王鵬遠(yuǎn),張金蘭

(中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院 &北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院,藥物研究所,北京 100050)

LC/MS技術(shù)在發(fā)現(xiàn)和鑒定藥物中有關(guān)物質(zhì)的應(yīng)用

王鵬遠(yuǎn),張金蘭

(中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院 &北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院,藥物研究所,北京 100050)

論述了LC/MS技術(shù)在發(fā)現(xiàn)和鑒定藥物中有關(guān)物質(zhì)的應(yīng)用特點(diǎn),比較和討論不同原理質(zhì)量分析器在藥物雜質(zhì)鑒定中的適用范圍和優(yōu)缺點(diǎn),并總結(jié)了近幾年LC/MS技術(shù)在藥物有關(guān)物質(zhì)分析中的應(yīng)用實(shí)例。

液相色譜-質(zhì)譜(LC/MS);四極桿質(zhì)譜;飛行時(shí)間質(zhì)譜;離子阱質(zhì)譜;雜質(zhì)鑒定

有關(guān)物質(zhì)主要是指在藥物生產(chǎn)過(guò)程中帶入的原料、中間體、降解物、異構(gòu)體、聚合體和副反應(yīng)產(chǎn)物等,它們的存在對(duì)藥物的質(zhì)量和安全有顯著影響。人用藥物注冊(cè)技術(shù)要求國(guó)際協(xié)調(diào)會(huì)(International Conference on Harmonization of Technical Requirements for Registration of Pharmaceuticals for Human U se,ICH)明確指出:“對(duì)于每日最大劑量≤2 g的藥物,其表觀(guān)含量在0.1%或者每日最大攝入量為1 mg及其以上的雜質(zhì),須鑒定其結(jié)構(gòu);而對(duì)于每日最大劑量＞2 g的藥物,當(dāng)雜質(zhì)的表觀(guān)含量在0.05%及其以上,就必須鑒定其結(jié)構(gòu)”[1-2]。因此,隨著醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)新藥研制速度的不斷加快,需要快速、靈敏、準(zhǔn)確的雜質(zhì)鑒定方法來(lái)滿(mǎn)足日益增長(zhǎng)的新藥研發(fā)速度,保障藥物的安全性。

目前,液相色譜-質(zhì)譜(liquid chromatography-mass spectrometry,LC/M S)因其卓越的靈敏度、高選擇性和快速的特點(diǎn)已成為藥物中微量有關(guān)物質(zhì)分析的首選技術(shù)。對(duì)于成分復(fù)雜的藥物,使用LC/M S技術(shù)可以不經(jīng)復(fù)雜的分離和純化步驟即可獲得樣品的色譜和質(zhì)譜信息,特別是多級(jí)質(zhì)譜和高分辨質(zhì)譜技術(shù)的發(fā)展和應(yīng)用,能夠在線(xiàn)獲得化合物的豐富片段信息和分子組成信息,為藥物中有關(guān)物質(zhì)的結(jié)構(gòu)鑒定提供了快速、準(zhǔn)確的方法。當(dāng)然,在沒(méi)有對(duì)照品的情況下,要最終確定雜質(zhì)結(jié)構(gòu)還需要通過(guò)分離富集制備或者定向合成等途徑獲得該雜質(zhì)單體,然后進(jìn)行NMR、IR、X-ray衍射分析來(lái)確證其結(jié)構(gòu)。本文將著重論述LC/M S在發(fā)現(xiàn)和鑒定藥物中有關(guān)物質(zhì)的應(yīng)用特點(diǎn)。

1 離子化方式

大氣壓電離源(atmospheric p ressure ionization,API)有效解決了常壓運(yùn)行下輸出液態(tài)組分的LC與真空條件下進(jìn)行氣態(tài)組分檢測(cè)的M S之間的接口問(wèn)題,這為L(zhǎng)C/M S強(qiáng)大功能的發(fā)揮奠定了技術(shù)基礎(chǔ)。目前API主要包括電噴霧離子源(electrosp ray ionization,ESI)和大氣壓化學(xué)離子源(atmospheric p ressure chemical ionization,APCI),其中,ESI是先帶電、再?lài)婌F,帶電液滴在去溶劑化過(guò)程中形成離子而被檢測(cè),適合分析極性大的化合物;而APCI是先成霧、后放電,在電暈針產(chǎn)生的高壓電弧下溶劑分子發(fā)生電離,再與樣品分子發(fā)生分子離子反應(yīng),從而形成離子進(jìn)行檢測(cè),適合分析極性小的樣品。二者都屬于軟電離技術(shù),非常容易形成化合物的準(zhǔn)分子離子峰,這對(duì)獲得化合物的相對(duì)分子質(zhì)量信息很有幫助。ESI的軟電離程度較APCI的要小,但其應(yīng)用范圍較APCI大,只有少部分化合物在ESI離子源內(nèi)電離程度差,可以用A PCI離子源輔助解決問(wèn)題,另外APCI離子源可以對(duì)LC流速高達(dá)2 m L·min-1的組分直接進(jìn)行分析,省去分流的繁瑣。

由于A(yíng)PI包含 ESI和APCI兩種不同的離子源,而每種源的離子檢測(cè)模式又分為正離子和負(fù)離子,這樣組合起來(lái)共有4種檢測(cè)方式,其中必然有一種適合藥物中有關(guān)物質(zhì)的分析,特別是對(duì)于未知雜質(zhì),將4種檢測(cè)方式獲得的信息綜合起來(lái)進(jìn)行比較分析,能更加確定對(duì)未知化合物結(jié)構(gòu)的推斷。

2 離子分離方式

樣品經(jīng)過(guò)離子化后須在質(zhì)量分析器中按照質(zhì)荷比的不同進(jìn)行分離,目前,LC/M S中常用的質(zhì)量分析器有四極桿(quadrupole)、飛行時(shí)間(time of flight,TOF)、離子阱 (ion trap,IT)等

類(lèi)型,每一種都有其優(yōu)勢(shì)和局限,實(shí)際工作中要根據(jù)需要選擇最合適的類(lèi)型。

2.1 單一型質(zhì)譜

2.1.1 四極桿質(zhì)譜 四極桿質(zhì)量分析器相當(dāng)于一個(gè)質(zhì)量過(guò)濾器,當(dāng)在極桿上施加一定的直流和射頻電場(chǎng)時(shí),四極桿只允許一定質(zhì)荷比的離子通過(guò)檢測(cè)器,而其他質(zhì)荷比的離子因?yàn)檫\(yùn)動(dòng)路徑不穩(wěn)定而撞擊在四極桿上不能被檢測(cè)。四極桿質(zhì)譜結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單、價(jià)格便宜、體積小巧,具有較好的重現(xiàn)性,但其分辨率較低,隨著掃描范圍逐漸增大,其靈敏度逐漸下降,一般只能獲得化合物的相對(duì)分子質(zhì)量信息,對(duì)含量較低的雜質(zhì)組分則無(wú)法檢測(cè)[3]。實(shí)際應(yīng)用中經(jīng)常作為混合型質(zhì)譜的前級(jí)分析器(如Q-IT,Q-TOF等)用于母離子選擇或者發(fā)揮離子聚焦等導(dǎo)向功能。目前在藥物有關(guān)物質(zhì)分析中僅用于初級(jí)的相對(duì)分子質(zhì)量識(shí)別[4]。

2.1.2 飛行時(shí)間質(zhì)譜 飛行時(shí)間質(zhì)量分析器通過(guò)測(cè)定離子從源到檢測(cè)器的飛行時(shí)間,再根據(jù)該時(shí)間與離子質(zhì)荷比的函數(shù)關(guān)系進(jìn)行數(shù)學(xué)換算,從而檢測(cè)離子。因?yàn)槠鋻呙杷俣确浅？?靈敏度極高,而且理論上掃描范圍可以無(wú)限大,非常適合各種藥物中有關(guān)物質(zhì)的分析?？墒?由于離子從源出發(fā)的起始時(shí)間和初始動(dòng)能不盡相同,使其分辨率大打折扣,為了解決這一缺陷,人們?cè)?TOF上引進(jìn)了一項(xiàng)稱(chēng)為“延遲引出”(delay extraction,DE)技術(shù)或稱(chēng)“脈沖離子引出”(pulse ion extraction,PIE)技術(shù)[5],通過(guò)選擇適當(dāng)?shù)难舆t時(shí)間及控制靶與引出電極間的電位差,可以有效地補(bǔ)償離子初始動(dòng)能的分散,從而顯著地提高飛行時(shí)間質(zhì)譜儀的分辨率。另一種方法是使用離子反射器(reflectron)[6],動(dòng)能大的離子“刺入”反向靜電場(chǎng)較深,反之較淺,從而保證質(zhì)荷比相同而動(dòng)能不同的離子能在相同時(shí)間到達(dá)檢測(cè)器,使分辨率得到極大提高。

TOF作為一種價(jià)格適中,維護(hù)簡(jiǎn)單的高分辨質(zhì)譜在藥物的有關(guān)物質(zhì)鑒定中發(fā)揮著重要作用。Provera等[7]在某新型促皮質(zhì)激素釋放因子拮抗劑的研究中,將含量較小,無(wú)法在常規(guī)液相良好分離的雜質(zhì),通過(guò)半制備液相分離出一定量單體,然后進(jìn)行 TOF分析,獲得該雜質(zhì)的HRM S數(shù)據(jù),結(jié)合合成工藝的信息以及 NM R數(shù)據(jù)確定其結(jié)構(gòu)。由于 TOF屬于性?xún)r(jià)比較高的高分辨質(zhì)譜,因此在 HRM S領(lǐng)域應(yīng)用非常廣泛,在藥物有關(guān)物質(zhì)的分子組成測(cè)定方面應(yīng)用也很普遍[9-13]。

2.1.3 離子阱質(zhì)譜 離子阱質(zhì)量分析器分為動(dòng)態(tài)和靜態(tài)兩種類(lèi)型,前者包括三維離子阱和線(xiàn)性離子阱(linear ion trap,L IT),后者主要是指離子回旋共振質(zhì)譜(ion cyclotron resonance,ICR)。

三維離子阱與四極桿很相似,如果將四極桿質(zhì)量分析器的兩端加上合適的電場(chǎng)將其封上,則四極桿內(nèi)的離子將受到正交的3個(gè)方向電場(chǎng)力的共同作用而較長(zhǎng)時(shí)間的呆在穩(wěn)定區(qū)內(nèi),就像一個(gè)電場(chǎng)勢(shì)阱[14]。離子阱質(zhì)譜掃描迅速,可以將感興趣的母離子“捕獲”在阱內(nèi),再通過(guò)碰撞誘導(dǎo)解離(collison induced dissociation,CID)獲得子離子,然后再“捕獲”感興趣的子離子進(jìn)行 CID分析,如此反復(fù),從而獲得目標(biāo)化合物充足的多級(jí)質(zhì)譜數(shù)據(jù),為結(jié)構(gòu)鑒定提供充分信息。三維離子阱結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單、性?xún)r(jià)比高,靈敏度較四極桿質(zhì)量分析器提高10～1 000倍,而且擁有優(yōu)異的多級(jí)質(zhì)譜測(cè)定能力,因而定性能力很強(qiáng)。

Dongre等[15]使用離子阱質(zhì)譜儀LCQ對(duì)某磷酸哌喹原料藥進(jìn)行LC/MSn分析,獲得雜質(zhì)和主成分的準(zhǔn)分子離子峰及M Sn數(shù)據(jù),結(jié)合合成路線(xiàn)的起始原料和中間體及反應(yīng)條件,并根據(jù)氯元素同位素豐度分布推斷氯原子個(gè)數(shù),判斷可能的基團(tuán)變化,推斷出雜質(zhì)最可能的結(jié)構(gòu),然后定向合成、分離純化,獲得推斷的可能雜質(zhì)的單體,進(jìn)行LC/M Sn和NMR以及IR驗(yàn)證,最終確定其結(jié)構(gòu)。John等[16]在分析不同廠(chǎng)家和不同國(guó)家的氫氯噻嗪原料藥時(shí)發(fā)現(xiàn)一個(gè)未報(bào)道的雜質(zhì),采用離子阱質(zhì)譜儀LCQ進(jìn)行LC/M S和LC-M S/M S分析,獲得一級(jí)和多級(jí)質(zhì)譜信息,從而推斷出雜質(zhì)的結(jié)構(gòu)。Francese等[17]在研究葉酸鈣過(guò)程中發(fā)現(xiàn)一種有關(guān)物質(zhì),通過(guò)離子阱質(zhì)譜儀LCQ進(jìn)行LC-M S/M S分析,發(fā)現(xiàn)該有關(guān)物質(zhì)與葉酸的M Sn數(shù)據(jù)非常一致,只是[M+H]+相差1 u,提示該雜質(zhì)的相對(duì)分子質(zhì)量比葉酸小1 u,根據(jù)裂解途徑的一致性可以推斷二者只在氨基酸側(cè)鏈部分有區(qū)別,再根據(jù)氮律規(guī)則,可以推測(cè)未知雜質(zhì)的側(cè)鏈部分為谷氨酸,最后用合成途徑獲得該物質(zhì),進(jìn)行結(jié)構(gòu)驗(yàn)證。Dongre等[18]通過(guò)LC/M S法分析氟康唑原料藥時(shí)發(fā)現(xiàn)了3個(gè)有關(guān)物質(zhì),其中有2個(gè)結(jié)構(gòu)未曾報(bào)道,由離子阱質(zhì)譜儀LCQ獲得LC-M S/M S數(shù)據(jù),歸納出未知雜質(zhì)與氟康唑在多級(jí)質(zhì)譜上的異同,推斷出其可能的結(jié)構(gòu),然后對(duì)原料藥進(jìn)行制備、分離,得到雜質(zhì)單體,再進(jìn)行 IR、NM R分析,確證結(jié)構(gòu)。Raman等[19]使用 HPLC方法從西酞普蘭中檢測(cè)到1個(gè)雜質(zhì),通過(guò)LC-IT M S獲得多級(jí)質(zhì)譜數(shù)據(jù),比較該雜質(zhì)與主成分質(zhì)譜裂解途徑的區(qū)別,同時(shí)借助Q-TOF獲得高分辨數(shù)據(jù),對(duì)其結(jié)構(gòu)進(jìn)行推測(cè),最后通過(guò)液相分離制備得到該雜質(zhì)的純品,進(jìn)而分析其N(xiāo)MR、IR光譜,最終確定該雜質(zhì)的結(jié)構(gòu)。

線(xiàn)性離子阱相比三維離子阱其阱腔體積增大很多,具有雙檢測(cè)器,而且掃描循環(huán)時(shí)間大大減少,從而使其靈敏度比三維離子阱提高1個(gè)數(shù)量級(jí),可以獲得更高的采集速度、更高的分辨率和更高質(zhì)量的M Sn譜圖[20]。本課題組人員在鑒定葛根素原料藥中有關(guān)物質(zhì)時(shí),利用L IT卓越的靈敏度和多級(jí)質(zhì)譜能力,獲得了有關(guān)物質(zhì)RS1和 RS2的M S1～M S5數(shù)據(jù),二者的前四級(jí)質(zhì)譜數(shù)據(jù)幾乎完全相同,直到M S5時(shí)才出現(xiàn)不同的特征碎片離子,進(jìn)而確定了羥基的取代位置[21]。L IT在掃描速度、靈敏度和分辨率上都較三維離子阱有顯著提高,其定性能力明顯增強(qiáng),非常適合藥物中微量有關(guān)物質(zhì)結(jié)構(gòu)的確定。

離子阱質(zhì)譜強(qiáng)大的多級(jí)質(zhì)譜裂解能力有利于研究化合物質(zhì)譜裂解規(guī)律,通過(guò)比較藥物主成分與有關(guān)物質(zhì)的多級(jí)質(zhì)譜數(shù)據(jù)的異同,可以快速推斷有關(guān)物質(zhì)發(fā)生變化的基團(tuán)數(shù)量和位置,為最終確定雜質(zhì)結(jié)構(gòu)提供可靠信息,因而離子阱質(zhì)譜技術(shù)在藥物中有關(guān)物質(zhì)結(jié)構(gòu)快速鑒定方面發(fā)揮著重要作用。

2.2 混合型質(zhì)譜

混合型質(zhì)譜是將兩種或兩種以上的質(zhì)譜串聯(lián)起來(lái),從而充分發(fā)揮各種質(zhì)譜的優(yōu)勢(shì),提高離子的選擇性。常見(jiàn)的混合型質(zhì)譜由2個(gè)質(zhì)譜串聯(lián)而成,其中第一級(jí)質(zhì)量分析器(M S1)將離子預(yù)掃描或者導(dǎo)向聚焦,由第二級(jí)質(zhì)量分析器(M S2)分析結(jié)果?；旌闲唾|(zhì)譜按照M S1類(lèi)型的不同主要可分為MS1為四極桿質(zhì)量分析器和M S1為離子阱質(zhì)量分析器兩類(lèi)。

2.2.1 M S1為四極桿質(zhì)量分析器 三重串聯(lián)四極桿質(zhì)譜(QqQ)是目前廣泛應(yīng)用的一種混合型質(zhì)譜,其第一級(jí)和第三級(jí)四極桿分別為M S1和M S2,第二級(jí)四極桿分析器所起的作用是將從M S1得到的各離子峰進(jìn)行碰撞誘導(dǎo)解離產(chǎn)生子離子,然后進(jìn)入M S2再進(jìn)行分析,相當(dāng)于一個(gè)碰撞反應(yīng)池。采用選擇性離子反應(yīng)監(jiān)測(cè)(SRM)時(shí),QqQ由于經(jīng)兩重質(zhì)量分離和中間的碰撞誘導(dǎo)解離(CID),具有突出的專(zhuān)屬性和靈敏度優(yōu)勢(shì),同時(shí)它具有子離子掃描、母離子掃描、中性丟失掃描和全掃描等多種掃描方式,在微量物質(zhì)的定性測(cè)定方面比較有特點(diǎn)。QqQ的高穩(wěn)定性使其在定量分析上的應(yīng)用更為廣泛,但由于不是高分辨,且一般最多僅能給出M S2數(shù)據(jù),使其在結(jié)構(gòu)定性方面稍顯不足,特別對(duì)于藥物中有關(guān)物質(zhì)的鑒定往往要借助其他光譜技術(shù)手段來(lái)確定。Bharathi等[22]在對(duì)鹽酸克林霉素棕櫚酸酯原料藥的雜質(zhì)鑒定中,由于LC-QqQ M S只能獲得二級(jí)譜圖,在得到主要碎片離子質(zhì)荷比差異的基礎(chǔ)上還需將雜質(zhì)通過(guò)制備分離出來(lái),然后進(jìn)行NM R、IR分析確定結(jié)構(gòu)。Rok等[23]使用LCQqQ M S方法從慶大霉素中分離出17種雜質(zhì),根據(jù)雜質(zhì)對(duì)照品及其裂解規(guī)律推斷出主成分慶大霉素的裂解途徑,從而推斷出其他雜質(zhì)的結(jié)構(gòu)。由于能夠買(mǎi)到大部分雜質(zhì)對(duì)照品,因此能從有限的M S2信息中獲得雜質(zhì)的特征碎片離子信息,為雜質(zhì)的結(jié)構(gòu)推斷提供依據(jù)。

四極桿-飛行時(shí)間質(zhì)譜(Q-TOF)是由四極桿質(zhì)譜和飛行時(shí)間質(zhì)譜組成的串聯(lián)型質(zhì)譜儀,因此無(wú)論是在M S或M S/MS模式下均具有較高的分辨率和質(zhì)量精確度。在M S模式下,四極桿具有離子導(dǎo)向作用,發(fā)揮離子分離作用的是TOF MS部分;在M S/MS模式下,第一級(jí)四極桿質(zhì)譜具有離子選擇功能,通過(guò)選取單一離子并將其送入碰撞活化室與惰性氣體發(fā)生碰撞,從而使母離子發(fā)生誘導(dǎo)裂解,產(chǎn)生子離子再進(jìn)入TOFMS進(jìn)行質(zhì)量分離。這樣Q-TOF可以在進(jìn)行M S2分析的同時(shí)對(duì)其進(jìn)行高分辨測(cè)定,定性功能得到加強(qiáng)。Raman等[24]在合成抗抑郁藥物依澤替米貝過(guò)程中檢測(cè)到1個(gè)雜質(zhì),通過(guò)LCM S/MS分析獲得其 MSn數(shù)據(jù),并使用Q-TOF獲得其準(zhǔn)確的分子質(zhì)量及分子組成信息,并推測(cè)出其結(jié)構(gòu),最后將該雜質(zhì)通過(guò)制備液相分離出來(lái)進(jìn)行NM R、IR分析,從而確定其結(jié)構(gòu)。Li等[25]對(duì)于倍他地松-17-戊酸酯原料藥中能夠預(yù)測(cè)的有關(guān)物質(zhì),根據(jù)結(jié)構(gòu)特點(diǎn)推出堿水解的產(chǎn)物結(jié)構(gòu),然后使用Q-TOF M S觀(guān)察堿水解樣品的M S/MS和 HRM S數(shù)據(jù),再與理論上堿水解產(chǎn)物純品的M S/M S和 HRMS數(shù)據(jù)對(duì)比,若譜圖特征與理論預(yù)測(cè)一致,則說(shuō)明雜質(zhì)結(jié)構(gòu)推斷正確性。Marko等[26]在分離鑒定辛伐他汀原料藥及其片劑中的有關(guān)物質(zhì)時(shí),通過(guò)Q-TOF獲得辛伐他汀及其有關(guān)物質(zhì)的準(zhǔn)分子離子峰和主要碎片離子的分子組成信息,比較已知主成分和未知雜質(zhì)在分子組成上的異同,可以確定未知雜質(zhì)與已知主成分結(jié)構(gòu)相同部分和不同部分,進(jìn)而推斷其結(jié)構(gòu)。

四極桿-離子阱質(zhì)譜(Q-IT)是由四極桿和離子阱組成的混合型質(zhì)譜,當(dāng)IT只進(jìn)行一級(jí)掃描時(shí),它可以充當(dāng)QqQ使用;當(dāng)Q作為離子導(dǎo)向作用時(shí),它又可以作為IT M S使用,從而在同一臺(tái)質(zhì)譜上兼顧了藥物中微量組分定量分析與定性分析的功能。

2.2.2 MS1為離子阱質(zhì)量分析器 Dongrea等[27]在對(duì)氯喹和羥氯喹原料藥進(jìn)行分析時(shí),通過(guò)LC-IT M S獲得其有關(guān)物質(zhì)的M S和M Sn數(shù)據(jù),推斷出雜質(zhì)與原藥在M Sn上的特征性差異,并通過(guò)LC-TOF M S獲得有關(guān)物質(zhì)及碎片的精確分子質(zhì)量和分子組成信息,研究特征差異基團(tuán)結(jié)構(gòu),進(jìn)而推斷有關(guān)物質(zhì)結(jié)構(gòu)。該實(shí)驗(yàn)在LC-IT M S和LC-TOF M S兩臺(tái)不同的質(zhì)譜上對(duì)同一藥物中的有關(guān)物質(zhì)進(jìn)行分析,可能會(huì)因儀器不同產(chǎn)生的響應(yīng)差異影響判斷,同時(shí)也耗費(fèi)了較多的人力和物力,而離子阱-飛行時(shí)間質(zhì)譜(IT-TOF)將具有強(qiáng)大M Sn功能的離子阱質(zhì)譜與能夠測(cè)定精確分子質(zhì)量的 TOF串聯(lián)起來(lái),原來(lái)的實(shí)驗(yàn)可以在一次分析中完成,大大提高分析效率,這對(duì)藥物中有關(guān)物質(zhì)結(jié)構(gòu)鑒定非常有利。姚勁挺等[28]采用超快速液相色譜和離子阱飛行時(shí)間串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用,定性檢測(cè)出大米和菠菜陽(yáng)性樣品中的19種農(nóng)藥。IT-TOF還可以用于中藥中微量組分的快速結(jié)構(gòu)鑒定[29]。

線(xiàn)性離子阱-傅里葉變換離子回旋共振質(zhì)譜(L IT-FTICR M S)這種新的混合型質(zhì)譜綜合了L IT的穩(wěn)定性、多樣性、M Sn能力和 FT的高分辨、精確質(zhì)量測(cè)定能力,可以在獲得微量組分的多級(jí)質(zhì)譜碎片的同時(shí)對(duì)其進(jìn)行分子組成的測(cè)定,所有工作在一次分析中完成,是目前鑒定藥物中有關(guān)物質(zhì)結(jié)構(gòu)效率最高的一種技術(shù)[30]。目前,由于其價(jià)格昂貴和維護(hù)成本高等原因限制了其廣泛應(yīng)用,但近年來(lái)推出的線(xiàn)性離子阱-靜電場(chǎng)軌道阱質(zhì)譜(L IT-Orbitrap)在保留L IT-FT優(yōu)點(diǎn)的同時(shí)大大降低了生產(chǎn)和維護(hù)成本,相信會(huì)在藥物雜質(zhì)分析中發(fā)揮越來(lái)越重要的作用。

3 小結(jié)

LC/M S技術(shù)將高分離能力的LC技術(shù)和高定性能力的M S技術(shù)聯(lián)用起來(lái),具有分析速度快、靈敏度高、專(zhuān)屬性好等優(yōu)點(diǎn),已成為快速、準(zhǔn)確發(fā)現(xiàn)和鑒定藥物中有關(guān)物質(zhì)的最佳方法。尤其是當(dāng)今種類(lèi)繁多、功能強(qiáng)大的質(zhì)譜檢測(cè)器的快速發(fā)展,為藥物中微量化合物的結(jié)構(gòu)鑒定提供了快速、靈敏、準(zhǔn)確、多樣的解決方案。然而,LC/M S有時(shí)需要使用易揮發(fā)緩沖鹽系統(tǒng),經(jīng)常受藥劑中輔料影響產(chǎn)生離子化抑制現(xiàn)象,對(duì)于某些含有易氧化基團(tuán)的化合物容易因熱分解、電化學(xué)等源內(nèi)誘導(dǎo)反應(yīng)產(chǎn)生“偽雜質(zhì)”,從而影響真正雜質(zhì)的確定。總之,隨著科學(xué)技術(shù)的不斷進(jìn)步,LC/M S技術(shù)正沿著高通量化、高精確化的方向發(fā)展,在未來(lái)藥物雜質(zhì)結(jié)構(gòu)鑒定中將發(fā)揮更大的作用。

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Applications of LC/MS in Discovery and Characterization of Related Impurities in Drug

WANG Peng-yuan,ZHANG Jin-lan
(Institute of M ateria M edical,Chinese Academy of M edical Sciences and Peking Union M edical College,Beijing 100050,China)

App lication characteristics and research ideasof liquid chromatography-mass spectrometry(LC/M S)techniques in discovery and characterization of related impuritiesof durg were reviewed.The scope of app lication and strong and weak points of different mass analyzers used in characterization of drug related impurities w ere compared and discussed.The app lication samples of analysis in drug related impurities by LC/M S techniques w ere summarized in recent years.

liquid chromatography-mass spectrometry(LC/MS);quadrupole mass spectrometry;time-of-flightmass spectrometry;ion trap mass spectrometry;impurity structure characterization

O 657.63

A

1004-2997(2010)06-0362-06

201010-29-;

2010-11-11

衛(wèi)生行業(yè)科研專(zhuān)項(xiàng)項(xiàng)目(200802038)資助

王鵬遠(yuǎn)(1985～),男,山西芮城人,碩士研究生,從事藥物分析研究。E-mail:wpy@imm.ac.cn

張金蘭(1969～),女,內(nèi)蒙古呼和浩特人,研究員,從事藥物分析研究。E-mail:zhjl@imm.ac.cn