耿亞 馬永明

（漯河醫(yī)學(xué)高等專(zhuān)科學(xué)校第二附屬醫(yī)院 河南漯河 462002）

黑骨藤追風(fēng)活絡(luò)膠囊是根據(jù)苗族醫(yī)藥理論,選取苗族治療風(fēng)濕病的經(jīng)典藥材,按現(xiàn)代制藥技術(shù)制成的苗藥。本試驗(yàn)采用薄層色譜法對(duì)處方中的青風(fēng)藤、黑骨藤、追風(fēng)傘進(jìn)行定性鑒別,用高效液相色譜(HPLC)法測(cè)定膠囊中青藤堿的含量。

1 臨床資料

Agilent1100高效液相色譜儀、G2170AA色譜工作站(美國(guó)安捷倫公司)、黑骨藤追風(fēng)活絡(luò)膠囊（貴州老來(lái)福藥廠生產(chǎn)）、青藤堿對(duì)照品(成都曼思特生物科技有限公司),槲皮素（中國(guó)藥品生物制品檢定）追風(fēng)傘對(duì)照藥材由貴州大學(xué)生化所提供，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 定性

2.1.1 黑骨藤的鑒別 取本品內(nèi)容物10g，研細(xì)，加氯仿超聲輔助提取1h,濾過(guò)，濾液揮干，加甲醇10mL超聲波催溶，為供試品溶液；另取黑骨藤對(duì)照藥材5g研細(xì)，50mL氯仿提取，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状?0mL使溶解，作為對(duì)照藥材溶液;再取槲皮素2g,加甲醇10mL，催溶，得對(duì)照品溶液；陰性樣品對(duì)照(除黑骨藤外,其他藥材按比例進(jìn)行提取)溶液。

2.1.2 青風(fēng)藤的鑒定 取本品內(nèi)容物10g,研細(xì)，pH為5.7鹽酸水溶液提取2h,氨水調(diào)pH8.1,離心，沉淀物氯仿萃取，過(guò)濾，濾液揮干，加10mL甲醇催溶，為供試品溶液;另取青風(fēng)藤10g，研細(xì)，參照上述方法，得對(duì)照藥材溶液；另取青藤堿2g溶解于10mL的甲醇中作為對(duì)照品溶液，陰性樣品對(duì)照(除青風(fēng)藤外,其他藥材按比例進(jìn)行提取)溶液。毛細(xì)管吸取上述3種溶液各2μL,分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上,以氯仿-甲酸甲酯(18∶5)為展開(kāi)劑,展開(kāi),晾干,碘化鉍鉀顯色。供試品與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上,顯相同顏色的斑點(diǎn)。陰性對(duì)照無(wú)干擾，Rf為0.65、0.64、0.64。

2.1.3 追風(fēng)傘鑒定 取本品內(nèi)容物10g,研細(xì)，加甲醇超聲輔助提取2h,過(guò)濾，為供試品溶液，另取追風(fēng)傘10g，研細(xì)，參照上述方法，得對(duì)照藥材溶液；陰性樣品對(duì)照(除追風(fēng)傘外,其他藥材按比例進(jìn)行提取)溶液。毛細(xì)管吸取上述3種溶液各2μL,分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上,以甲醇-醋酸-水(10:5:2)為展開(kāi)劑,展開(kāi),晾干,置紫外光燈(254nm)下檢視。供試品與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上,顯相同顏色的斑點(diǎn)。陰性對(duì)照無(wú)干擾。

2.2 含量測(cè)定

2.2.1 青藤堿 色譜柱：Agilent C18柱（150mm×4.6mm5μm），流動(dòng)相：乙腈-水-三乙胺(21:79:0.05)，檢測(cè)波長(zhǎng)為262nm[1]，流速1.0mL/min，柱溫30℃，進(jìn)樣量：20μL。

2.2.2 線性范圍試驗(yàn) 分別吸取青藤堿溶液0.1,1.5,2.5,3.5,4.5mL,分別置于5mL量瓶中,加70%甲醇稀釋至刻度,分別精密吸取該對(duì)照品溶液20μL,按“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣,測(cè)定青藤堿峰面積,以濃度峰面積(Y)對(duì)(X)作線性回歸,得回歸方Y(jié)=3907423X-78229（r=0.9998)。青藤堿在2～90μg.mL-1范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

2.2.3 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取青藤堿供試品溶液20μL,按照2.1.2項(xiàng)下條件在(2、8、14、20、24)h時(shí)進(jìn)行測(cè)定，以考察其穩(wěn)定性，結(jié)果RSD值為2.32%表明青藤堿在24h內(nèi)穩(wěn)定。

2.2.4 精密度試驗(yàn) 對(duì)照品溶液20μL注入液相色譜，重復(fù)5次,結(jié)果測(cè)定峰面積積分值得RSD值為1.33%，表明儀器精密度良好。

2.2.5 重現(xiàn)性試驗(yàn) 取同一批樣品,按2.1.2項(xiàng)下方法平行制備5份供試品溶液,測(cè)定測(cè)得峰面積，計(jì)算其含量,平均RSD值為1.73%，表明該方法重現(xiàn)性良好。

2.2.6 加樣回收率試驗(yàn) 取已知含量的樣品5份,準(zhǔn)確稱(chēng)定各1.0g,加入不同劑量青藤堿對(duì)照品，按上述方法制備，參照2.2.1項(xiàng)下條件測(cè)定其含量并計(jì)算回收率,結(jié)果平均回收率99.25%，RSD1.27%。

2.2.7 樣品測(cè)定 對(duì)3批樣品依“2.2.1”項(xiàng)下方法制備供試液,按外標(biāo)法測(cè)定含量,測(cè)定三次，含量分別為（0.2873、0.2871、0.2891）mg.mL-1平均含量0.2878mg.mL-1,平均RSD1.27%。

3 討論

青藤堿具有肯定的鎮(zhèn)痛鎮(zhèn)靜、鎮(zhèn)咳局麻、降血壓、抗炎作用[2]，因此選擇青風(fēng)藤中有效成分青藤堿為含量控制標(biāo)準(zhǔn),從而更好地控制產(chǎn)品質(zhì)量。本實(shí)驗(yàn)采用采用檢測(cè)波長(zhǎng)262nm，流動(dòng)相條件擬定如下:乙腈-水-三乙胺(21:79:0.05)，在該條件下,供試品分離情況較好。

[1]李可強(qiáng),劉威,張振秋.HPLC法測(cè)定北豆根藥材中粉防己堿和青藤堿[J].中草藥，2008，4:607～610.

[2]劉志國(guó),王艷艷.青風(fēng)藤中青藤堿的提取工藝及分析方法研究進(jìn)展[J].時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥,2006,17(5):116～117.