完燕華 戰(zhàn)春燕 王曉靜 陳慶勇 毛寶鳳

精神分裂癥患者富馬酸喹硫平血藥濃度的相關(guān)性研究

完燕華 戰(zhàn)春燕 王曉靜 陳慶勇 毛寶鳳

目的 建立一種簡便、快速、靈敏的反相高效液相色譜(RP-HPLC)法測定精神分裂癥患者血漿富馬酸喹硫平藥物濃度，探討其血藥濃度與患者年齡、性別的相關(guān)性。方法 選用C18色譜柱，檢測波長254nm，流動相為乙腈-水－甲醇(40.5:39.5:20),流速：1.0mL/min，測定113例單一服用富馬酸喹硫平精神分裂癥患者的血藥濃度。結(jié)果 富馬酸喹硫平日內(nèi)和日間RSD分別＜4.87%和＜4.85%,平均回收率(97.92%),最低有效檢測濃度為0.5ng/mL，喹硫平在10～800ng/mL內(nèi)有良好線性關(guān)系，日劑量在600～800mg內(nèi)血藥濃度與服藥患者年齡、性別無顯著相關(guān)性。結(jié)論 本法操作簡便、準(zhǔn)確、專一性強(qiáng)，具有一定實用價值，可用于富馬酸喹硫平血藥濃度監(jiān)測和藥動學(xué)研究。

高效液相色譜；富馬酸喹硫平

富馬酸喹硫平(Quetiapine Fumarate Tablets;商品名：啟維、思瑞康)是一種新的非經(jīng)典抗精神疾病藥物，結(jié)構(gòu)與氯氮平相似，對多種神經(jīng)遞質(zhì)受體有相互作用。大量臨床研究表明該藥是一種有效且安全的抗精神病藥[1]，主要作用于5-HT2、D1、D2及D4受體，對治療精神分裂癥的陽性和陰性癥狀均有效，同時具有改善認(rèn)知功能、錐體外系不良反應(yīng)發(fā)生率等優(yōu)點[2-3]。有關(guān)其劑量、血藥濃度測定及藥動力學(xué)研究國外已有報道[4-5]，國內(nèi)相關(guān)報道極少。因此為適應(yīng)臨床血藥濃度的監(jiān)測和藥動力學(xué)工作的需要，本研究采用反相高效液相法(RP-HPLC)測定血漿中的富馬酸喹硫平濃度，為臨床合理用藥提供參考依據(jù)。

1 儀器與試劑

1.1 儀器 高效液相色譜儀(北京科瑞海)、UV3000可變波長紫外分光檢測器(北京創(chuàng)新通恒科技有限公司)、7725i六通進(jìn)樣器、色譜工作站(北京創(chuàng)新通恒科技有限公司)、離心機(jī)、超聲波發(fā)聲器、DG55高效液相色譜系統(tǒng)在線脫氣機(jī)(天津奧特賽恩斯儀器有限公司)，恒溫箱(天津旗美)、旋渦混合器,微量進(jìn)樣器25uL。

1.2 試劑 色譜用甲醇、乙腈(天津科密歐)、水為凈化的超純水、富馬酸喹硫平對照品(中國藥品生物制品鑒定所，批號0501，純度99.6%)，其它試劑為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱(250mm×4.6mm,5μm,迪馬公司 )檢測波長254nm，流動相為乙腈-水-甲醇，以冰乙酸調(diào)pH值至6.0，用前經(jīng)0.45μm微孔濾膜過濾并超聲波脫氣，流速1mL.min-1，恒溫35℃，進(jìn)樣量15μL. 富馬酸喹硫平保留時間為11.504min,樣品測定不受干擾(見圖1)。

2.2 對照品溶液配制 精密稱取富馬酸喹硫平對照品50mg置100mL容量瓶中，加甲醇至刻度搖勻，作為儲備液，濃度500μg/mL,在將對照品儲備液分別加甲醇稀釋至100、50、20、10、5、2.5和1μg/mL作為系列工作液，對照品儲備液和工作液均密閉避光冷藏備用。

2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線制備 取空白血漿0.9mL分別加入富馬酸喹硫平不同濃度的對照工作液適量，使血漿中富馬酸喹硫平濃度分別為10、50、100、400、800ng/mL,然后加2mol/L NaOH100μL堿化混勻，加乙醚3mL，渦旋混合4min,然后3000r/min離心10min，準(zhǔn)確吸取乙醚層移入另一離心管中，于50～60℃水浴中氮氣流下吹干，殘留物以甲醇80μL充分復(fù)溶混勻，高速離心后取15μL進(jìn)樣分析，得回歸方程為Y=198.3X+30.2(r=0.9965),結(jié)果顯示：喹硫平在10～800ng/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，最低檢測濃度為5ng/mL。

2.4 精密度和方法回收率 配制含喹硫平高、中、低3種不同濃度的血漿樣本各5份，按2.3節(jié)的操作方法處理，分別做日內(nèi)及日間試驗，計算日內(nèi)及日間的精密度和方法回收率，見表1。

2.5 干擾試驗 為了確保血樣測定的可靠性,對臨床上常用的精神藥物分別配制50和200ng/mL的溶液,上述色譜條件下進(jìn)樣15μL,進(jìn)行色譜分析:氯氮平(保留時間12.966min),利培酮(保留時間8.506min),奮乃靜(保留時間13.546min),對喹硫平均無明顯干擾.

2.6 患者血藥濃度檢測

2.6.1 診斷標(biāo)準(zhǔn) 本實驗室自2008年3月份建立本方法以來,其檢測喹硫平血藥濃度樣本113例,樣本患者均符合中國精神疾病分類方案和診斷標(biāo)準(zhǔn)第三版(CCMD-3)[6]的精神分裂癥診斷標(biāo)準(zhǔn)。其中男性患者69例,平均年齡(38±15)歲,女性患者44例,平均年齡(27±12)歲,病程(10±6)月。血、尿常規(guī)、肝腎功能等實驗室檢查正常，無嚴(yán)重器質(zhì)性疾病。

2.6.2 服藥劑量 一次300～400mg,2次/d，服藥期均未服用其它抗精神分裂癥藥物。

2.6.3 取血時間 于服藥后次日清晨時取靜脈血5.0mL,分離血漿，按2.3節(jié)方法處理樣本并進(jìn)行測定。

2.6.4 富馬酸喹硫平血藥濃度與患者年齡、性別的關(guān)系 本研究共測定113例患者的富馬酸喹硫平血藥濃度，其中男69例，女44例，患者年齡在14～65歲之間，將其年齡分為2個年齡組：A組14～35歲；B組35～65歲，測定結(jié)果進(jìn)行數(shù)據(jù)分析和統(tǒng)計學(xué)處理(采用SPSS12.0軟件包進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析)，計量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示，組間比采用t檢驗。經(jīng)統(tǒng)計處理血藥濃度與患者年齡無明顯統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)患者性別對富馬酸喹硫平血藥濃度有一定影響，相同劑量不同性別患者的血藥濃度存在一定差異，男性略低于女性，但無明顯統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)，見表2。

2.7 靈敏度 當(dāng)信噪比≥2(S/N≥2)時，富馬酸喹硫平的最低檢出量為5ng/mL,可滿足監(jiān)測要求。

圖1 富馬酸喹硫平色譜結(jié)果

表1 精密度和回收率(n=5,±s)

表1 精密度和回收率(n=5,±s)

樣品濃度 RSD/%ng/mL 測定濃度 日內(nèi) 日間 回收率%50 50.17±0.69 3.42 3.7 99.01 200 198.32±4.87 4.87 4.5 98.23 800 796.84±3.67 3.71 3.5 96.52

表2 113例患者喹硫平血藥濃度測定結(jié)果統(tǒng)計(±s)

表2 113例患者喹硫平血藥濃度測定結(jié)果統(tǒng)計(±s)

組別 病例數(shù) 測定值 P值A(chǔ) 40 179.2±40.8 B 73 186.5±36.5 P＞0.05男性 69 191.6±27.9女性 44 223.6±30.1 P＞0.05

3 討論

(1)實驗室中，以甲醇為空白，對富馬酸喹硫平對照液進(jìn)行最大吸收波長選擇，波長范圍190～400nm，硫平在225nm處有強(qiáng)吸收峰，在254nm處有次強(qiáng)吸收峰，由于225nm處存在末端吸收，易受其它雜質(zhì)光干擾，測定結(jié)果不穩(wěn)定，為減少溶劑的干擾，故選擇254nm作為喹硫平的檢測波長。試驗結(jié)果證實在波長254nm處靈敏度可完全滿足實際工作需求，結(jié)果穩(wěn)定可靠。

(2)以甲醇-水-乙腈作為流動相，通過對流動相中各成份不同配比考察發(fā)現(xiàn)，為使樣品保留時間縮短，峰形不拖尾，提高分離效果，應(yīng)適當(dāng)增加流動相中乙腈的含量，并適量加入正丁胺和冰乙酸調(diào)節(jié)pH值。

(3)堿化條件 實驗結(jié)果顯示將含有被測藥物的血漿加2mol/LNaOH100μL堿化，然后藥物被提入乙醚，以除去可能的內(nèi)源性干擾物，經(jīng)氮氣吹干后用甲醇復(fù)溶，可顯著提高樣品的萃取回收率，可減少背景反差帶來的雜峰干擾。而且復(fù)溶后所含雜質(zhì)較少不影響測定。

(4)精密度日間實驗發(fā)現(xiàn)各批次樣本保留時間稍有差異，但均在保留時間的±1.1%以內(nèi)，RSD均在允許范圍5%以內(nèi)[7]，此漂移可能由于流動相組分恒溫及啟動分析時間等的輕微變化所致。

(5)喹硫平口服吸收良好，食物不影響吸收，半衰期6h，達(dá)穩(wěn)態(tài)血藥濃度為48h。喹硫平于肝臟被細(xì)胞色素P450系統(tǒng)代謝，主要代謝產(chǎn)物為硫氧化物和Q去甲基、N-去烷基代謝物，但均無藥理活性，抗精神分裂癥療效僅與原形藥物有關(guān)，測定喹硫平血藥濃度即可[8]，本研究測定患者喹硫平的血藥濃度與性別、年齡無明顯相關(guān)性,這與傅崇銘等[9]的研究結(jié)果基本一致。

(6)本方法采用RP-HPLC法測定血漿中富馬酸喹硫平藥物濃度，所用試劑均為國產(chǎn)品，操作較為簡便，靈敏度高準(zhǔn)確性好，分析周期短方法實用可滿足臨床進(jìn)行治療藥物監(jiān)測(TDM)和藥效學(xué)研究的要求。

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10.3969/j.issn.1009-4393.2010.20.068

050800 解放軍白求恩國際和平醫(yī)院256臨床部檢驗科 (完燕華 戰(zhàn)春燕 王曉靜 陳慶勇 毛寶鳳)