高振中，降升平

(天津科技大學(xué)現(xiàn)代分析技術(shù)研究中心，天津 300457)

我國不同地區(qū)蜂膠乙醇提取物化學(xué)成分的分析

高振中，降升平

(天津科技大學(xué)現(xiàn)代分析技術(shù)研究中心，天津 300457)

采用氣質(zhì)聯(lián)用儀對(duì)我國安徽、河南、江蘇、山東、山西、四川、新疆7省區(qū)蜂膠中的主要成分進(jìn)行分離鑒定，分離鑒定出黃酮、酚、醌、萜、甾類等14類79種物質(zhì)．其中黃酮、酚、醌、萜類物質(zhì)含量較高．實(shí)驗(yàn)表明，不同產(chǎn)地蜂膠中揮發(fā)性物質(zhì)的種類基本相似，但各種單一成分的相對(duì)含量存在較大差異；不同地區(qū)的蜂膠具有代表性的組分，可通過GCMS方法檢測不同蜂膠中的揮發(fā)物相對(duì)含量和不同地區(qū)蜂膠的特征代表物來鑒別蜂膠的產(chǎn)地．

蜂膠；黃酮；化學(xué)成分；氣質(zhì)聯(lián)用

蜂膠(propolis)是蜜蜂從植物幼芽與樹干上采集的樹膠與其上顎腺分泌物和蜂蠟等混合加工而成的一種具有芳香氣味的膠狀固體物[1]．蜂膠成分復(fù)雜，已知成分包括多酚類(黃酮、酚酸及其酯類)、萜類、甾類、氨基酸及揮發(fā)性物質(zhì)，這些物質(zhì)具有抗細(xì)菌、抗病毒、抗炎、抗癌、清除自由基等功效，吳平谷等[2]用不同有機(jī)溶劑對(duì)蜂膠進(jìn)行分離，得到蜂膠的香氣(揮發(fā)油)成分主要是醇、醛、酮及少量酚，這些物質(zhì)具有止咳、平喘、鎮(zhèn)痛等效果．本文通過GC-MS方法對(duì)我國7個(gè)不同產(chǎn)地的蜂膠進(jìn)行了揮發(fā)性成分初探，為蜂膠真?zhèn)舞b別提供科學(xué)依據(jù)．

中國幅員遼闊，植被資源和氣候條件差異很大，從而導(dǎo)致不同產(chǎn)地蜂膠的化學(xué)成分差異顯著[3–5]．而蜂膠中的黃酮類化合物存在苯環(huán)、羰基等強(qiáng)紫外吸收的化學(xué)結(jié)構(gòu)，用高效液相色譜和紫外檢測器可對(duì)蜂膠中的黃酮類化合物進(jìn)行測定[6]．而液質(zhì)聯(lián)用集分析鑒定于一體，HPLC對(duì)黃酮類化合物進(jìn)行分離后，質(zhì)譜儀即對(duì)分離出的物質(zhì)進(jìn)行鑒定，是一種高效的分離鑒定方法．但由于產(chǎn)地不同而造成的化學(xué)成分差異較大，很難歸納出一個(gè)統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn)．

本文借助GC-MS強(qiáng)大的譜庫資源，采用GC-MS技術(shù)對(duì)蜂膠中揮發(fā)性物質(zhì)進(jìn)行分離鑒定[7]，利用蜂膠中的揮發(fā)組分與產(chǎn)地的相應(yīng)關(guān)系，探討了一種鑒別蜂膠產(chǎn)地的方法．為研究不同產(chǎn)地蜂膠的保健作用提供新的技術(shù)手段．

1 材料與方法

1.1 材料

安徽桐城、河南許昌、江蘇溧陽、山東無棣、山西運(yùn)城、四川成都、新疆天山7種不同產(chǎn)地的蜂膠；乙醇，分析純；正己烷，色譜純．

3800GC–4000MS型氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀，美國Varian公司．

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 樣品處理

取安徽、河南、江蘇、山東、山西、四川、新疆7省區(qū)粗蜂膠樣品各10,g，分別加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)95%的乙醇50,mL，充分?jǐn)嚢杈鶆蚝笤诔暡ㄖ刑崛?0,min，然后離心分離除去固體物質(zhì)．將分離出的液體通過旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀蒸出溶劑，得到純品蜂膠．取此純品蜂膠0.1,g，用10,mL正己烷溶解，搖勻后取1,μL液體進(jìn)行GC-MS分析．

1.2.2 色譜條件

VF–5ht毛細(xì)管柱，30,m×0.25,mm×0.10,μm；初始柱溫60,℃(保持2,min)，以8,℃/min升至300,℃(保持3,min)；分流比20∶1；進(jìn)樣量1,μL；載氣為氦氣，載氣流量1,mL/min；進(jìn)樣口溫度300,℃；傳輸線溫度280,℃；

1.2.3 質(zhì)譜條件

離子源為EI源；離子阱溫度 220,℃；掃描方式為全掃描；掃描相對(duì)原子質(zhì)量范圍 50～1,000；檢索譜庫名稱：NIST05．

2 結(jié)果與討論

2.1 不同產(chǎn)地蜂膠中主要化合物含量的分析

蜂膠產(chǎn)地的溫度、濕度、土壤和水質(zhì)酸堿度等環(huán)境因素，對(duì)蜂膠中風(fēng)味成分的組成有顯著的影響．利用峰面積歸一化法，對(duì)7省區(qū)蜂膠進(jìn)行GC-MS分析，其各化學(xué)成分的相對(duì)含量見表1．

表1 我國不同省區(qū)蜂膠GC-MS成分含量Tab.1 Contents of chemical constituents from the GC-MS in different areas of China

續(xù)表

7省區(qū)中，河南、山東、山西、四川、新疆樣品中松屬素含量較高，分別為26.29%、22.90%、21.69%、21.53%和26.97%．安徽、江蘇兩省的樣品中柯因含量較高，松屬素的含量略低，柯因含量分別為26.96%、26.34%，松屬素的含量分別為21.04%和21.12%．松屬素和柯因同屬于黃酮類化合物．從總黃酮量來看，7省區(qū)蜂膠的差別不大，但是各單一組分的含量存在差異．

7省區(qū)蜂膠的共同點(diǎn)是松屬素、柯因、大黃酚的含量都是位居前三位，不同的是三種化合物含量的順序有所不同．化合物松屬素的含量最高，柯因含量第二，大黃酚含量第三的蜂膠產(chǎn)地是河南、山東、四川、新疆；化合物柯因的含量最高，松屬素含量第二，大黃酚含量第三的蜂膠產(chǎn)地是安徽、江蘇兩省；只有山西的蜂膠中化合物松屬素的含量最高，大黃酚含量第二而柯因含量第三．

從表1中可以發(fā)現(xiàn)，某些物質(zhì)在不同產(chǎn)地的蜂膠中的相對(duì)含量有很大的差別，通過這些物質(zhì)可以確定蜂膠的產(chǎn)地．

安徽蜂膠中大黃素甲醚相對(duì)含量為4.51%，其他產(chǎn)地的蜂膠中含量低于3.18%；河南蜂膠中β–律草烯相對(duì)含量為2.57%，其他產(chǎn)地的蜂膠中含量低于1.87%；江蘇蜂膠中夫拉美諾相對(duì)含量0.36%，其他產(chǎn)地的蜂膠中含量低于0.05%；四川蜂膠中2，2′–亞甲基雙(4–甲基–6–叔丁基苯酚)相對(duì)含量13.57%，其他產(chǎn)地的蜂膠中含量低于8.49%；山西蜂膠中香紫蘇醇相對(duì)含量4.18%，其他產(chǎn)地的蜂膠中含量低于0.14%．因此，大黃素甲醚、β–律草烯、夫拉美諾、2，2′–亞甲基雙(4–甲基–6–叔丁基苯酚)、香紫蘇醇可以分別作為安徽、河南、江蘇、四川、山西所產(chǎn)蜂膠的鑒別物質(zhì)．

苯甲酸芐酯在山東蜂膠和四川蜂膠中的相對(duì)含量分別為0.28%和0.45%，在其他地區(qū)蜂膠中的含量為0；而四川蜂膠中2，2′–亞甲基雙(4–甲基–6–叔丁基苯酚)相對(duì)含量較高．所以，綜合考慮苯甲酸芐酯和2，2′–亞甲基雙(4–甲基–6–叔丁基苯酚)的相對(duì)含量可以將山東蜂膠從7種蜂膠中區(qū)分出來．

大黃素(朱砂蓮甲素)在新疆蜂膠和安徽蜂膠中的相對(duì)含量分別為10.91%和11.20%，其他產(chǎn)地的蜂膠中相對(duì)含量低于6.31%；而安徽蜂膠中大黃素甲醚的相對(duì)含量較高．所以，綜合考慮大黃素和大黃素甲醚的相對(duì)含量可以將新疆蜂膠從7種蜂膠中區(qū)分出來．

2.2 蜂膠中有效成分的類型和相對(duì)含量

蜂膠的保健作用不是由某一兩種化合物含量的高低來決定的，自古以來中藥的療效都是講究綜合作用．因此將各種化合物按黃酮、酚、醌、萜、甾等歸類后，探討各種不同類型物質(zhì)含量變化對(duì)保健作用的影響更符合中國傳統(tǒng)中藥的基本理念．分類的結(jié)果和各類物質(zhì)的相對(duì)含量見表2．

表2 我國不同省區(qū)蜂膠各類成分含量Tab.2 Contents of chemical variety from the GC-MS in different areas of China

由表2可見，7省區(qū)蜂膠的共同點(diǎn)是：黃酮類物質(zhì)是蜂膠的主要成分，占總出峰物質(zhì)的42.27%～55.59%，其次是醌類物質(zhì)，占總量的19.78%～30.26%．除以上兩類物質(zhì)以外，萜類是河南、江蘇、山西、新疆蜂膠中的主要成分，而酚類是安徽、山東、四川蜂膠的主要成分．

3 結(jié) 論

(1)借助于GC-MS強(qiáng)大的譜庫，可識(shí)別出蜂膠中的大部分揮發(fā)性組分．用GC-MS從7省區(qū)蜂膠乙醇提取物中分離鑒定揮發(fā)性物質(zhì)，檢測出黃酮、醌、酚、酯、萜、甾、酚酸、醇等14大類，共79種物質(zhì)．

(2)7省區(qū)蜂膠成分相似度極高：黃酮類中松屬素或柯因相對(duì)含量最高；按化合物的類型來排序，黃酮類最多，其次是醌類、萜類和酚類成分．通過萜類和酚類成分的含量的變化可以初步判斷蜂膠的產(chǎn)地．

(3)安徽、河南、江蘇、四川、山西所產(chǎn)蜂膠的鑒別物質(zhì)分別為大黃素甲醚、β–律草烯、夫拉美諾、2，2′–亞甲基雙(4–甲基–6–叔丁基苯酚)、香紫蘇醇；綜合考慮苯甲酸芐酯和2，2′–亞甲基雙(4–甲基–6–叔丁基苯酚)的相對(duì)含量可以將山東蜂膠從7種蜂膠中區(qū)分出來；綜合考慮大黃素和大黃素甲醚的相對(duì)含量可以將新疆蜂膠從7種蜂膠中區(qū)分出來．

［1］符軍放，曹煒，索志榮，等. 高效液相色譜法識(shí)別蜂膠特征組分及定量對(duì)比[J]. 西北大學(xué)學(xué)報(bào)：自然科學(xué)版，2006，36(4)：587-591.

［2］吳平谷，葉立楊. 蜂膠有效成分的分離與鑒定[J]. 衛(wèi)生研究，2000，29(2)：123-124.

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［5］趙淑云，馬海燕，朱美玲，等. 不同產(chǎn)地蜂膠超臨界CO2萃取物8 種黃酮比較研究 [J]. 中國蜂業(yè)，2006，57(11)：8-10.

［6］《蜂產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)匯編》編委會(huì). 蜂產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)匯編[M]. 北京：中國標(biāo)準(zhǔn)出版社，2003.

［7］盛文勝，余蘭平，李樹嵐，等. 超臨界CO2萃取蜂膠氣相色譜/質(zhì)譜法分析研究[J]. 中國蜂業(yè)，2006，57(8)：5-7.

Analysis on Chemical Constituents from the Ethanol Extracted Propolis in Different Areas of China

GAO Zhen-zhong，JIANG Sheng-ping
(Research Center of Modern Analysis Technology，Tianjin University of Science & Technology，Tianjin 300457，China)

GC-MS was used to identify the chemical constituents from the ethanol extracted propolis collected by local beekeepers of anhui，henan，jiangsu，shandong，shanxi，sichuan and xinjiang. 79 chemical constituents of 14 category including flavonoids，phenol，quinone，terpene，steroid，etc were identified. The quantity of flavonoids，phenol，quinone and terpene were abundant. The volatile component are approximately similar，but the relative contents of each component are different. There are representational components in the propolis collected from in different areas of China. The producing area of propolis can be identify by means of GC-MS to identify their relative contents of each volatile component and their representational components.

propolis；flavonoids；chemical constituents；GC-MS

O657.63

：A

：1672-6510(2010)03-0043-04

2009-11-02；

2009-12-09

天津科技大學(xué)科學(xué)研究基金資助項(xiàng)目(20050230)

高振中（1956—），男(回族)，天津人，講師，gaozhz@tust.edu.cn．