白音，楊磊，郭濤，夏東亞，趙東祥，李強，項勇（1.內(nèi)蒙古赤峰學院醫(yī)學院，赤峰市0000；.沈陽軍區(qū)總醫(yī)院藥劑科，沈陽市 110016；3.沈陽藥科大學藥學院，沈陽市 110016；.解放軍第313醫(yī)院赤峰臨床部，赤峰市 0000）

酒石酸唑吡坦是一種新型鎮(zhèn)靜催眠藥，是γ-氨基丁酸A型（GABAA）-苯二氮類受體激動藥，選擇性作用于大腦的ω1苯二氮受體亞型而達到鎮(zhèn)靜催眠作用。臨床用于治療失眠，以及用作手術前用藥。酒石酸唑吡坦在健康受試者體內(nèi)的藥動學在國內(nèi)、外已有文獻報道，但是未見文獻報道酒石酸唑吡坦在蒙古族人體內(nèi)的藥動學的研究文獻。我國是一個多民族的國家，各民族間遺傳背景、生活環(huán)境、飲食習慣等存在的差異，可能影響藥物的體內(nèi)過程，可能出現(xiàn)藥物效應的民族差異。本文首次通過研究蒙古族、漢族兩民族單劑量口服酒石酸唑吡坦后的藥動學，比較兩者之間的差異，為臨床合理用藥提供理論依據(jù)。

1 材料

1.1 儀器

高效液相色譜儀，包括600型四元泵、717自動進樣器、2475熒光檢測器、Empower色譜工作站（美國Waters公司）。

1.2 試藥

酒石酸唑吡坦片（法國賽諾菲安萬特公司，規(guī)格：每片10 mg，批號：7T028）；酒石酸唑吡坦對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號：100367-200501）；內(nèi)標：鹽酸阿夫唑嗪對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號：100728-200501）；乙腈為色譜純，其余試劑為分析純。

2 方法

2.1 色譜條件

色譜柱：Diamonsil C18柱（200 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相：乙腈-0.02 mol·L－1磷酸二氫鈉緩沖液（用磷酸調pH值至3.5）（25∶75）；流速：1.0 mL·min－1；激發(fā)波長：254 nm；發(fā)射波長：390 nm；柱溫：室溫；進樣量：20 μL。

2.2 受試者的選擇

漢族健康志愿者10名，男、女各5名，年齡（22.0±0.9）歲，體質量（55.0±4.9）kg，身高（164±5）cm，體質量指數(shù)（BMI）（20.4±1.2）kg·m－2。蒙古族健康志愿者10名，男、女各5名，年齡（20.8±1.3）歲，體質量（57.8±5.0）kg，身高（168±6）cm，BMI（20.4±1.3）kg·m－2。所有受試者試驗前進行體檢、心電圖、血常規(guī)和肝腎功能檢查均正常后才可入選參加試驗，且試驗前15 d未服用其它藥物。其父母、祖父母、外祖父母3代均為同一民族婚配。該試驗方案經(jīng)過沈陽軍區(qū)總醫(yī)院醫(yī)學倫理委員會批準通過。受試者均為自愿參加且在試驗前簽署知情同意書。

2.3 給藥方案與血樣采集

健康志愿者用藥前禁食1夜，于次日早晨空腹單劑量服用酒石酸唑吡坦片1片（相當于唑吡坦10 mg）后，2 h后方可飲水，4、9 h統(tǒng)一進標準餐。受試者于服藥前0 h及服藥后0.25、0.5、0.75、1、1.5、2、3、4、6、9、12 h時采前臂靜脈血4 mL。離心分離血漿，于－25℃冷凍保存至測定。在整個試驗過程中對不良反應進行監(jiān)測和記錄。

2.4 血漿樣品處理

取血漿0.5 mL，分別加入甲醇100 μL、內(nèi)標溶液（50 μg·L－1鹽酸阿夫唑嗪甲醇溶液）50 μL、4.0 mol·L－1氫氧化鈉溶液50 μL，渦旋混合1 min。加無水乙醚5 mL，渦旋混合3 min，3 000 r·min－1離心10 min，分取上層有機相于另一試管中，于37℃氮氣流下吹干，殘留物加入流動相100 μL溶解，取20 μL進樣分析。

2.5 數(shù)據(jù)處理

用孫瑞元編制的DAS Ver 2.0藥動學軟件，根據(jù)擬合度值選擇房室模型和權重，并計算藥動學參數(shù)。蒙、漢兩民族受試者藥動學參數(shù)比較采用t檢驗進行比較。

3 結果

3.1 方法學驗證

3.1.1 專屬性考察：空白血漿、空白血漿+酒石酸唑吡坦對照品+內(nèi)標，蒙、漢兩民族受試者服藥后的血漿樣品色譜圖見圖1。

圖1 高效液相色譜圖Fig 1 HPLC chromatograms

由圖1可知，酒石酸唑吡坦與內(nèi)標分離良好，酒石酸唑吡坦與內(nèi)標的峰形好，保留時間分別為9.3、5.3 min，血漿中的內(nèi)源性雜質對測定無干擾。

3.1.2 標準曲線的制備：取空白血漿0.5 mL，依次加入系列酒石酸唑吡坦對照品溶液100 μL，使酒石酸唑吡坦血藥濃度為2.0、5.0、10.0、25.0、50.0、100.0、250.0 μg·L－1，按“2.4”項下方法操作并進樣測定，記錄色譜。以血漿樣品中待測物濃度（X）為橫坐標，待測物與內(nèi)標的峰面積比值（Y）為縱坐標，用加權（W＝1/X2）最小二乘法進行回歸運算，求得直線回歸方程Y＝－0.022+0.041X（r＝0.999 4）。結果表明，酒石酸唑吡坦血藥濃度在2.0～250.0 μg·L－1范圍內(nèi)線性關系良好。最低檢測限為2 μg·L－1。

3.1.3 回收率與精密度試驗：取健康受試者空白血漿0.5 mL，制備成酒石酸唑吡坦血藥濃度為5.0、50.0、200.0 μg·L－1的低、中、高3種濃度的質量控制樣品，進行方法回收率及精密度試驗，結果日內(nèi)、日間精密度均小于8.8%；另以待測物的峰面積與相應濃度標準液直接進樣的峰面積的比值計算提取回收率，結果提取回收率均大于58%，滿足測試要求。精密度及回收率試驗結果見表1。

表1 精密度及回收率試驗結果（±s，n＝22）Tab 1Results of precision and recovery tes（t±s ，n＝22）

表1 精密度及回收率試驗結果（±s，n＝22）Tab 1Results of precision and recovery tes（t±s ，n＝22）

加入量/μg·L－1 5.0 50.0 200.0日內(nèi)RSD/%1.2 1.8 4.2測得量/μg·L－1 4.8 50.7 206.7方法回收率/%96.00 101.40 103.35日間RSD/%8.8 3.5 1.7提取回收率/%57.2±2.9 66.0±2.8 67.2±4.2

3.1.4 穩(wěn)定性考察：分別將血漿樣品于室溫放置4 h和8 h，于－25℃放置并凍融3次，－25℃放置1個月，以考察其穩(wěn)定性。結果，除高濃度質控樣品凍融第3次RSD為10%以外，其他各條件下各濃度樣品的RSD均＜10%，表明在上述條件下血漿樣品基本穩(wěn)定。

3.1.5 質控樣品：配制酒石酸唑吡坦血漿濃度為5.0、50.0、200.0 μg·L－1的低、中、高3種濃度的質量控制樣品，同時保存，與受試者血漿樣品隨行測定，質量控制樣品的測定結果符合要求（在±15%之內(nèi)）。

3.2 藥-時曲線

蒙古族、漢族受試者單劑量口服酒石酸唑吡坦10 mg后，在不同時間點的平均藥-時曲線見圖2。

圖2 蒙、漢兩民族受試者單劑量口服酒石酸唑吡坦10 mg后的平均藥-時曲線Fig 2 Mean plasma concentration-time curves of zolpidem tartrate in Han and Mongolian healthy volunteers after a single oral dose of 10 mg zolpidem tartrate

3.3 藥動學參數(shù)及其蒙、漢兩民族的比較

用DAS Ver 2.0藥動學軟件進行房室模型的擬合，蒙、漢兩民族均符合一室開放模型。藥動學參數(shù)見表2。兩民族間的藥動學參數(shù)經(jīng)t檢驗，結果無顯著性差異（P＞0.05）。表明酒石酸唑吡坦在兩民族人體內(nèi)的藥動學過程無顯著性差異。

3.4 安全性評價

表2 蒙、漢兩民族受試者單劑量口服酒石酸唑吡坦10 mg后的主要藥動學參數(shù)Tab 2 Pharmacokinetic parameters of zolpidem tartrate in Han and Mongolian healthy volunteers after a single dose of 10 mg zolpidem tartrate

在本試驗中，兩民族受試者單劑量口服酒石酸唑吡坦片10 mg以后，均有不同程度不良反應發(fā)生，其中，蒙古族1名受試者發(fā)生嘔吐，漢族有3名受試者主訴有惡心等胃腸道不良反應，與藥品說明書上提示的不良反應一致，這可能與首次空腹服用酒石酸唑吡坦片有關，進食后上述癥狀減輕或消失。

4 討論

研究結果表明，酒石酸唑吡坦在蒙、漢兩民族健康受試者體內(nèi)過程均符合一室開放模型，其藥動學參數(shù)與文獻報道一致，蒙古族組Cmax較漢族組Cmax稍高；AUC0～12較漢族組稍大，t1/2較漢族組稍長，但是各藥動學參數(shù)經(jīng)獨立樣本t檢驗，結果均無顯著性差異（P＞0.05）。

雖然，蒙、漢兩民族在口服單劑量酒石酸唑吡坦后，其藥動學參數(shù)在統(tǒng)計學上無顯著性差異，但是無論是漢族還是蒙古族，其各藥動學參數(shù)存在一定個體差異，這與文獻報道一致[1～3]。由于酒石酸唑吡坦的代謝受細胞色素P450（CYP）異構酶與CYPA4共同作用，CYPA4具有多態(tài)性，在蒙、漢兩民族健康志愿者中，也體現(xiàn)了這種個體差異性。本試驗方法可用于人體內(nèi)灑石酸唑吡坦的藥動學研究，其結果為酒石酸唑吡坦的個體化用藥提供了理論依據(jù)。

[1] 宋洪杰，李 珍，石 晶，等，高效液相色譜-熒光檢測法測定人血漿中酒石酸唑吡坦的濃度[J].中國藥學雜志，2001，36（5）：333.

[2] 劉治軍，殷 琦，李可欣，等，國產(chǎn)酒石酸唑吡坦的生物利用度和生物等效性研究[J].中國新藥雜志，2005，14（8）：1 036.

[3] 熊玉卿，姜 敏，戴 群.酒石酸唑吡坦在中國健康受試者體內(nèi)的生物等效性研究[J].中國藥學雜志，2001，36（11）：748.