帖青松

（江蘇省建湖縣人民醫(yī)院，江蘇建湖 224700）

環(huán)丙沙星氯化鈉注射液細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法的研究

帖青松

（江蘇省建湖縣人民醫(yī)院，江蘇建湖 224700）

目的：探討環(huán)丙沙星氯化鈉注射液應(yīng)用于細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法的可行性。方法：制定實(shí)驗(yàn)，不同靈敏度的鱟試劑對(duì)環(huán)丙沙星氯化鈉注射液進(jìn)行干擾試驗(yàn)，將細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法和熱原檢查法結(jié)果進(jìn)行比較。結(jié)果：環(huán)丙沙星氯化鈉注射液液稀釋2倍后,對(duì)細(xì)菌內(nèi)毒素檢查無(wú)干擾作用，細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法和熱原檢查法經(jīng)比較完全相符。結(jié)論：通過(guò)系列實(shí)驗(yàn)，說(shuō)明環(huán)丙沙星氯化鈉注射液細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法可替代熱原檢查法。

環(huán)丙沙星氯化鈉注射液；細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法

在制藥工業(yè)中，為進(jìn)一步擴(kuò)大細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法應(yīng)用范圍，筆者探討了環(huán)丙沙星氯化鈉注射液應(yīng)用細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法的可能性。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品（規(guī)格60 Eu/支，批號(hào)061101），中國(guó)藥品生物制品檢定所，鱟試劑（靈敏度0.25 Eu/ml，0.1 ml/支，批號(hào) 051009），鱟試劑（靈敏度 0.125 Eu/ml，0.1 ml/支，批號(hào)060303），細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水（BET 用水）（規(guī)格 10 ml，批號(hào)060202）均為廈門(mén)鱟試劑廠產(chǎn)品。環(huán)丙沙星氯化鈉注射液（按環(huán) 丙 沙 星 計(jì) 100 ml∶0.2 g， 批 號(hào) 060702、060713、060908、060921、061125、061130、061208、061216、070124、070228） 均為長(zhǎng)江藥業(yè)生產(chǎn)。電熱恒溫水浴鍋，型號(hào)H.H.S（上海醫(yī)療器械三廠），旋渦混合器,型號(hào)XW-80（上海醫(yī)科大學(xué)儀器廠），電熱恒干燥箱，型號(hào)HX.GZ-550B（連云港醫(yī)療器械設(shè)備廠），試管架，注射器，試管等。實(shí)驗(yàn)前玻璃器皿均經(jīng)250干烤90min。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 細(xì)菌內(nèi)毒素限值 細(xì)菌內(nèi)毒素限值（L）的確定根據(jù)公式L=K/M[1]。其中K為按規(guī)定的給藥途經(jīng)，人用每公斤體重每小時(shí)最大可接受的內(nèi)毒素劑量，以EU/（kg·h）表示，M 為人用每公斤體重每小時(shí)接受環(huán)丙沙星氯化鈉注射液的最大劑量，以 ml/（kg·h）表示。 注射劑 K=5 EU/（kg·h）。 參考本品臨床的用法用量可知M=400 ml/60（kg·h）。因此L=K/M=5×60/400=0.75 EU/ml。其值為理論值，考慮到本品為大輸液（100 ml/瓶）臨床多為聯(lián)合配伍用藥且經(jīng)過(guò)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，將L值定為小于0.5 EU/ml有一定的安全系數(shù)。

1.2.2 最小不干擾稀釋倍數(shù)的測(cè)定 取鱟試劑靈敏度0.125 EU/ml和細(xì)菌內(nèi)毒素國(guó)家工作標(biāo)準(zhǔn)品用BET水稀釋至0.25 EU/ml取樣品（批號(hào) 060702）用0.125 EU/ml靈敏度的鱟試劑進(jìn)行試驗(yàn)，原液、1∶2及1∶4稀釋液均無(wú)干擾，即本品最小不干擾稀釋倍數(shù)為1。

1.2.3 鱟試劑靈敏度 鱟試劑靈敏度的復(fù)核將細(xì)菌內(nèi)毒素國(guó)家工作標(biāo)準(zhǔn)品用 BET用水稀釋成2.00、1.00、0.50、0.25λ系列濃度，按細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法[1]操作，結(jié)果見(jiàn)干擾試驗(yàn)。

1.2.4 干擾試驗(yàn) 取廈門(mén)鱟試劑廠的鱟試劑和細(xì)菌內(nèi)毒素國(guó)家工作標(biāo)準(zhǔn)品，分別用BET水、2倍稀釋液稀釋細(xì)菌內(nèi)毒素至 2.00、1.00、0.50 和 0.25λ 依法操作，樣品 A（Es內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)溶液）、樣品B（Et060702稀釋的內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)溶液）、樣品C（Et060908稀釋的內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)溶液）、樣品D（Et060921稀釋的內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)溶液），按下面的公式計(jì)算[1]:Es或Et=antilg[（X1+X2+X3+X4）/4]，X1、 X2、 X3 、X4 為反應(yīng)終點(diǎn)濃度的對(duì)數(shù)值 （lg）， 結(jié)果 Es=0.25 EU/ml，Es 在 0.125～0.500 EU/ml之間，表明該鱟試劑靈敏度符合規(guī)定。 Et（060702）=0.354 EU/ml，Et（060908）=0.297 EU/ml， Et （060921）=0.354 EU/ml 均在0.5～2.0 Es 之間，即 0.125～0.500 EU/ml之間，說(shuō)明供試品在稀釋倍數(shù)為2倍時(shí)，環(huán)丙沙星氯化鈉注射液對(duì)細(xì)菌內(nèi)毒素檢查無(wú)干擾作用。

2 結(jié)果

環(huán)丙沙星氯化鈉注射液液稀釋2倍后，對(duì)細(xì)菌內(nèi)毒素檢查無(wú)干擾作用，細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法和熱原檢查法經(jīng)比較完全相符。樣品原液、1∶2及1∶4稀釋液均無(wú)干擾，臨床可以有效控制質(zhì)量和保證用藥安全。

3 討論

一種藥品能否應(yīng)用細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法，首先通過(guò)干擾試驗(yàn)，排除該藥品本身對(duì)細(xì)菌內(nèi)毒素檢查的干擾作用[2-3]。其次確定出既克服干擾因素，又符合該藥品細(xì)菌內(nèi)毒素限值的有效濃度范圍。為確證供試品在某一濃度對(duì)內(nèi)毒素和鱟試劑的凝膠反應(yīng)不存在干擾，本試驗(yàn)分別對(duì)3個(gè)批號(hào)的供試品進(jìn)行相同濃度的重復(fù)試驗(yàn)。結(jié)果在本試驗(yàn)條件下，樣品原液、1∶2及1∶4稀釋液均無(wú)干擾，表明本試驗(yàn)可以有效控制其質(zhì)量和保證臨床用藥安全有效。干擾試驗(yàn)進(jìn)一步證明樣品在1∶2稀釋液時(shí)，對(duì)細(xì)菌內(nèi)毒素檢查無(wú)干擾[4-6]。本試驗(yàn)對(duì)10批熱原檢查符合規(guī)定的環(huán)丙沙星氯化鈉注射液進(jìn)行細(xì)菌內(nèi)毒素檢查，細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法和熱原檢查法檢查相符率為100%，說(shuō)明環(huán)丙沙星氯化鈉注射液細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法可替代熱原檢查法。由于細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法具有快捷、簡(jiǎn)便、靈敏的特點(diǎn)，大大地節(jié)約了資源、時(shí)間，產(chǎn)生了良好的社會(huì)效益和經(jīng)濟(jì)效益。

[1]國(guó)家藥典委員會(huì)編.中國(guó)藥典[S].二部附錄XIE.北京:化學(xué)工業(yè)出版社,2005:85-87.

[2]禹海英,孫麗娜.乳酸環(huán)丙沙星氯化鈉注射液細(xì)菌內(nèi)毒素鱟試劑檢查法[J].中國(guó)醫(yī)藥導(dǎo)報(bào),2006,3(26):154.

[3]曾曉紅,鄧慧英.注射用鹽酸環(huán)丙沙星細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法建立及方法學(xué)研究[J].海峽藥學(xué),2009,21(12):85-86.

[4]范能全,彭蘭.細(xì)菌內(nèi)毒素的檢查及干擾因素的排除[J].中國(guó)藥師,2007,10(9):915-916.

[5]林郁,焦志鐵,沈素琴.細(xì)菌內(nèi)毒素檢查方法綜述[J].時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥,2006,17(8):1575-1576.

[6]馮正錄,陳慧玲,呂文柏.細(xì)菌內(nèi)毒素檢查異常結(jié)果分析及處理方法[J].中國(guó)藥師,2006,9(6):568-569.

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1674-4721（2010）10（a）-182-01

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