5種天然植物及其不同部位提取物抗氧化能力比較研究

謝娟平，姜雄波

5種天然植物及其不同部位提取物抗氧化能力比較研究

謝娟平，姜雄波

(安康學(xué)院化學(xué)化工系，陜西 安康 725000)

目的：以犁頭草、商陸、車前草、豆腐柴及箭葉淫羊藿5種天然植物及其不同部位提取物為研究對(duì)象，研究其抗氧化能力的差異，篩選出天然抗氧化資源及其有效部位。方法：采用甲醇超聲提取各植物的不同部位，以清除DPPH自由基法分析各提取物清除自由基作用的強(qiáng)弱，從而評(píng)價(jià)各實(shí)驗(yàn)樣品的抗氧化能力。結(jié)果：幾種天然植物及其不同部位提取物均具有清除DPPH自由基的作用，具有較強(qiáng)的抗氧化能力，其中抗氧化作用最強(qiáng)的為豆腐柴；各提取物對(duì)DPPH自由基清除能力依次為豆腐柴(葉)＞犁頭草(葉)＞車前草(葉)＞車前草(根)＞箭葉淫羊藿(地上部分)＞商陸(葉)＞商陸(根)＞犁頭草(根)。結(jié)果還表明，同種植物的葉比根的抗氧化能力強(qiáng)。結(jié)論：天然植物的抗氧化能力與不同植物品種及不同生長(zhǎng)部位密切相關(guān)，且與提取物的用量呈正相關(guān)。

犁頭草；商陸；豆腐柴；車前草；箭葉淫羊藿；抗氧化

抗氧化性物質(zhì)可以抑制氧自由基反應(yīng)的發(fā)生，保護(hù)生物大分子如蛋白質(zhì)、脂質(zhì)及DNA[1]等，防止許多疾病的發(fā)生。目前，盡管有許多人工合成抗氧化物質(zhì)，但由于安全性和潛在的毒性作用等方面的不足，合成抗氧化劑的使用受到越來越多的限制。因此，近年從天然植物中探究或?qū)ふ野踩愿叩奶烊豢寡趸镔|(zhì)，引起了許多學(xué)者的關(guān)注[1-4]。

犁頭草、商陸、箭葉淫羊藿、車前草及豆腐柴等幾種植物為秦巴山區(qū)重要的藥材資源品種，具有多方面的藥理活性。目前藥理作用研究較多集中在提取物對(duì)心血管、血液、呼吸系統(tǒng)和骨代謝等方面的作用，未見犁頭草、豆腐柴等植物不同部位提取液抗氧化活性研究

報(bào)道[5-9]。DPPH(1,1-二苯基-2-三硝基苯肼)分析法是一種篩選自由基清除劑的簡(jiǎn)便方法，其依據(jù)是自由基具有單電子而在516nm處有強(qiáng)吸收呈深紫色，當(dāng)遇到抗氧化劑時(shí)顏色變淺，用分光光度法可以對(duì)清除程度進(jìn)行定量分析。本研究以體外抗體系為模型，采用自由基分析法研究了犁頭草等植物提取物對(duì)DPPH自由基的抗氧化活性，評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)樣品的抗氧化能力，為探究、尋找安全性更高的天然抗氧化性物質(zhì)提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料、試劑與儀器

犁頭草、商陸、車前草、豆腐柴及箭葉淫羊藿由陜西省安康市藥檢所胥道寶主任藥師鑒定并提供，樣品來源見表1。

表1 樣品來源Table 1 Origins ofViola japonicaLangsd. and other samples

1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH) Sigma公司；甲醇、乙醇均為分析純；蒸餾水為二次重蒸水。

BT25S型分析天平 北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司；SP-1901型紫外分光光度計(jì) 上海色譜儀器有限公司；HS-120D型超聲波提取器 上海聲源超聲波儀器設(shè)備有限公司；DZKW-4型電熱恒溫水浴鍋 黃驊渤海電器廠；JK-2000型加液器 上海精益區(qū)學(xué)儀器廠；熱濕電恒溫干燥箱 上海陽光實(shí)驗(yàn)儀器有限公司。

1.2 方法

1.2.15 種天然植物及其不同部位提取液的制備

準(zhǔn)確稱取犁頭草(葉)、犁頭草(根)、商陸(葉)、商陸(根)、車前草(葉)、車前草(根)、豆腐柴(葉)及箭葉淫羊藿(地上部分)干燥藥材各約0.2g，由于各樣品中的主要成分為黃酮苷或皂苷，均可溶于水或者極性較大的有機(jī)溶劑，而75%的乙醇具有較強(qiáng)的破壁能力，可以有效穿透植物細(xì)胞壁，充分提取植物有效成分，因此，取上述藥材，分別加入30mL 的75%乙醇，超聲提取1h，過濾，取濾液蒸干，以30mL甲醇溶解，作為藥材供試液。

1.2.2 DPPH自由基的清除能力的測(cè)定

參照文獻(xiàn)[10-11]的方法并進(jìn)行如下操作：分別吸取不同濃度的樣品溶液置于5mL容量瓶中，各加入4mL的 0.025mg/mL DPPH甲醇溶液，以甲醇定容至5mL，同法制備空白溶液為對(duì)照。室溫下避光靜置1h后于516nm處測(cè)定吸光度。

式中： A0為體系中DPPH自由基初始濃度時(shí)的吸光度；At為t時(shí)刻溶液中DPPH自由基的吸光度。

1.2.3 半數(shù)有效濃度EC50的計(jì)算和清除能力的評(píng)價(jià)

根據(jù)各樣品清除DPPH自由基的曲線。計(jì)算得到質(zhì)量濃度減少至原始質(zhì)量濃度50%(穩(wěn)定態(tài))時(shí)所需各樣品的添加量(EC50)，根據(jù)EC50值的大小判斷抗氧化劑清除自由基的能力的大小，EC50值越小其清除自由基能力越強(qiáng)[12]。

2 結(jié)果與分析

2.1 5種植物及其不同部位提取液清除DPPH自由基的作用

實(shí)驗(yàn)測(cè)定了5種不同植物及其不同部位樣品提取液對(duì)DPPH自由基的清除作用，以樣品與DPPH質(zhì)量比與對(duì)DPPH自由基清除率作圖，比較結(jié)果見圖1。

圖1 各種提取液對(duì)DPPH自由基的清除作用Fig.1 Scavenging effect of each extract on DPPH free radicals

從圖1可以看出，5種不同植物及其不同部位提取液對(duì)DPPH自由基的清除作用有一定差異，其中犁頭草(葉)和豆腐柴(葉)清除能力較強(qiáng)，而其他幾種則較弱，隨著加入量的增加，各個(gè)樣品對(duì)DPPH自由基清除能力都有增強(qiáng)。可以看出，豆腐柴(葉)在實(shí)驗(yàn)范圍內(nèi)，隨著樣品加入量的增加，清除能力迅速增加，到達(dá)約2mg/mg時(shí)達(dá)到最大，此后不再有顯著增加；犁頭草(葉)和車前草(葉)的清除能力在樣品量分別增加到約8.0mg/mg時(shí)趨于穩(wěn)定；其他幾種樣品在實(shí)驗(yàn)范圍內(nèi)對(duì)DPPH自由基清除能力呈緩慢增加趨勢(shì)。

2.2 5種植物及其不同部位提取液EC50值及清除能力的評(píng)價(jià)

各樣品的清除率對(duì)其樣品量進(jìn)行曲線擬合，求出各種樣品的EC50值(每個(gè)樣品平行做3次，取平均值)，結(jié)果見表2。

表2 5種植物提取液對(duì)DPPH自由基的半數(shù)有效濃度EC50Table 2 EC50of extracts from these plants on DPPH free radicals

由圖1和表2可以看出，在DPPH自由基的反應(yīng)體系中，各種植物樣品(葉)提取液對(duì)自由基的清除能力差異較大，其清除能力依次為豆腐柴、犁頭草、車前草、箭葉淫羊藿和商陸，其中豆腐柴的抗氧化能力幾乎為商陸葉的16倍；同一植物不同部位提取液對(duì)自由基的清除能力也有較大差異，其中差異最大的為犁頭草，其次為車前草和商陸，其中犁頭草葉提取液的EC50值僅為犁頭草根提取液的1/10，表明犁頭草葉提取液的抗氧化能力幾乎為犁頭草根提取液的10倍。

3 討 論

綜上所述，本實(shí)驗(yàn)所研究的犁頭草等5種植物提取液都具有較強(qiáng)的清除DPPH自由基的能力，其中抗氧化作用最強(qiáng)的為豆腐柴；各提取物對(duì)DPPH自由基清除能力依次為豆腐柴(葉)＞犁頭草(葉)＞車前草(葉)＞車前草(根)＞箭葉淫羊藿(地上部分)＞商陸(葉)＞商陸(根)＞犁頭草(根)；隨著提取液質(zhì)量濃度的增大，抗氧化能力逐漸增強(qiáng)。結(jié)果還表明，同種植物的葉比根的抗氧化性能力強(qiáng)。幾種植物提取液在DPPH自由基清除率方面表現(xiàn)出的差異與不同植物品種及不同生長(zhǎng)部位密切相關(guān)，且與提取物的用量呈正相關(guān)。

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Antioxidant Effects of Extract from Different Parts of Five Natural Plants: A Comparative Study

XIE Juan-ping，JIANG Xiong-bo
(Department of Chemistry and Engineering, Ankang University, Ankang 725000, China)

Objective: The antioxidant activities of extracts from different parts of Viola japonica Langsd., Phytolacca acinosa Roxb, Plantagoasiatica L., Premna microphylla Turcz. and Epimedium sagittatum were determined to screen natural antioxidant resources and effective parts. Methods: Different parts of these plants were extracted with methanol under the assistance of ultrasound wave treatment. The antioxidant activities of these plants were assayed by evaluating the scavenging effects on DPPH free radicals. Results: All the extracts from these plants had significant antioxidant activity. The strongest DPPH free radical scavenger was the extract from leaves of Premna microphylla Turcz., followed by extracts from leaves of Viola japonica Langsd., leaves of Plantagoasiatica L., roots of Plantagoasiatica L., leaves of Epimedium sagittatum, leaves of Phytolacca acinosa Roxb, roots of Phytolacca acinosa Roxb, and roots of Viola japonica Langsd.. Conclusion: There is a close relationship between antioxidant activity and the type and part of these plants and the extracts from different parts of these plants shows an antioxidant effect positively dependent on dose.

Viola japonica Langsd.；Phytolacca acinosa Roxb；Premna microphylla Turcz.；Plantagoasiatica L.；Epimedium sagittatum；antioxidation

R284.1

A

1002-6630(2010)21-0173-03

2010-03-20

陜西省教育廳科學(xué)研究計(jì)劃項(xiàng)目(09JK319)；安康學(xué)院科研資助項(xiàng)目(2007AKXY029；AYQDZR200801)

謝娟平(1972—)，女，副教授，碩士，研究方向?yàn)樘烊划a(chǎn)物分離分析與開發(fā)。E-mail：xjp_731205@163.com