柱溫、波長條件進(jìn)行考察，記錄進(jìn)樣峰面積值，結(jié)果見表2.不同品牌及規(guī)格的色譜柱、流速、柱溫、波長條件，對含量測定結(jié)果無顯著性差異，表明該方法耐用性好.

2.2.9加樣回收實驗

取已知含量的樣品（批號：20220301，1.775 2 mg/g）粉末6份，每份約0.75 g，精密稱定，分別加入0.195 6 mg/mL對照品溶液7 mL，按“2.2.2”制備加樣回收供試品溶液.按“2.2.1”色譜條件進(jìn)樣檢測，進(jìn)樣體積為10 μL，計算回收率，結(jié)果見表3.二苯乙烯苷的回收率為96.38%～100.19%，RSD為1.48%，符合要求，該方法準(zhǔn)確可靠.

取5個批次的杞黃醒腦顆粒粉末，按照“2.2.2”制備樣品溶液，按“2.2.1”條件測定，記錄二苯乙烯苷對應(yīng)峰的峰面積值，計算二苯乙烯苷的含量，結(jié)果見表4.

3結(jié)果與討論

本文對茯苓、熟地黃、肉蓯蓉、遠(yuǎn)志進(jìn)行TLC鑒別時發(fā)現(xiàn)陰性對照溶液對檢測均有影響，故未納入標(biāo)準(zhǔn)，不同于單味藥材的鑒別，中藥制劑中的多味藥材會出現(xiàn)有效成分相同相互干擾的情況，如處方中的熟地黃含有毛蕊花糖苷，肉蓯蓉的有效成分也包括毛蕊花糖苷［10］，對于這種存在相互干擾的藥味，可以采用雙陰性鑒別.

處方中枸杞子按藥典方法TLC鑒別時，采用乙酸乙酯-三氯甲烷-甲酸（體積比3∶2∶1）為展開溶劑，Rf值較大，樣品分離度欠佳，后將展開系統(tǒng)換成二氯甲烷-乙酸乙酯-甲酸（體積比6∶4∶0.3），結(jié)果Rf值適中，斑點清晰，分離度好，陰性無干擾.淫羊藿TLC鑒別時，供試品制備采用乙醇溫浸處理，供試品斑點疊加，分離效果及點的成形性均較差，先后嘗試乙醇超聲后正丁醇萃取、乙醇超聲后乙酸乙酯萃取、水溶解離心后正丁醇萃取、水溶解離心后乙酸乙酯萃取，最終發(fā)現(xiàn)水溶解離心后乙酸乙酯萃取法斑點較少且清晰，陰性無干擾.薄層板選擇時先采用藥典規(guī)定的硅膠H板，結(jié)果顯示，噴AlCl3 105 ℃顯色過程中硅膠H板的耐熱性差，易焦化，優(yōu)化后采用硅膠G薄層板，同一展開系統(tǒng)下展開，AlCl3顯色后，斑點清晰，分離度好，陰性無干擾.丹參TLC鑒別時，采用乙醇超聲制備供試品時，雜質(zhì)點多，分離效果不佳.改用甲醇超聲蒸干后用水溶解，并用乙酸乙酯萃取，結(jié)果斑點清晰，陰性無干擾.仙茅TLC鑒別時，首先按藥典方法采用二氯甲烷-丙酮-甲酸為展開系統(tǒng)，展開度及分離度均欠佳，后將展開系統(tǒng)換成乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水，結(jié)果斑點清晰，分離度好，陰性無干擾.當(dāng)歸TLC鑒別時，藥典方法采用乙醚進(jìn)行提取制備供試品，但是考慮到乙醚易燃易爆，毒性較強，且價格貴，故用毒性相對較弱且價格比較便宜的乙酸乙酯代替，分別采用水溶解離心后乙酸乙酯萃取乙醇溶解、采用水溶解離心后正丁醇萃取乙醇溶解、采用水溶解離心后乙酸乙酯萃取甲醇溶解、采用水溶解離心后正丁醇萃取甲醇溶解制備供試品溶液，結(jié)果顯示采用水溶解離心后乙酸乙酯萃取甲醇溶解斑點較少且斑點清晰，分離度好，陰性無干擾.

何首烏為處方中的臣藥，二苯乙烯苷是從何首烏中提取分離得到的多酚結(jié)構(gòu)的水溶性成分，是何首烏的主要有效成分.有研究表明，何首烏提取物二苯乙烯苷可以通過促進(jìn)自由基代謝、改善突觸結(jié)構(gòu)、保護(hù)神經(jīng)元、降低Aβ毒性、減少細(xì)胞凋亡等作用起到保護(hù)神經(jīng)、減緩癡呆的發(fā)生，是何首烏發(fā)揮作用的主要成分之一［11-16］，故選擇何首烏中二苯乙烯苷含量為指標(biāo)進(jìn)行測定.

分別在相同的色譜條件下對Waters Symmetry（4.6×250 mm， 5 μm）、Inertsil ODS-SP（4.6×250 mm， 5 μm）、Waters Bridge（4.6×250 mm， 5 μm）3根不同型號的C18色譜柱進(jìn)行了考察，結(jié)果顯示，3種型號的色譜柱分離度、峰形均較佳.Waters Bridge（4.6×250 mm， 5 μm）的出峰時間最短，分離度和峰形最好，因此選擇Waters Bridge（4.6×250 mm， 5 μm）色譜柱.用紫外分光光度儀進(jìn)行全波長掃描，結(jié)果表明，320 nm時波長有最大吸收，故選擇320 nm為提取波長；分別以乙腈-水（體積比為25∶75）、乙腈-水（體積比為22∶78）、乙腈-水（體積比為28∶72）、乙腈-0.1%磷酸水（體積比為22∶78）、甲醇-水（體積比為25∶75）、甲醇-水（體積比為30∶70）、甲醇-水（體積比為35∶65）、甲醇-水（體積比為36∶64）、甲醇-水（體積比為38∶62）作為流動相，結(jié)果顯示，以乙腈-水（體積比為22∶78）、乙腈-水（體積比為25∶75）、乙腈-0.1%磷酸水（體積比為22∶78）、甲醇-水（體積比為35∶65）、甲醇-水（體積比為36∶64）均能將色譜峰分離，從實驗成本和出峰時間綜合考慮最終決定以甲醇-水（體積比為36∶64）為流動相.

供試品溶液提取方法考察：分別用稀乙醇超聲、加熱回流、稀乙醇離心的方法提取，結(jié)果顯示用稀乙醇加熱回流提取最佳，故選擇提取方式為回流提?。还┰嚻啡芤禾崛r間考察，分別加熱回流30、45、60、90 min，結(jié)果顯示加熱回流60 min效果最佳；供試品溶液提取溶劑考察：分別選擇用水、30%乙醇、30%甲醇、50%甲醇、50%乙醇、70%甲醇、70%乙醇（均為體積分?jǐn)?shù)）作為提取溶劑，結(jié)果顯示選擇體積分?jǐn)?shù)70%乙醇作為提取劑提取率最高；供試品溶液提取溶劑用量考察：分別選擇體積分?jǐn)?shù)70%乙醇用量為20、30、40、50 mL進(jìn)行提取，結(jié)果顯示提取溶劑用量為50 mL時提取率最高.

本研究建立了杞黃醒腦顆粒枸杞子、何首烏、淫羊藿、丹參、仙茅、當(dāng)歸的薄層鑒別方法及臣藥何首烏中主要有效成分二苯乙烯苷的含量測定方法，該法操作簡便，準(zhǔn)確，可用于杞黃醒腦顆粒質(zhì)量控制.

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（責(zé)任編輯：梁俊紅）