梁成結，鐘歡妹，羅燦嶠，楊文敏

（1.廣州醫(yī)學院實驗動物研究中心；廣州 510182；2.增城市人民醫(yī)院檢驗科；廣州 510095；3.中山大學醫(yī)學院病理教研室；廣州 510089；4.廣州市兒童醫(yī)院 510120）

大鼠心臟插管留置術過程中極易出現(xiàn)如下幾個難題，致使實驗無法完成：（1）由于所插頸外靜脈入口比所用的導管口徑還要小，所以要求初學者進行“大管插細管”尤其感到困難。（2）所用的導管應插多深？（3）留置導管設備固定后很易被大鼠破壞。④最關鍵的是留置管固定后：若方法不當，所固定的管和彈簧極易被大鼠咬斷或破壞。即使“插管留置術”固定方法得當，若加藥方法不當也可能出現(xiàn)：術后幾個小時或超過24h，插入的導管往往只能成為加藥的通道，而不能成為抽血的通道，致使檢驗所需血樣本不易獲得。

以上5點：只要有一點出現(xiàn)問題，就意味著實驗無法進行。本文通過深入探討這個實驗，希望能為“大鼠心臟插管留置術”摸索出一套可行的具體方法，增加其成功率!

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 實驗動物：無特定病原體（SPF）級雄性SD大鼠20只，體重250～300g，由廣東省醫(yī)學實驗動物中心提供，動物合格證號0037291、0038975。

1.1.2 實驗器材：一次性使用連續(xù)硬膜外麻醉導管（廣州藍波醫(yī)療器械設備有限公司）；消毒手術包；消毒動物血管夾；腰椎穿刺針；三通管［1］；彈簧：長40～50cm；直徑：0.42cm；彈簧的鋼絲直徑：0.05cm（廣州市越秀區(qū)新標力彈簧經管部提供）。非吸收性外科手術縫線規(guī)格：2/0（原7#），擴張強度（N）≤14.10。

1.1.3 實驗藥品：2％戊巴比妥鈉（40mg/kg）；肝素液125U/mL。

1.2 方法

1.2.1 插管操作方法：20只大鼠全部進行心臟導管插入操作，心臟導管插入管完成后分成2組（導管穿彈簧正內孔組和導管穿彈簧側邊入內孔組）。

操作過程如下：2％戊巴比妥鈉（40mg/kg）腹腔注射麻醉，仰臥固定，常規(guī)備皮消毒，無菌條件下分離并暴露右頸外靜脈約1cm長，用手術縫線結扎頸外靜脈遠心端，盡量結扎最遠端，以便有更長的頸外靜脈暴露，便于操作。然后用手稍按心臟位，使心臟血返流到所結扎的血管，反復按心臟幾次，返流血最充盈時用動脈夾夾住頸外靜脈近心端。血管充盈后靜置約5～8min，再用眼科剪剪一V型小口，迅速把直徑約1.0mm的一次性使用連續(xù)硬膜外麻醉導管插入頸外靜脈（插入血管后，配合操作松開動脈夾）約3cm左右進入右心房（經解剖證實），用注射器抽到回血后，結扎固定導管于血管上。順導管方向，用腰椎穿刺針把導管從大鼠頸背引出，縫合消毒頸下解剖口，導管內注滿生理鹽水和抗凝劑（圖1）。

圖1 頸外靜脈Fig.1 The external jugular vein

1.2.2 插管動物的分組：將完成插管的20雄性大鼠隨機分成：導管穿彈簧正內孔組、導管穿彈簧側邊入內孔組，每組10只。導管穿彈簧正內孔：即是導管固定后由頸背部引出，從彈簧內孔中間穿入彈簧內（如圖2B所示）；導管穿彈簧側邊入內孔組：即是導管固定后由頸背部引出，導管從彈簧一端（離端約0.4處稍分離兩彈簧環(huán)形成一個“小口”）側邊“小口”進入彈簧穿行（如圖2A所示）。

1.2.3 導管穿彈簧正內孔組和導管穿彈簧側邊入內孔組操作：完成心臟導管插管手術后，為了固定導管不被大鼠咬斷或用爪拔出，通常用小彈簧把導管套住，再與三通管等相關設備連接。

導管穿彈簧正內孔組：這組動物在完成上述導管插入操作后，將從頸背引出的導管正穿入彈簧內孔，如圖2B所示。用用較粗非吸收性外科手術縫線把彈簧與體表皮膚縫合固定，使彈簧與大鼠體表近平行相貼，這樣導管穿入彈簧口處就會有一段導管外露。

導管穿彈簧側邊入內孔組：這種固定方法（如圖2A所示），在“圖2A”箭頭處形成彈簧“一長一短”兩段，用較粗非吸收性外科手術縫線（規(guī)格同上）把彈簧“一長一短”兩段緊貼體表皮膚縫合固定。這種方法固定時要把“一長一短”彈簧縫合固定住皮膚，使彈簧更多面積與體表相貼，受力面積更大，更加緊貼皮膚，而且體表彈簧接口處導管不會外露。

圖2 兩組大鼠導管與彈簧連接比較Fig.2 Comparison of the two routes of catheter insertion into the steel spring.A：Lateral insertion into the spring；B：Direct insertion into the spring.

以上兩組模型操作“導管”固定后由頸背部引出，穿過彈簧，彈簧一端固定于頸背部皮膚，另一端固定于飼養(yǎng)籠外的支架上，導管外端接注射帽等設備，術畢用125U/mL肝素液0.2mL保留沖洗導管，封管備用［2］。

2 結果

由表1可見，完成心臟導管插管手術后，導管與彈簧等設備固定時的效果：“導管穿彈簧側邊入內孔組”明顯比“導管穿彈簧正內孔組”理想，實驗期間“導管穿彈簧側邊入內孔組”設備無一遭到破壞，可順利采血與加藥。經過反復實驗證明：這套心臟插管留置術方法是高效可行的。

3 討論

在研究膿毒癥，在進行臨床前藥理（如抗菌抗內毒素、腎上腺素等）研究中，在進行藥代動力學、藥效學及疾病發(fā)生機制等多方面的研究，經常需要對動物進行多次給藥、采血等操作。這種情況，“導管大鼠模型”是最好的解決辦法。本實驗實際也屬于“導管大鼠模型”范疇，本實驗的研究目的就是探討出一套“具體可行”的制作“導管大鼠模型”方法，使更多人掌握這項技術并少走彎路。導管大鼠模型是近年國外開展應用的動物實驗模型，具有快捷穩(wěn)定、使用時間長，具有藥品用量少、動物需求量少，數據偏差小，實驗結果重復性好、節(jié)約時間等優(yōu)點。［3］

由于專門介紹如何“大鼠心臟的導管插管留置術”的文章太少，甚至查不到。所以有必要對該術式的細節(jié)進行探討。

首先，導管從頸外靜脈插入右心房，其深度約為導管自身3刻度格左右（每格1cm），即約3cm左右。由于插入導管的深度與大鼠體重有關，通常大鼠的體重在250～300g時，所插入要求的深度大約是3cm，同時這樣體重大鼠的血管相對也粗些——導管易插入，實驗操作也相對容易。當然大鼠的體重與年齡由實驗需要而定，當大鼠體重在200g以下時，血管相對小些，心臟導管插入難度加大，所插入深度也相對淺些。因而對于不同體重的大鼠，行導管插入術之前須經解剖實驗確定插入的深度。

其次，插入導管前必須充盈靜脈血管約5～8min（操作方法即文章的前面的“插管操作方法”）。這是由于頸外靜脈血管相對小而導管大，導管很難插入。實驗證明這種短時充盈血管的方法可使導管較易插入右心房，而且值得注意的是：用眼科剪剪開頸外靜脈血插入口時，一定要迅速把導管插入血管，否則血管會很快收縮，導管難以插入。

再次，兩組大鼠導管固定方法的優(yōu)缺點比較：

導管穿彈簧正內孔組：這種彈簧固定法（如圖2B所示），彈簧與大鼠緊貼體表固定時，受力面不夠大，且接口處導管有一小段外露，固定程度遠沒有“一長一短”縫合固定好。有些人處理彈簧與導管連接時，通常還有兩種情況：1）彈簧與大鼠體表有個較大的夾角，受力點集中在一點上，嚴重影響大鼠的自由活動，同時固定不良，極易被大鼠破壞；2）只用彈簧簡單套住導管無縫線固定，則彈簧極易隨著大鼠活動而移位，導管外露，從而易被大鼠抓壞或咬壞。這三種情況：設備極易受到大鼠咬壞或用爪抓壞（咬斷導管或把導管拔出）；或彈簧接觸點受力不均，影響大鼠活動等，可至實驗無法進行下去。

表1 兩組大鼠導管固定時不同方法比較Tab.1 Comparison between the two groups of rats with different methods of catheter fixation

導管穿彈簧側邊入內孔組操作：這種方法（如圖2A）可使彈簧緊貼體表，導管不外露，導管進入彈簧接口處使彈簧形成的“一長一短”兩端與體表皮膚縫合固定非常牢固，彈簧導管設備不容易被大鼠破壞。經過多次實驗，設備未曾被大鼠咬壞或抓壞。由于彈簧緊貼大鼠體表，受力面積大且較均勻，最大程度減少大鼠對彈簧等設備在體表連接的不適，所以大鼠自由活動性好。

最后，當留置導管多次采血時，在每次抽完血后，必須用生理鹽水抗凝劑配液沖洗導管，否則就會出現(xiàn)采血不暢的現(xiàn)象。這是由于每次抽完血后，導管內必留有血液，若無進行生理鹽水抗凝劑配液沖洗導管，導管內血液極易出現(xiàn)凝固，賭塞導管通道。

綜上所述：本實驗提倡的“導管穿彈簧側邊入內孔組”，操作起來每一步思路及注意事項都非常清楚，常人很快就會操作，具有成功率高等優(yōu)點。但本實驗在導管插入心臟前的準備工作所需時間還有待縮短。

［1］楊文敏，曾其毅.腎上腺素對內毒素致大鼠炎癥性肝損害的保護作用［J］.中國循證兒科雜志2007，12（04）：276-281.

［2］王寧，鄭江，郭毅斌，等.心導管留置術對大鼠臟器功能影響的實驗研究［J］.第三軍醫(yī)大學學報，2006，（14）：1473-1475.

［3］Beno DW，KimuraRE.Nonstressed rat model ofacute endotoxemia that unmasks theendotoxin-inducedTNF-alpha response［J］.Am J Physiol，1999，276（2 Pt2）：H671-H678.

［4］徐叔云.藥理學實驗方法［M］.北京：人民衛(wèi)生出版社.1991：546.