香加皮化學(xué)成分的研究

李金楠， 趙麗迎， 于 靜， 高 纓， 鄧雁如

(天津中醫(yī)藥大學(xué)天津市中藥化學(xué)與分析重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，天津300193)

香加皮為蘿藦科杠柳屬植物杠柳(Periploca sepium Bunge)的干燥根皮，又稱“北五加皮”。其味辛、苦，性溫，有毒。具有利水消腫、祛風(fēng)濕、強(qiáng)筋骨的功效，主要用于風(fēng)寒濕痹、腰膝酸軟、心悸氣短、下肢水腫等［1］。近年來(lái)常用于復(fù)方中治療慢性充血性心力衰竭，如復(fù)方生脈飲，強(qiáng)心飲、芪加沖劑、北五加皮合劑及心衰靈等［2-5］。香加皮在我國(guó)藥源豐富，價(jià)廉易得，在臨床治療慢性心衰方面有廣闊的前景。以往的化學(xué)成分研究表明香加皮中含有C21甾類、強(qiáng)心苷類、三萜類等化合物。藥理學(xué)研究表明香加皮具有明顯的洋地黃類強(qiáng)心苷樣作用(其有效成分之一為杠柳毒苷)，然而強(qiáng)心苷類化合物既是有效成分也是毒性成分，使用不當(dāng)，易發(fā)生不良反應(yīng)［6-8］。為安全有效的在臨床上使用香加皮，減少不良反應(yīng)的發(fā)生，有必要對(duì)香加皮的化學(xué)成分進(jìn)行系統(tǒng)詳盡的研究，明確與不良反應(yīng)發(fā)生相關(guān)的物質(zhì)基礎(chǔ)。本研究利用硅膠色譜、ODS柱色譜等方法，從香加皮的95%的醇提物中分離得到11個(gè)化合物，分別為異香草醛(Ⅰ)，4-甲氧基水楊酸(Ⅱ)，4-甲氧基水楊醛(Ⅲ)，咖啡酸乙酯(Ⅳ)，東莨菪內(nèi)酯(Ⅴ)，5，5′-二甲氧基落葉松脂醇-4′-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(tortoside B)(Ⅵ)，periplocoside L(Ⅶ)，Δ5-孕甾烯-3β，20(S)-二醇(Ⅷ)，Δ5-孕甾烯-3β，20(S)-二醇-20-O-β-D-吡喃葡萄糖-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(Ⅸ)，Δ5-孕甾烯-3β，20(S)-二醇-20-O-β-D-吡喃葡萄糖基(1→6)-β-D-吡喃葡萄糖苷(秦嶺藤苷 C)(Ⅹ)，Δ5-孕甾烯-3β，20(S)-二醇-3-O-［2-O-乙?；?β-D-吡喃洋地黃糖基(1→4)-β-D-吡喃加拿大麻糖］-20-O-β-D-吡喃葡萄糖基(1→6)-β-D-吡喃葡萄糖基(1→2)-β-D-吡喃洋地黃糖苷(Ⅺ)，其中化合物Ⅳ，Ⅵ，Ⅸ和Ⅹ為首次從該種藥材中得到。部分化合物的化學(xué)結(jié)構(gòu)式見圖1。

圖1 部分化合物的結(jié)構(gòu)

1 儀器與材料

BUCHI Melting Point B-545顯微熔點(diǎn)儀(溫度計(jì)未較正)，Bruker-AV-400型核磁共振儀(TMS為內(nèi)標(biāo))，Agilent6520Accurate-Mass Q-TOF LC-MS聯(lián)用儀。薄層層析硅膠H60，柱層析硅膠(100～200目，200～300目)均為青島海洋化工廠生產(chǎn)，ODS購(gòu)自北京綠百草科技發(fā)展有限公司。香加皮藥材于2007年9月購(gòu)自于亳州永剛飲片藥材公司，經(jīng)天津中醫(yī)藥大學(xué)中醫(yī)藥研究中心郭俊華副研究員鑒定為蘿藦科杠柳屬植物杠柳(Periploca sepium Bunge)的干燥根皮，藥材標(biāo)本存于天津中醫(yī)藥大學(xué)中藥標(biāo)本館。

2 提取分離

香加皮藥材10 kg，粉碎后用6倍量95%乙醇回流提取3次，每次2 h，合并濾液，減壓回收乙醇，得浸膏900 g，加適量水后依次用氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取，回收溶劑后，分別得氯仿部位浸膏55 g，乙酸乙酯部位浸膏35 g，正丁醇部位浸膏90 g。

取氯仿部分浸膏55 g，經(jīng)硅膠(200～300目)柱色譜，石油醚-乙酸乙酯(20 ∶1，15 ∶1，10 ∶1，8 ∶1，6 ∶1，4∶1，2 ∶1)梯度洗脫，得化合物Ⅰ(35 mg)、Ⅱ(15 mg)、Ⅲ(200 mg)、Ⅳ(30 mg)、Ⅴ(35 mg)及Ⅷ(40 mg)。正丁醇部分浸膏90 g經(jīng)硅膠(200～300目)柱層析，乙酸乙酯-無(wú)水乙醇(25 ∶1，20 ∶1，15 ∶1，10∶1，5 ∶1)梯度洗脫，得到10 個(gè)流分，流分1 經(jīng)ODS柱層析，甲醇-水(2 ∶8，3 ∶7)洗脫，得到化合物Ⅵ(32 mg)，流分 2、3及 5經(jīng) ODS層析，甲醇-水(2∶8，3 ∶7，4 ∶6)洗脫，得化合物Ⅶ(31 mg)、Ⅸ(22 mg)、Ⅹ(15 mg)、Ⅺ(210 mg)。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物(Ⅰ):淺黃色針狀結(jié)晶(氯仿-丙酮)，mp 114～115℃。ESI-MS m/z:153.0［M+H］+，分子式為 C8H8O3;1H-NMR(400 MHz，DMSO-d6)δ:4.00(3H，s，4-OCH3)7.34(1H，d，J=8.0 Hz，H-5)，7.81(1H，dd，J=8.0，2.0 Hz，H-6)，8.15(1H，d，J=2.0 Hz，H-2)，10.33(CHO)。13C-NMR(100 MHz ，DMSO-d6)δ:135.1(C-1)，114.6(C-2)，148.0(C-3)，154.0(C-4)，112.1(C-5)，125.0(C-6)，191.6(CHO)，56.5(4-OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)一致［9］，故確定其為異香草醛。

化合物(Ⅱ):無(wú)色針狀結(jié)晶(甲醇)，mp 155～157℃。ESI-MS m/z:169.0［M+H］+，分子式為C8H8O4;1H-NMR(400 MHz，CD3OD)δ:3.79(3H，s，4-OCH3)，6.42(1H，dd，J=8.8，2.4 Hz，H-5)，6.44(1H，d，J=2.4 Hz，H-3)，7.73(1H，d，J=8.8 Hz，H-6)。13C-NMR(100 MHz ，CD3OD)δ:106.9(C-1)，165.3(C-2)，101.5(C-3)，167.0(C-4)，107.8(C-5)，132.9(C-6)，172.5(COOH)，55.9(4-OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道一致［9］，故確定其為4-甲氧基水楊酸。

化合物(Ⅲ):無(wú)色針狀結(jié)晶(乙酸乙酯)，mp 114～116℃。ESI-MS m/z:153.0［M+H］+，分子式為C8H8O3;其1H-，13C-NMR數(shù)據(jù)與4-甲氧基水楊醛一致［9］，且與對(duì)照品經(jīng)硅膠薄層檢測(cè)Rf值一致，故確定其為4-甲氧基水楊醛。

化合物(Ⅳ):淡粉色片狀結(jié)晶(氯仿-丙酮)，mp 196～198℃。ESI-MS m/z:209.0［M+H］+，分子式為 C11H12O4;1H-NMR(400 MHz，DMSO-d6)δ:1.22(3H，t，J=7.0Hz，CH3-11)，4.13(2H，q，J=7.0 Hz，CH2-10)，6.24(1H，d，J=16.0 Hz，H-8)，6.74(1H，d，J=8.0 Hz，H-5)，6.98(1H，dd，J=8.0，2.0 Hz，H-6)，7.03(1H，d，J=2.0 Hz，H-2)，7.46(1H，d，J=16.0 Hz，H-7)，9.14(1H，3-OH)，9.59(1H，4-OH)。13C-NMR(100 MHz，DMSO-d6)δ:126.4(C-1)，114.7(C-2)，146.2(C-3)，145.7(C-4)，116.5(C-5)，122.0(C-6)，149.1(C-7)，115.5(C-8)，167.2(C-9)，60.4(C-10)，15.0(C-11)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)一致［10］，故確定其為咖啡酸乙酯。

化合物(Ⅴ):淺黃色針狀結(jié)晶(氯仿-丙酮)，mp 203～204℃。ESI-MS m/z:193.0［M+H］+，分子式為 C10H8O4;1H-NMR(400 MHz，DMSO-d6)δ:3.79(3H，s，6-OCH3)，6.20(1H，d，J=9.5 Hz，H-3)，6.76(1H，s，H-8)，7.19(1H，s，H-5)，7.88(1H，d，J=9.5Hz，H-4)，10.29(1H，7-OH)。13C-NMR(100 MHz ，DMSO-d6)δ:161.4(C-2)，112.4(C-3)，145.2(C-4)，110.2(C-5)，150.2(C-6)，151.8(C-7)，103.4(C-8)，145.9(C-9)，111.2(C-10)，56.8(6-OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)一致［11］，故確定其為東莨菪內(nèi)酯。

化合物(Ⅵ):白色無(wú)定形粉末(甲醇)，mp 213～215℃ 。Molish反應(yīng)陽(yáng)性。ESI-MS m/z:583.2［M+H］+，分子式為 C28H38O13;1H-NMR(400 MHz ，DMSO-d6)δ:2.22(1H，m，H-8)，2.46(1H，m，Ha-7′)，2.62(1H，m，H-8′)，2.86(1H，m，Hb-7′)，3.58(1H，m，Ha-9′)，3.49(1H，m，Ha-9)，3.67(1H，m，Hb-9)，3.72(6H，s，3′，5′，-OCH3)，3.73(6H，s，3，5，-OCH3)，3.95(1H，m，Hb-9′)，4.65(1H，m，H-7)，4.82(1H，d，J=7.2 Hz，glc-1-H)，6.50(2H，s，H-2′，6′)，6.53(2H，s，H-2，6)。13CNMR(100 MHz，DMSO-d6)δ:133.7(C-1)，103.2(C-2，6)，147.7(C-3，5)，134.5(C-4)，81.9(C-7)，52.4(C-8)，58.6(C-9)，55.9(3，5-OCH3)，136.6(C-1′)，106.7(C-2′，6′)，152.4(C-3′，5′)，132.7(C-4′)，32.8(C-7′)，41.6(C-8′)，71.8(C-9′)，56.3(3′，5′-OCH3);glc:102.8(C-1)，74.1(C-2)，76.4(C-3)，69.9(C-4)，77.1(C-5)，60.9(C-6)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道一致［12］，故確定其為 5，5′-二甲氧基落葉松脂醇-4′-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(tortoside B)。

化合物(Ⅶ):無(wú)色片狀結(jié)晶(甲醇)，mp 227～229℃。Libermann-Burchard和Molish反應(yīng)陽(yáng)性。ESI-MS m/z:493.1［M-H］－，分子式為C28H46O7;1HNMR(400 MHz，C5D5N)δ:1.09(3H，s，CH3-18)，1.25(3H，s，CH3-19)，1.81(3H，d，J=6.0 Hz，CH3-21)，1.86(3H，d，J=6.0 Hz，dig-6-CH3);3.90(3H，s，dig-3-OCH3)，4.22(1H，m，H-3)，4.08(1H，q，J=7.0 Hz，H-20)，5.13(1H，d，J=8.0 Hz，dig-1-H)。13C-NMR(100 MHz，C5D5N)δ:37.9(C-1)，30.1(C-2)，78.2(C-3)，39.6(C-4)，140.7(C-5)，122.2(C-6)，32.7(C-7)，32.5(C-8)，50.6(C-9)，37.3(C-10)，21.3(C-11)，38.8(C-12)，46.2(C-13)，52.1(C-14)，24.3(C-15)，31.9(C-16)，86.0(C-17)，14.6(C-18)，19.8(C-19)，72.1(C-20)，19.7(C-21);digita:103.1(C-1)，71.4(C-2)，85.3(C-3)，68.8(C-4)，71.1(C-5)，17.8(C-6)，57.5(C-3-OCH3)以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道的一致［13］，故確定其為periplocoside L(Δ5-孕甾烯-3β，17α，20(S)-三醇-3-O-β-D-吡喃洋地黃糖苷)。

化合物(Ⅷ):無(wú)色針狀結(jié)晶(甲醇)，mp 174～176℃。Libermann-Burchard反應(yīng)陽(yáng)性。ESI-MS m/z:319.2［M+H］+，分子式為 C21H34O2;1H-NMR(400 MHz，C5D5N)δ:0.74(3H，s，CH3-18)，1.05(3H，s，CH3-19)，1.43(3H，d，J=6.4 Hz，CH3-21)，3.84(1H，m，H-3)，3.94(1H，dq，J=6.4，2.1Hz，H-20)，5.40(1H，brs，H-6)。13C-NMR(100 MHz ，C5D5N)δ:37.8(C-1)，31.8(C-2)，71.2(C-3)，43.4(C-4)，141.9(C-5)，121.1(C-6)，32.5(C-7)，32.1(C-8)，50.5(C-9)，36.8(C-10)，21.1(C-11)，39.1(C-12)，41.6(C-13)，56.9(C-14)，26.5(C-15)，24.7(C-16)，59.2(C-17)，12.6(C-18)，19.5(C-19)，68.9(C-20)，24.4(C-21)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)對(duì)照一致［14］，確定該化合物為 Δ5-孕甾烯-3β，20(S)-二醇。

化合物(Ⅸ):白色無(wú)定形粉末(甲醇)，mp 248～250℃。Libermann-Burchard和Molish反應(yīng)陽(yáng)性。ESI-MS m/z:643.3［M+H］+，分子式為C33H54O12;1H-NMR(400 MHz，C5D5N)δ:0.65(3H，s，CH3-18)，0.90(3H，s，CH3-19)，1.52(3H，d，J=6.0 Hz，CH3-21)，4.93(1H，d，J=7.4 Hz，20-glc-1-H)，5.02(1H，d，J=8.0 Hz，3-glc-1-H)，5.29(1H，brs，H-6)。13C-NMR(100 MHz，C5D5N)δ:37.4(C-1)，30.2(C-2)，78.1(C-3)，39.3(C-4)，140.8(C-5)，121.8(C-6)，32.0(C-7)，31.7(C-8)，50.2(C-9)，36.9(C-10)，21.0(C-11)，39.0(C-12)，41.5(C-13)，56.6(C-14)，24.4(C-15)，27.2(C-16)，58.3(C-17)，12.4(C-18)，19.3(C-19)，81.3(C-20)，23.2(C-21);20-sugar-moiety:glc:102.5(C-1)，75.3(C-2)，78.6(C-3)，71.0(C-4)，78.2(C-5)，62.8(C-6);3-sugar-moiety:glc:106.1(C-1)，75.7(C-2)，78.6(C-3)，71.8(C-4)，78.4(C-5)，62.9(C-6)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)對(duì)照一致［15］，確認(rèn)其為 Δ5-孕甾烯-3β，20(S)-二醇-20-O-β-D-吡喃葡萄糖-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷。

化合物(Ⅹ):無(wú)色針狀結(jié)晶(甲醇)，Libermann-Burchard和Molish反應(yīng)陽(yáng)性。ESI-MS m/z:643.3［M+H］+，分子式為C33H54O12;1H-NMR(400 MHz，C5D5N)δ:0.65(3H，s，CH3-18)，1.02(3H，s，CH3-19)，1.62(3H，d，J=6.0 Hz，CH3-21)，4.89(1H，d，J=8.0 Hz，glcⅡ-1-H)，5.19(1H，d，J=8.0 Hz，glcⅠ-1-H)，5.38(1H，m，H-6)。13C-NMR(100 MHz ，C5D5N)δ:37.8(C-1)，31.9(C-2)，71.3(C-3)，43.5(C-4)，141.9(C-5)，121.2(C-6)，32.6(C-7)，32.1(C-8)，50.4(C-9)，36.9(C-10)，21.1(C-11)，39.1(C-12)，41.6(C-13)，58.4(C-14)，27.3(C-15)，24.4(C-16)，56.7(C-17)，12.5(C-18)，19.6(C-19)，81.2(C-20)，23.7(C-21);glcⅠ:105.4(C-1)，75.2(C-2)，78.5(C-3)，71.7(C-4)，77.3(C-5)，70.1(C-6)，glcⅡ:106.0(C-1)，75.6(C-2)，78.5(C-3)，71.7(C-4)，78.5(C-5)，62.8(C-6)，以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)一致［16］，故確定其為 Δ5-孕甾烯-3β，20(S)-二醇-20-O-β-D-吡喃葡萄糖基(1→6)-β-D-吡喃葡萄糖苷(秦嶺藤苷C)。

化合物(Ⅺ):無(wú)色片狀結(jié)晶(甲醇)，mp 225～227℃。Libermann-Burchard和Molish反應(yīng)陽(yáng)性。ESI-MS m/z:1166.3 ［M+H］+，分 子 式 為C57H96O24;1H-NMR(400 MHz ，C5D5N)δ:0.63(3H，s，CH3-18)，0.92(3H，s，CH3-19)，1.44(3H，d，J=6.4Hz，CH3-6，Cym)，1.46(3H，d，J=6.4Hz，digitaⅠ-6-CH3)，1.55(3H，d，J=6.4Hz，digitaⅡ-6-CH3)，1.56(3H，d，J=5.6Hz，CH3-21)，2.12(3H，s，CH3C=O，digitaⅠ)，3.39(3H，s，digitaⅠ-3-OCH3)，3.49［3H，s，digitaⅡ-3 OCH3］，3.51(3H，s，cym-3-OCH3)，4.66(1H，d，J=9.2 Hz，digitaⅠ-1-H)，4.71(1H，d，J=9.2 Hz，H-1，digitaⅡ-1-H］，5.24(1H，d，J=9.2 Hz，H-1，Cym)，5.24(1H，d，J=8.0 Hz，H-1，glcⅠ-1-H］，5.33(1H，d，J=8.0 Hz，glcⅡ-1-H)，5.33(1H，brs，H-6)。13C-NMR(100 MHz ，C5D5N)δ:37.4(C-1)，30.3(C-2)，77.3(C-3)，39.2(C-4)，140.6(C-5)，122.0(C-6)，32.2(C-7)，31.8(C-8)，50.2(C-9)，36.8(C-10)，21.0(C-11)，39.0(C-12)，41.4(C-13)，58.0(C-14)，26.8(C-15)，24.4(C-16)，56.6(C-17)，12.5(C-18)，19.3(C-19)，81.6(C-20)，23.1(C-21);3-sugar-moiety:cym:96.3(C-1)，37.0(C-2)，76.1(C-3)，84.1(C-4)，68.7(C-5)，18.1(C-6)，58.5(3-OCH3)，digitaⅠ:103.5(C-1)，71.8(C-2)，82.2(C-3)，67.7(C-4)，71.3(C-5)，17.1(C-6)，56.5(3-OCH3)，170.0(2-COCH3)，23.2(2-COCH3);20-sugar-moiety:digitaⅡ:104.2(C-1)，77.2(C-2)，85.3(C-3)，68.3(C-4)，72.1(C-5)，17.3(C-6)，56.4(3-OCH3)，glcⅠ:104.3(C-1)，75.2(C-2)，77.3(C-3)，70.6(C-4)，77.7(C-5)，69.9(C-6)，glcⅡ:105.1(C-1)，75.4(C-2)，78.1(C-3)，71.8(C-4)，78.1(C-5)，62.8(C-6)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)一致［17］，故確定其為Δ5-孕甾烯-3β，20(S)-二醇-3-O-［2-O-乙?；?β-D-吡喃洋地黃糖基(1→4)-β-D-吡喃加拿大麻糖］-20-O-β-D-吡喃葡萄糖基(1→6)-β-D-吡喃葡萄糖基(1→2)-β-D-吡喃洋地黃糖苷。

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