果艷鳳 王會麗 劉麗萍 韓淑英 河北省唐山市中醫(yī)醫(yī)院藥劑科(唐山 063000)

黃蒲祛毒顆粒為本院醫(yī)院制劑,處方由黃柏 60g,紫花地丁、蒲公英、苦參、馬齒莧、川椒、芒硝各 30g組成。本制劑具有清熱解毒,利濕止血之功效,用于濕熱下注引起的內痔、外痔、混合痔、肛裂、肛瘺、肛周膿腫以及肛門濕疹等。表現為便鮮血、肛門疼痛、紅腫、瘙癢、時有膿水、舌苔黃膩、脈象弦滑。

1 材料 1.1 實驗動物 雌性清潔級 SD大鼠,無孕,體重在 170～210g,3～4月齡。由河南省實驗動物中心提供,合格證號:SCXK＜豫＞2005-0001。飼料為本院實驗動物中心自制干糕。大鼠 5只 /籠 ,自由飲水和攝食。白色豚鼠,雌性(無孕),體重 240～300g,由河南省實驗動物中心提供,合格證號:SCXK＜豫＞ 2005-0001。健康白色雌性家兔,體重 1.90± 0.15kg。實驗溫度為 21±2℃,濕度 65± 5%,采光 12h/d,排風扇通風,4次 /d,每次至少 30min,環(huán)境安靜無噪音。

1.2 藥物和試劑硫化鈉(天津市北方天醫(yī)化學試劑廠,批號:200061138),2,4二硝基氯苯 (上海試劑一廠提供,批號 99-07-01,用 70%乙醇將其配成 1%的致敏濃度和 0.1%激發(fā)濃度)。藥物黃棕色至黑棕色顆粒(用藥量為 0.25g/kg)。

2 方法 2.1 急性毒性試驗 選擇健康雌性 SD大鼠 64只,適應環(huán)境 5d后,于實驗前 24h用 8%硫化鈉脫掉大鼠背部脊柱兩側毛約 8cm×4cm2,其中 32只大鼠保持皮膚完整不受損,隨即分成 4組,每組 8只,即對照組 (蒸餾水),黃蒲祛毒顆粒高劑量組(將黃蒲祛毒顆粒用蒸餾水配制成 125g/100mL溶液,按 40mL/kg均勻涂抹于脫毛處,每次 10mL/kg,1h1次,共 4次給完),給藥量為 50g/kg,相當人用量的 200倍(按60kg)。黃蒲祛毒顆粒中劑量組(將黃蒲祛毒顆粒用蒸餾水配制成 62.5g/100mL溶液,按 40 mL/kg均勻涂抹于脫毛處,每次10 mL/kg,1h 1次,共 4次給完)給藥量為 25g/kg,相當人用量的 100倍(按 60kg)。黃蒲祛毒顆粒低劑量組(將黃蒲祛毒顆粒用蒸餾水配制成 31.25g/100mL溶液,按 40mL/kg均勻涂抹于脫毛處,每次 10mL/kg,1h1次,共 4次給完。),給藥量為12.5g/kg,相當人用量的 50倍 (按 60kg)。另 32只大鼠實驗時用 16號針頭,在脫毛且消毒的皮膚上劃“井”字,以皮膚滲血為度,其分組與給藥劑量同完整皮膚急性毒性試驗。涂抹藥物后每日觀察并紀錄大鼠的體重、精神狀態(tài)、四肢活動、皮膚、毛發(fā)、眼睛、黏膜、呼吸的變化,有無發(fā)抖、震顫、流涎、腹瀉、嗜睡、昏迷等全身中毒表現和死亡情況。

2.2 皮膚刺激性試驗 2.2.1 方法:選擇健康白色家兔 16只,雌雄兼有 ,體重 1.90±0.15kg,適應環(huán)境 5d.于給藥前 24h在兔背部脊柱兩側用 8%硫化鈉脫毛 (每側約 50cm2,無紅斑、水腫及破損)。 16只家兔隨機分成 4組,每組 4只,設單次涂抹完整皮膚組、單次涂抹破損皮膚組、多次涂抹完整皮膚組和多次涂抹破損皮膚組。均涂抹給藥(破損皮膚組,每只家兔背部脊柱兩側去毛區(qū)在涂藥前用針頭在涂約部位皮膚劃“井”字以滲血為度),左側為受試區(qū),右側為對照區(qū)。分別于給藥區(qū)涂抹75%黃蒲祛毒顆粒溶液 0.2mL/cm2;對照區(qū)涂以等量的蒸餾水,用一層玻璃紙覆蓋保濕 ,再加紗布覆蓋保護,再用膠布適當固定。單次涂抹組:涂抹后 24h,用溫水洗去殘留的受試藥;多次涂抹組:2次 /d,連續(xù) 7d,末次涂抹后 24h,用溫水洗去殘留的受試藥。去除受試物后 1h、24h、48h、72h觀察涂抹部位有無紅斑和水腫等情況,以及上述變化的恢復情況和時間。

2.2.2 結果判定及評價:每只動物皮膚刺激反應評分按下表進行刺激反應評分,計算出平均分值。皮膚刺激強度評價按無刺激性 (＜0.5,輕度刺激性 (＜2.0中度刺激性(＜6.0),強刺激性(＞ 6.0)進行。

表1 皮膚刺激反應評分標準

表2 皮膚刺激強度評價標準

2.3 皮膚過敏試驗 2.3.1 方法:取健康白色雌性豚鼠,于試驗前 24h,采用 8%硫化鈉脫毛劑,將全部受試豚鼠背部脊柱兩側去毛(每側約 4cm×4cm2,無紅斑、水腫及破損)。24只豚鼠按體重隨機分成 3組,每組 8只,分別是受試藥組(黃蒲祛毒顆粒)、空白對照組(蒸餾水)、陽性對照組(2,4二硝基氯代苯)。將 75%黃蒲祛毒顆粒溶液 0.5mL涂在左側脫毛區(qū),6h后用溫水擦去殘留受試藥,第 7d和 14d以同樣方法重復?？瞻讓φ战M涂蒸餾水 0.5mL,陽性對照組涂以 1%的 2,4二硝基氯苯 0.5mL。于末次涂藥后 14d時在動物右側脫毛區(qū)涂藥 0.5mL,6h后去除受試物,立即觀察,并于 24h、48h和 72h重復觀察豚鼠脫毛區(qū)皮膚涂抹部位有無紅斑和水腫等過敏反應情況?？瞻讓φ战M與陽性物對照組方法均同受試藥物組。

2.3.2 結果判定及評價:實驗結果按衛(wèi)生部藥政管理局發(fā)布的《中藥新藥研究指南》皮膚過敏反應程度的評分標準評分,并計算平均分值。每只動物皮膚過敏反應程度的評分標準:無紅斑為 0分;勉強可見為 1分;中度紅斑為 2分;嚴重紅斑為 3分;紫紅色紅斑為 4分。無水腫為 0分;勉強可見為 1分;可見為 2分;皮膚隆起約 1mm,輪廓清楚為 3分;水腫隆起 1mm以上并范圍擴大為 4分。進行過敏反應評分,計算出平均分值。致敏率分類按弱致敏性 (0～10%),輕度致敏性(20%～30%),中度致敏性(40%～60%),高度致敏性(70%～80%),極度致敏性(90%～100%)進行。根據致敏率類別進評價。

3 結果 3.1 急性毒性試驗結果涂抹黃蒲祛毒顆粒后,大鼠未見異常反應,飲食,體重 ,大小便和活動均正常;完整皮膚急性毒性試驗組大鼠皮膚無紅斑,無水腫,無死亡;破損皮膚急性毒性試驗組大鼠皮膚劃痕處可見紅腫,結痂,劃痕周圍皮膚無紅腫,無死亡,與對照組比較無差別。

3.2 皮膚刺激性試驗結果一次給藥或多次給藥結束后,對照區(qū)與受試區(qū)比較觀察,皮膚刺激反應強度均 ＜0.5分,多次給藥期間也未觀察到皮膚有紅斑、水腫等刺激反應,涂藥部位無色素沉著,無出血點,無皮膚粗糙及皮膚菲薄等現象。結果表明:黃蒲祛毒顆粒一次給藥或多次給藥對兔完整皮膚和破損皮膚均無刺激性。

3.3 皮膚過敏試驗結果 受試組和空白組各 8只豚鼠皮膚未出現紅斑和水腫,均為 0分;陽性對照組 8只豚鼠中 1只出現重度紅斑 3× 1分,4只出現中度紅斑 2× 4分,1只可見輕度紅斑為 1×1分,2只豚鼠出現水腫并紅斑為 4×2分 ,陽性藥反應總積分 20分,平均為 2.5分。陽性致敏物 2,4二硝基氯苯動物皮膚受試區(qū)自激發(fā)給藥 1h后出現紅斑,6h最明顯,24h逐漸消退,72h后紅斑仍可勉強看見,致敏達 100%。受試藥物黃蒲祛毒顆粒組豚鼠皮膚受試區(qū)自激發(fā)給藥后 72h內未出現紅斑及水腫形成,與空白對照組比較無差別。

4 討 論 黃蒲祛毒顆粒由黃柏、紫花地丁、蒲公英、苦參、馬齒莧、川椒、芒硝組成。黃柏清熱解毒利濕,尤以下焦為甚者,為君藥。紫花地丁、蒲公英 、苦參 、馬齒莧清熱解毒、止血止癢為臣藥,佐以川椒止痛,芒硝軟堅散結。全方共奏清熱解毒,利濕止血之功,治療濕熱下注引起的內痔、外痔、混合痔、肛裂、肛門濕疹等。通過對黃蒲祛毒顆粒試驗研究表明:黃蒲祛毒顆粒對大鼠完整,破損皮膚均無急性毒性反應。對白兔完整,破損皮膚無刺激性。對豚鼠皮膚不產生致敏作用,說明黃蒲祛毒顆粒是安全的局部外用藥。適合于臨床使用。

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