摘要：采用PEG-6000模擬干旱脅迫，固體培養(yǎng)和液體培養(yǎng)的方法，研究0、15%、25%、35% PEG-6000對從油松根系分離出的2種外生菌根真菌［血紅密孔菌（Pycnoporus sanguineus）、彩色豆馬勃（Pisolithus tinctorius）］和2種深色有隔內(nèi)生真菌［短梗蠕孢菌（Pleotrichocladium opacum）、須殼孢屬（Pyrenochaeta sp.）］生長及生理特性的影響，以期探究油松根系真菌的抗旱機制，了解4種真菌對干旱脅迫的耐受性，為干旱地區(qū)挖掘具有應(yīng)用價值的潛力菌株。結(jié)果表明，4種真菌在PEG脅迫下均能夠生長，與對照相比，Ps生物量在15%、25% PEG-6000下顯著提高，Pt生物量僅在35% PEG-6000下顯著提高，其余菌株的生物量在PEG脅迫下均顯著提高，且Po、Pss生物量顯著高于Ps、Pt。在PEG脅迫下4種真菌均在一定程度上降低了培養(yǎng)液pH值，提高了抗氧化酶活性，多數(shù)能夠提高脯氨酸和可溶性蛋白的含量來應(yīng)對干旱脅迫環(huán)境。Po、Pss的抗氧化酶活性在35% PEG-6000下仍顯著高于對照，SOD活性分別提高了48.7%、82.0%，CAT活性分別提高了40.3%、122.4%。Pss在35% PEG-6000下脯氨酸含量和可溶性蛋白含量相比對照仍顯著提高，分別提高了131.1%、267.6%。此外4種真菌在受到PEG脅迫時，體內(nèi)MDA的積累有所差異。Ps的MDA含量僅在15% PEG-6000下相比對照顯著降低，降低了38.8%。Pt、Po的MDA含量在PEG脅迫下（除15% PEG-6000）相比對照均顯著增加，而Pss的MDA含量在PEG脅迫下均顯著低于對照。綜上，在PEG脅迫下，4種真菌對干旱脅迫均具有一定的耐受性，均能夠通過在一定程度上降低培養(yǎng)液pH值，提高抗氧化酶活性，提高脯氨酸和可溶性蛋白的含量來適應(yīng)干旱脅迫環(huán)境。4種真菌對干旱脅迫的耐受能力大小為Pssgt;Pogt;Psgt;Pt。

關(guān)鍵詞：PEG-6000；抗旱性；外生菌根真菌；深色有隔內(nèi)生真菌；抗氧化酶活性；耐受性

中圖分類號：S182 "文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

文章編號：1002-1302（2024）14-0236-08

收稿日期：2023-09-02

基金項目：國家自然科學(xué)基金（編號：32001112）；河北省自然科學(xué)基金（編號：C2023204238、C2020204169）。

作者簡介：鄭妍妍（1998—），女，河北元氏人，碩士，研究方向為園林植物資源評價與種質(zhì)創(chuàng)新。E-mail：787472707@qq.com。

通信作者：周 勇，博士，講師，主要從事園林植物生理生態(tài)學(xué)研究。E-mail：zhouyong275@sina.com。

干旱地區(qū)的水資源匱乏，植被覆蓋率低，土體缺乏有效保護(hù)，土壤干燥松散、固持力差，水土流失嚴(yán)重［1］。干旱脅迫對植物的生長發(fā)育也有一定的影響和危害，嚴(yán)重時甚至?xí)?dǎo)致植物死亡，因此干旱脅迫已經(jīng)成為影響植物生長及生態(tài)環(huán)境效益的重要因素。菌根技術(shù)是應(yīng)用于育苗造林、生態(tài)修復(fù)以及提高植物抗逆性的一項生物技術(shù)，優(yōu)良菌劑的研發(fā)對于菌根技術(shù)的應(yīng)用具有重要意義，因此挖掘具有抗旱潛力的真菌菌株，對干旱地區(qū)菌根菌劑的選擇和在生態(tài)修復(fù)中的實際應(yīng)用具有理論價值和指導(dǎo)意義。

共生真菌是能夠與植物形成互惠共生關(guān)系的真菌，外生菌根真菌和深色有隔內(nèi)生真菌是目前研究較為關(guān)注的2類真菌，外生菌根真菌是菌絲體能夠侵染宿主植物營養(yǎng)根形成外生菌根的一類菌根真菌。外生菌根真菌資源豐富，全球約有6 000種外生菌根真菌，已有研究表明松科植物是最古老的外生菌根植物［2］。深色有隔內(nèi)生真菌是一類小型內(nèi)生真菌，定殖于植物的根表皮細(xì)胞、根皮層、維管組織細(xì)胞內(nèi)或植物根細(xì)胞間隙，具有明顯帶有橫隔的深色的菌絲和微菌核結(jié)構(gòu)［3-4］，分布廣泛，在干旱、重金屬污染、極地等極端環(huán)境中均有分布，近年受到了研究者的廣泛關(guān)注［5］。已有大量研究表明，接種外生菌根真菌或深色有隔內(nèi)生真菌，能夠促進(jìn)植物的生長和抗逆性［6-8］，在生態(tài)環(huán)境修復(fù)方面也具有一定的應(yīng)用價值［9-11］。

目前關(guān)于外生菌根真菌和深色有隔內(nèi)生真菌的研究主要集中于資源調(diào)查、分離鑒定以及對宿主植物影響的研究。有關(guān)真菌自身抗逆機制的相關(guān)研究相對較少，已有重金屬脅迫、鹽脅迫、低溫脅迫以及干旱脅迫對真菌的影響研究［12-17］，但真菌自身的抗逆性機制仍尚不明確。并且具有耐旱性的真菌菌株報道較少，因此本試驗利用PEG-6000模擬干旱脅迫，采用固體和液體2種方式進(jìn)行真菌培養(yǎng)，測定4種真菌的菌落直徑、生物量、抗氧化酶活性、滲透調(diào)節(jié)物質(zhì)含量等指標(biāo)，分析干旱脅迫對真菌生長及生理特性的影響，初步探究真菌抗旱的生理機制并挖掘具有抗旱能力的潛力菌株，以期為研發(fā)可應(yīng)用于干旱地區(qū)的優(yōu)良菌劑提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

1.1.1 供試菌株

試驗于2022年4—6月于河北農(nóng)業(yè)大學(xué)園林與旅游學(xué)院實驗室進(jìn)行，供試菌株（圖1）為2種外生菌根真菌：血紅密孔菌（Pycnoporus sanguineus，Ps）、彩色豆馬勃（Pisolithus tinctorius，Pt）；2種深色有隔內(nèi)生真菌：短梗蠕孢菌（Pleotrichocladium opacum，Po）、須殼孢屬（Pyrenochaeta sp.，Pss），上述菌株均分離自油松根系，經(jīng)純化、鑒定后保存于河北農(nóng)業(yè)大學(xué)園林與旅游學(xué)院實驗室。菌株使用馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)，儲存于27 ℃霉菌培養(yǎng)箱備用。

1.1.2 供試培養(yǎng)基

使用新鮮馬鈴薯、葡萄糖、植物凝膠、PEG-6000制備試驗所需的固體培養(yǎng)基和液體培養(yǎng)基，培養(yǎng)基含PEG-6000的濃度梯度為0、15%、25%、35%，共16個處理，每個處理3個重復(fù)。

1.2 試驗方法

1.2.1 含PEG-6000培養(yǎng)基的制備

將200 g削皮馬鈴薯切成小塊，沸水煮沸30 min后用4層紗布過濾，向無殘渣的濾液中加入20 g葡萄糖，充分?jǐn)嚢枞芙夂蠖ㄈ葜? L，自然pH值。配制試驗所需的液體培養(yǎng)基時，在馬鈴薯提取液（葡萄糖20 g/L）中分別加入 0、150、250、350 g/L的PEG-6000固體，加熱溶解完全后分別分裝于250 mL錐形瓶中，每瓶100 mL，用無菌膜封口，在121 ℃下高壓蒸汽滅菌20 min后備用，所得培養(yǎng)基即為分別含0、15%、25%、35% PEG-6000的液體培養(yǎng)基。配制固體培養(yǎng)基時在液體培養(yǎng)基配制的基礎(chǔ)上加入少量植物凝膠促凝，即可得到對應(yīng)濃度的固體培養(yǎng)基。

1.2.2 真菌接種與培養(yǎng)

選取在馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基上生長良好的真菌菌落，在超凈工作臺中沿菌落邊緣切取直徑9 mm的菌餅，分別接種到 20 mL 的固體培養(yǎng)基和100 mL的液體培養(yǎng)基中，固體培養(yǎng)于27 ℃霉菌培養(yǎng)箱中進(jìn)行，暗培養(yǎng)14 d。液體培養(yǎng)于27 ℃恒溫?fù)u床上進(jìn)行，以180 r/min的速度振蕩培養(yǎng)14 d。

1.2.3 真菌菌落直徑測定

采用十字交叉法測定菌落直徑，每隔1 d測量1次，每個處理重復(fù)3次，連續(xù)觀察14 d，至培養(yǎng)結(jié)束時共測量8次。

1.2.4 真菌菌絲生物量測定

液體培養(yǎng)結(jié)束后過濾收集菌絲，一部分用于測定抗氧化酶活性及丙二醛、脯氨酸以及可溶性蛋白含量。另一部分菌絲體稱量鮮重后于80 ℃烘干至恒重，以此確定菌絲體的含水量。2個部分菌絲體的干重之和即為真菌的生物量［18］。

1.2.5 真菌濾液pH值測定

液體培養(yǎng)結(jié)束后過濾收集真菌濾液，并使用pH計測定各處理濾液的pH值，每個處理重復(fù)3次。

1.2.6 真菌菌絲抗氧化酶活性測定

超氧化物歧化酶（SOD）活性采用氮藍(lán)四唑光還原法測定，過氧化氫酶（CAT）活性采用高錳酸鉀滴定法測定［19］。

1.2.7 真菌菌絲丙二醛及滲透調(diào)節(jié)物質(zhì)含量測定

丙二醛（MDA）含量采用硫代巴比妥酸法測定，脯氨酸含量采用茚三酮顯色法測定，可溶性蛋白含量采用考馬斯亮藍(lán)G-250法測定［20］。

1.3 數(shù)據(jù)分析

數(shù)據(jù)利用SPSS 24.0進(jìn)行統(tǒng)計分析，用單因素方差分析，鄧肯氏新復(fù)極差法對試驗數(shù)據(jù)進(jìn)行顯著性檢驗（α=0.05）。采用Excel 2016進(jìn)行數(shù)據(jù)整理和圖表制作。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同濃度PEG-6000對根系真菌生長的影響

由圖2可知，4種真菌的生長趨勢不同。Ps在 0、15% PEG-6000下菌落生長曲線呈冪函數(shù)趨勢，隨著PEG脅迫的增加，生長曲線變?yōu)榫€性趨勢。Pt在0、15%、25% PEG-6000下生長曲線呈指數(shù)型，而在35% PEG-6000下生長曲線呈線性趨勢。Po在0 PEG-6000下菌落直徑呈線性趨勢增長，在其余處理下生長曲線均為指數(shù)型，而Pss在所有處理下生長曲線均為指數(shù)型。

如圖3所示，4種真菌的14 d菌落直徑隨 PEG-6000 濃度的升高呈現(xiàn)不同的變化趨勢。Ps、Pt的菌落直徑隨PEG-6000濃度的升高呈先升高后降低的趨勢，而Po、Pss的菌落直徑呈逐漸升高的趨勢。Ps的菌落直徑在35% PEG-6000下相比對照顯著降低12.6%。Pt在15%、25% PEG-6000下菌落直徑相比對照顯著增加20.3%、13.9%，在35% PEG-6000下菌落生長受到抑制，相比對照顯著降低23.4%。Po菌落直徑在25%、35% PEG-6000下均顯著高于對照，分別增加40.6%、54.7%。Pss菌落直徑在各處理下相比對照分別顯著提高25.4%、39.0%、44.1%（Plt;0.05）。

固體培養(yǎng)14 d后4種真菌在不同處理下的菌落形態(tài)如圖4所示。Ps在不加PEG-6000下菌落大而厚實，菌落全緣，顏色呈中間深紅邊緣淺紅。隨著PEG-6000濃度的升高， 菌絲逐漸稀少， 質(zhì)地

呈顆粒狀。菌落顏色變淺且顏色不均勻，邊緣逐漸呈放射狀。Pt在0濃度PEG-6000下菌絲細(xì)長，質(zhì)地疏松，菌落顏色呈棕黃色。隨著PEG-6000濃度的升高，菌落質(zhì)地緊密呈絨毛狀，菌落顏色逐漸變淺。Po在0濃度PEG-6000下菌落疏松，菌落顏色呈淺灰色，邊緣全緣。隨著PEG-6000濃度升高菌落致密，菌落顏色逐漸加深。Pss在0濃度PEG-6000下菌落質(zhì)地致密，菌落顏色為淺灰色。隨著 PEG-6000 濃度的升高，菌絲顏色逐漸變淺，菌落邊緣逐漸呈波浪形鋸齒狀。

2.2 不同濃度PEG-6000對根系真菌生物量的影響

由圖5可知，在PEG脅迫下4種根系真菌均能夠生長。隨著脅迫濃度的增加，4種真菌的生物量呈現(xiàn)出不同的變化趨勢。其中Ps、Pss生物量隨脅迫濃度增加呈先升高后降低的趨勢，均在15% PEG-6000 下達(dá)到最大值，相比對照分別顯著提高129.8%、211.0%，且Ps在25% PEG-6000下生物量提高125.2%，Pss在25%、35% PEG-6000 下生物量分別提高159.6%、137.8%。Pt生物量隨脅迫濃度的增加呈先降低后升高的趨勢，在35% PEG-6000下相比對照仍顯著提高27.0%。Po生物量隨脅迫程度增加呈逐漸升高的趨勢，相比對照分別顯著提高31.1%、81.0%、104.5%（Plt;0.05）。整體上，相較對照Ps在PEG脅迫下對于生物量的提高優(yōu)于Pt；Pss對于生物量的提高優(yōu)于Po。

2.3 不同濃度PEG-6000對根系真菌濾液pH值的影響

如圖6所示，在PEG脅迫下真菌濾液的pH值均有所降低。Ps、Pt濾液pH值呈先降低后升高的趨勢，均在25% PEG-6000下達(dá)到最低，相比對照分別顯著降低1.92、1.44個單位（Plt;0.05）。隨著PEG-6000濃度的升高，Po、Pss濾液pH值相比對照均顯著降低，且在35% PEG-6000下達(dá)到最低，分別降低了0.39、0.35個單位。4種真菌在受到PEG脅迫時濾液pH值均有所降低，說明真菌在受到PEG脅迫時能通過產(chǎn)生H+來維持其正常生長，最低pH值不同可能與其最適生長pH值有關(guān)。

2.4 不同濃度PEG-6000對根系真菌抗氧化酶活性的影響

由圖7、圖8可知，隨著PEG脅迫的增加，Ps的SOD活性和CAT活性均有所提高，且在15%、25% PEG-6000下與對照存在顯著差異（Plt;0.05），相比對照分別提高37.1%、60.5%和43.4%、64.6%。

隨著PEG脅迫的增加，Pt的SOD活性均有所提高，在15%、25% PEG-6000下差異達(dá)到顯著水平（Plt;0.05），相比對照分別提高13.0%、48.9%，CAT活性在25%、35% PEG-6000下相比對照分別顯著提高35.8%、56.8%。隨著PEG脅迫的增加，Po和Pss的SOD和CAT活性相比對照均顯著提高（Plt;0.05），Po的SOD活性分別提高59.8%、77.6%、48.7%，CAT活性分別提高60.2%、83.7%、40.3%。Pss的SOD活性分別提高74.2%、80.2%、82.0%，CAT活性分別提高155.9%、125.2%、122.4%。

4種根系真菌在低濃度PEG脅迫下能夠促進(jìn)其體內(nèi)抗氧化酶活性的提高，而在最高濃度的 PEG-6000 處理下除Pss菌株的SOD活性和Pt的CAT活性仍有所提高外，其他菌株體內(nèi)抗氧化酶活性的提高程度有所降低，但在較高濃度PEG-6000下Po和Pss菌株抗氧化酶活性仍顯著高于對照，總得來說，在PEG脅迫下真菌提高抗氧化酶活性的效果為Po、Pss優(yōu)于Ps、Pt，Pss優(yōu)于Po，Ps優(yōu)于Pt。

2.5 不同濃度PEG-6000對根系真菌丙二醛含量的影響

如圖9所示，隨著PEG-6000濃度的升高，真菌MDA含量呈不同的變化趨勢。Ps、Pss在受到PEG脅迫時MDA含量呈現(xiàn)先降低后升高的趨勢，Pt、Po的MDA含量隨脅迫程度的增加呈逐漸上升的趨勢。Ps在15% PEG-6000下MDA含量與對照存在顯著差異，相比對照顯著降低了38.8%。Pt在25%、35% PEG-6000下MDA含量與對照存在顯著差異，相比對照分別增加了144.9%、174.2%。Po在PEG-6000處理下MDA含量均顯著高于對照，分別增加了26.9%、90.3%、146.6%。Pss在PEG-6000處理下MDA含量均顯著低于對照，分別降低95.7%、75.7%、23.9%（Plt;0.05）。Ps、Pss在受到PEG脅迫時MDA含量存在顯著降低，說明其通過一定的體內(nèi)調(diào)節(jié)減少了體內(nèi)MDA含量的積累。而Pt、Po體內(nèi)MDA含量積累較多說明其體內(nèi)調(diào)節(jié)能力相比其他2種菌株較弱。

2.6 不同濃度PEG-6000對根系真菌滲透調(diào)節(jié)物質(zhì)的影響

由圖10可知，隨著PEG-6000濃度的升高，Ps、Pt、Po的脯氨酸含量均呈先升高后降低的趨勢，且在15% PEG-6000下脯氨酸含量達(dá)到最大值。Pss的脯氨酸含量隨PEG-6000濃度的升高逐漸升高，且在35% PEG-6000下達(dá)到最大值。Ps的脯氨酸含量僅在15% PEG-6000下相比對照顯著增加，增加了46.1%，Pt在PEG-6000處理下的脯氨酸含量與對照相比均存在顯著差異，相比對照分別增加121.9%、45.6%、19.7%。Po在15% PEG-6000 下脯氨酸含量相比對照顯著增加，增加了24.8%。Pss在PEG-6000處理下的脯氨酸含量均顯著高于對照，相比對照分別增加31.8%、41.6%、131.1%（Plt;0.05）。

如圖11所示，Ps的可溶性蛋白含量隨PEG濃度的升高呈先上升后下降的趨勢，且在PEG-6000處理下可溶性蛋白含量均顯著高于對照，相比對照分別提高99.9%、47.4%、32.8%（Plt;0.05）。Pt的可溶性蛋白含量隨PEG-6000濃度增加呈逐漸下降的趨勢，且在35% PEG-6000下可溶性蛋白含量最低，相比對照顯著降低52.1%。Po、Pss菌株的可溶性蛋白含量隨PEG-6000濃度的增加呈逐漸上升的趨勢，在35% PEG-6000下達(dá)到最大值。Po的可溶性蛋白含量在PEG-6000處理下均顯著高于對照組，相比對照分別增加54.6%、75.4%、170.8%。Pss的可溶性蛋白含量在PEG-6000處理下均顯著高于對照，相比對照分別顯著增加163.0%、259.9%、267.6%（Plt;0.05）。

在受到PEG脅迫時，4種真菌中多數(shù)能夠通過提高自身脯氨酸和可溶性蛋白的產(chǎn)生來應(yīng)對脅迫，表現(xiàn)為低濃度脅迫下促進(jìn)產(chǎn)生，高濃度脅迫下產(chǎn)生含量有所降低，可能與脅迫程度過高有關(guān)。相較對照而言，在PEG脅迫下Pss對于脯氨酸和可溶性蛋白含量的提高優(yōu)于Po，其在高濃度下仍能產(chǎn)生較多的脯氨酸和可溶性蛋白。相較對照，Ps對于可溶性蛋白含量的提高要優(yōu)于Pt。2種深色有隔內(nèi)生真菌（Po、Pss）對于可溶性蛋白含量的提高優(yōu)于2種外生菌根真菌（Ps、Pt）。

3 討論

干旱脅迫是影響生物生存的一種重要的非生物脅迫，干旱脅迫使生物可利用水分缺乏，從而導(dǎo)致其生長受到抑制。目前實驗室條件下，PEG-6000 是被廣泛應(yīng)用于模擬干旱脅迫的化合物［21-23］。本試驗利用PEG-6000模擬干旱脅迫，試驗表明在脅迫處理下4種真菌的生長情況存在差異。已有研究表明較低濃度的PEG脅迫能夠促進(jìn)菌絲生長，而PEG濃度較高時，菌絲的生長會受到抑制［24］。在本試驗中Ps的生長曲線在15% PEG-6000 下呈冪函數(shù)趨勢，而在高濃度PEG-6000下生長曲線呈線性趨勢，且菌落直徑在高濃度下有所降低，Pt的生長曲線在35% PEG-6000下為線性，菌落直徑顯著降低，而其余處理下生長曲線均為指數(shù)型，菌落直徑顯著增加。這說明Ps、Pt在低濃度的PEG脅迫下菌絲生長受到了促進(jìn)，而高濃度PEG處理下生長受到抑制，這與前人的研究結(jié)果［24］一致。而Po、Pss在PEG-6000處理下生長曲線均為指數(shù)型，且菌落直徑呈上升趨勢，這說明Po、Pss在PEG脅迫處理下的生長均受到促進(jìn)作用，這可能與真菌的種類不同有關(guān)。

在脅迫環(huán)境下，真菌的生長情況及生物量是反映其抗性的重要指標(biāo)［25］。4種真菌在PEG脅迫下均能夠正常生長，說明其對PEG脅迫具有一定的耐受性。除Pt外Ps、Po、Pss菌株在PEG脅迫下的生物量均高于對照組，且4種真菌的濾液pH值在PEG脅迫下相比對照均有所降低。這說明真菌在受到脅迫時能夠分泌酸性物質(zhì)來調(diào)節(jié)其生長環(huán)境的酸堿度，從而促進(jìn)其生長。多數(shù)情況下ECMF喜酸性環(huán)境，最適pH值在4.0～6.0［26］，但不同菌種對pH值的偏好也存在較大差異［27］，也存在真菌偏好微堿性生長環(huán)境的情況［28］。在本試驗中Ps、Pt濾液的pH值大部分呈酸性而Po、Pss在各個PEG-6000濃度下濾液的pH值呈弱堿性，這可能與真菌的最適pH值有關(guān)。

在正常的環(huán)境條件下，細(xì)胞內(nèi)活性氧（ROS）的產(chǎn)生和保護(hù)酶發(fā)揮作用進(jìn)行活性氧的清除處于平衡狀態(tài)，然而當(dāng)生物體受到環(huán)境脅迫時，細(xì)胞內(nèi)的ROS產(chǎn)生增多［29］，由于產(chǎn)生過量的ROS抗氧化系統(tǒng)并不能及時將其清除，進(jìn)而導(dǎo)致ROS在生物體內(nèi)發(fā)生大量積累，最終導(dǎo)致細(xì)胞受到氧化損傷。SOD、CAT是抗氧化系統(tǒng)中用于清除ROS和H2O2的重要保護(hù)酶，在細(xì)胞內(nèi)相互協(xié)作發(fā)揮維持ROS產(chǎn)生與清除平衡狀態(tài)的作用，從而對生物體抗逆性的提高發(fā)揮一定作用［30］。在本試驗中，4種真菌在受到PEG脅迫時其抗氧化酶活性存在一定程度的升高，這與劉燕霞的研究結(jié)果具有相似性，其研究中所用真菌的SOD活性在干旱脅迫下均高于對照［31］。這說明真菌細(xì)胞可能通過合成抗氧化酶來清除干旱環(huán)境下積累的ROS，以此來緩解自身受到的氧化傷害。試驗中Po、Pss對抗氧化酶活性的提高程度要高于Ps、Pt，說明Po、Pss應(yīng)對PEG脅迫的能力要強于Ps、Pt。

滲透調(diào)節(jié)是生物抵御脅迫環(huán)境的一種重要的生理調(diào)節(jié)，通過滲透調(diào)節(jié)可以提高其在脅迫環(huán)境下的適應(yīng)性［32］。脯氨酸是生物體內(nèi)重要的滲透保護(hù)物質(zhì)，在脅迫環(huán)境中可以大量積累從而有效地調(diào)節(jié)生物的代謝，降低脅迫環(huán)境對其造成的傷害。其含量可以反映逆境對生物的危害程度和生物對脅迫的抵抗力［33］?？扇苄缘鞍资菨B透調(diào)節(jié)中一種重要的滲透調(diào)節(jié)物質(zhì)，它能夠促進(jìn)菌絲細(xì)胞的滲透調(diào)節(jié)從而提高菌絲細(xì)胞對脅迫的耐受性。在本試驗中，Ps、Pt、Po的脯氨酸含量均呈先上升后下降的趨勢，且在15% PEG-6000下達(dá)到最大，而Pss的脯氨酸含量呈顯著上升趨勢。除Pt外真菌的可溶性蛋白含量在PEG脅迫處理下均大于對照，這說明菌株在受到PEG脅迫時，脯氨酸和可溶性蛋白可能參與滲透調(diào)節(jié)來提高菌絲對PEG的耐受性［34］。MDA是細(xì)胞在脅迫環(huán)境下膜脂過氧化的主要產(chǎn)物，其含量可以反映細(xì)胞所受脅迫的程度［35-36］。隨PEG濃度的增加，Pt、Po的MDA含量呈顯著上升趨勢，而Ps、Pss的MDA含量隨濃度的變化呈先降低后升高的趨勢，且在15% PEG-6000下相比對照顯著降低，這可能與參與滲透調(diào)節(jié)物質(zhì)含量的增加以及抗氧化酶活性的提高有關(guān)。

4 結(jié)論

本研究表明，在PEG脅迫下4種真菌均能夠正常生長，能通過降低培養(yǎng)液pH值，提高SOD活性、CAT活性以及提高脯氨酸含量和可溶性蛋白含量來應(yīng)對脅迫環(huán)境。在PEG脅迫下Po、Pss生物量的積累優(yōu)于Ps、Pt。Po、Pss相比Ps、Pt對抗氧化酶活性的提高和提高滲透調(diào)節(jié)物質(zhì)的含量更多，綜合分析試驗結(jié)果可知，2種深色有隔內(nèi)生真菌Po和Pss在PEG脅迫下生長狀況優(yōu)于2種外生菌根真菌Ps和Pt，4種真菌的耐旱能力大小為：Pssgt;Pogt;Psgt;Pt。4種真菌具有作為耐旱菌劑的潛力以應(yīng)用于干旱地區(qū)促進(jìn)植物生長及增強植物抗旱性，對干旱地區(qū)的育苗造林和生態(tài)修復(fù)具有重大意義。

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