心鈉素表達細胞移植降低高血壓大鼠的血壓和增加其尿量

李濤，梁紅雁，路金芝，陳偉京，盧圣棟

中國醫(yī)學科學院基礎(chǔ)醫(yī)學研究所 北京協(xié)和醫(yī)學院基礎(chǔ)學院 醫(yī)學分子生物學國家重點實驗室，北京 100005

醫(yī)學與免疫生物技術(shù)

心鈉素表達細胞移植降低高血壓大鼠的血壓和增加其尿量

李濤，梁紅雁，路金芝，陳偉京，盧圣棟

中國醫(yī)學科學院基礎(chǔ)醫(yī)學研究所 北京協(xié)和醫(yī)學院基礎(chǔ)學院 醫(yī)學分子生物學國家重點實驗室，北京 100005

為探討心鈉素基因轉(zhuǎn)移治療高血壓和慢性心腎功能衰竭等慢性疾病的潛力，首先利用逆轉(zhuǎn)錄病毒載體獲得可表達和分泌人心鈉素的遺傳工程細胞，然后將這種細胞植于自發(fā)性高血壓大鼠SHR的皮下。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，人心鈉素遺傳工程細胞的移植可使動物血漿中的心鈉素濃度在移植后第 7天時明顯升高。在整個實驗期間，雖然實驗組動物的血壓會隨個體發(fā)育而逐漸升高，但在實驗開始后的42 d內(nèi)卻始終明顯低于空載體組，其中第14天血壓的差異高達33 mm Hg。在實驗開始后的第14天和第21天，實驗組動物的尿量也明顯增加。以上結(jié)果說明，人心鈉素遺傳工程細胞的皮下移植可明顯抑制SHR大鼠血壓的上升趨勢和改善其泌尿功能，提示該方法具有治療高血壓和慢性心腎功能衰竭等慢性疾病的潛力。

心鈉素，基因治療，逆轉(zhuǎn)錄病毒載體，高血壓，自發(fā)性高血壓大鼠

Abstract:To investigate the potential of gene therapy for the treatment of chronic diseases such as hypertension, chronic heart failure, and chronic renal failure, we established the neonatal rat fibroblast line engineered to secrete the mutant human atrial natriuretic peptide (mhANP), and then transplanted the cell line into young spontaneously hypertensive rats (SHR) subcutaneously.We found that a single transplantation of the cell line caused an obvious rise in the concentration of mhANP in serum 7 d after transplantation ((135 ± 8)vs(106 ± 7) pg/mL,P< 0.01). The animals’ blood pressure in test group was always remarkably lower than that of empty vector group within 42 d after transplantation, even though the blood pressure in all groups was constantly increasing in the process of ontogeny ((175 ± 10) mm Hgvs(189 ± 12) mm Hg,P< 0.05). A maximal blood pressure reduction of 33 mm Hg((157 ± 9) mm Hgvs(124 ± 112) mm Hg,P< 0.01) was observed 14 d post cell transplantation. There was a marked increase in urine volume in test group from second week after treatment beginning ((5.9 ± 0.7) mL/6 hvs(4.3 ± 0.8) mL/6 h,P< 0.01) and the effect lasted 14 d ((6.1 ± 1.1) mL/6 hvs(4.0 ± 0.8) mL/6 h,P< 0.01), however the statistical difference in concentration of K+and Na+in serum and urine was not observed. The results suggested that subcutaneous implantation of fibroblasts-expressing mhANPsignificantly reduced blood pressure in young SHR during the period of ontogeny and efficiently improved their renal function and the somatic gene transfer of mhANP may have potential value in the treatment of human chronic diseases such as hypertension,chronic heart failure, and chronic renal failure.

Keywords:atrial natriuretic factor, gene therapy, retroviral vector, hypertension, spontaneously hypertensive rat

雖然治療藥物或手段已有不少，但由于療效的限制，目前全世界的高血壓患者人數(shù)仍然超過 10億，高血壓病則仍然是腦卒中、冠心病和心腎功能衰竭等嚴重疾病的主要誘因[1]。心鈉素 (Atrial natriuretic peptide，ANP，或 Atrial natriuretic factor，ANF) 是一種由28個氨基酸構(gòu)成的多肽激素，主要由心房肌細胞合成和分泌。以ANP基因為標靶的轉(zhuǎn)基因動物試驗[2]、基因敲除試驗[3]以及以ANP受體基因為標靶的基因敲除試驗[4]證明，ANP與心血管系統(tǒng)功能之間的關(guān)系密切。體內(nèi)外活性試驗則證明，ANP具有利尿利鈉、舒張血管、降低血壓、抑制腎素-血管緊張素系統(tǒng)和改善心腎功能等廣泛的生物學活性[5-6]，因此，ANP的基因工程產(chǎn)品Carperitide已于1995年在日本批準用于治療急性心衰，與其類似的重組腦鈉素 (Brain natriuretic peptide，BNP)Nesiritide于2001年在美國批準用于治療急性心衰，源于腎臟的Ularitide也已經(jīng)在美國和歐洲開展治療急性心衰的臨床試驗[5-6]。不過作為多肽激素的ANP等也存在著半衰期短因而需要長時間靜脈滴注才能有效發(fā)揮治療作用的不足，這使其無法滿足高血壓和慢性心腎功能衰竭等慢性疾病治療的需要。為充分發(fā)揮ANP的應(yīng)用潛力，引入了ex vivo基因治療策略[7]，即借助于逆轉(zhuǎn)錄病毒載體首先將突變型人心鈉素基因 (mhANP) 導入自發(fā)性高血壓大鼠(Spontaneously hypertensive rat，SHR) 新生鼠的皮膚成纖維細胞，以獲得可表達和分泌突變型人心鈉素多肽 mhANP的遺傳工程細胞，然后將該細胞移植到幼齡SHR大鼠的皮下，以期通過為動物持續(xù)提供穩(wěn)定的 mhANP來源的方法來實現(xiàn)治療慢性疾病的目的。結(jié)果表明，該方法可顯著抑制動物血壓的上升趨勢和增強其腎臟的泌尿功能，在高血壓和慢性心腎功能衰竭等慢性疾病的治療方面具有潛在的應(yīng)用價值。

1 材料和方法

1.1 材料

DMEM 培養(yǎng)基、G418和 Lipofectamin購自Gibco-BRL公司。BCA (bicinchoninic acid) 試劑盒是美國 PIERCE公司產(chǎn)品。PCR引物 P1(5′-GGAT CCATGAGCTCCTTCTCC-3′) 和 P2(5′-CTCGAGTC AGTACCGGAAGCT-3′) 由賽百盛公司合成。逆轉(zhuǎn)錄病毒包裝細胞系PA317、NIH3T3細胞由中國醫(yī)學科學院基礎(chǔ)所劉德培教授惠贈。心鈉素放免試劑盒購自北京北方免疫試劑所。小牛血清購自中國醫(yī)學科學院學血液病研究所。RBP-1型大鼠血壓測定儀購自中日友好醫(yī)院。自發(fā)性高血壓大鼠購自中國醫(yī)學科學院阜外醫(yī)院。

攜帶有 mhANP cDNA的逆轉(zhuǎn)錄病毒表達重組體pLHY24由本實驗室構(gòu)建。構(gòu)建時所用逆轉(zhuǎn)錄病毒載體是Clontech公司的pLNCX質(zhì)粒 (http://www.clontech.com)，其中含有為質(zhì)粒擴增提供選擇壓力的抗性基因Ampr，為逆轉(zhuǎn)錄病毒感染后提供選擇壓力的抗性基因Neor，供逆轉(zhuǎn)錄病毒整合進宿主細胞基因組的主要元件 5′LTR和 3′LTR，控制外源基因表達的人巨細胞病毒啟動子 CMVp，以及供外源基因插入的多克隆位點 (MCS)。本研究中的pLHY24就是把mhANP cDNA 插入其CMVp和3′LTR之間的MCS而獲得的。

1.2 方法

1.2.1基因組中整合有mhANP cDNA的移植細胞的獲得及mhANP表達水平的檢測

攜帶目的基因 mhANP cDNA的逆轉(zhuǎn)錄病毒表達重組體pLHY24的包裝、SHR新生鼠皮膚成纖維細胞的原代培養(yǎng)物的建立、逆轉(zhuǎn)錄病毒對該培養(yǎng)物的感染以及目標多肽 mhANP表達水平的放免法檢測等參照文獻[8]的方法進行。

1.2.2移植細胞基因組中整合的目的基因mhANP cDNA的檢測

采用 PCR擴增的方法來檢測目的基因 mhANP cDNA在移植細胞基因組中的整合情況，分別以被空載體pLNCX逆轉(zhuǎn)錄病毒顆粒感染的SHR新生鼠皮膚成纖維細胞和被表達重組體 pLHY24逆轉(zhuǎn)錄病毒顆粒感染的SHR新生鼠皮膚成纖維細胞的基因組DNA為模板，以mhANPcDNA特異的核苷酸序列為引物 (5′-端引物 P1: 5′-GGATCCATGAGCTCCTT CTCC-3′和 3′-端引物 P2: 5′-CTCGAGTCAGTACCG GAAGCT-3′)，進行PCR擴增，并對擴增產(chǎn)物進行分子量鑒定。進行該檢測時，以攜帶有目的基因mhANP cDNA的表達重組體質(zhì)粒pLHY24為陽性對照，以構(gòu)建pLHY24時所用空載體質(zhì)粒pLNCX為陰性對照。

1.2.3鼠尾膠原的制備[9]

將凍存于?20℃的成年大鼠尾剪成 2 cm 的小段，于70%的乙醇浸泡30 min，用鑷子抽取尾腱，盡可能將尾腱剪碎，用0.02 mol/L的冰醋酸400 mL于4℃浸泡48 h，于4℃、5000 r/min離心1.5 h，將上清液移于另一管中，于同樣條件下離心2 h，收集上清液，以 6∶1 (V/V) 的比例加入 0.1 mol/L的NaOH以中和冰醋酸，室溫下5000 r/min離心10 min，棄上清液，用新配制的0.02 mol/L的冰醋酸再溶解膠原蛋白，10 b高壓滅菌10 min，?20℃保存?zhèn)溆?。膠原蛋白的濃度根據(jù) BCA試劑盒使用說明書提供的方法測定。

1.2.4細胞移植物的制備

所用遺傳工程細胞有兩種，一種為基因組中整合了空載體pLNCX的SHR新生鼠皮膚成纖維細胞，其無法表達和分泌 mhANP多肽，另一種為基因組中整合有目的基因mhANP cDNA表達系統(tǒng)的SHR新生鼠的皮膚成纖維細胞，其能夠表達和分泌mhANP多肽。

首先將上述兩種遺傳工程細胞分別懸浮于 5×D-MEM (即濃度為正常使用的 D-MEM 培養(yǎng)液的 5倍) 中，使細胞密度為3×106個/mL，然后按大鼠尾膠原 (2 mg/mL)∶5× D-MEM∶小牛血清∶細胞懸液=3∶1∶0.5∶0.5 (V/V) 的比例混合各組分，使移植物中細胞的密度為3×105個/mL。

1.2.5體內(nèi)細胞移植試驗

將購回并飼養(yǎng)7 d后的雄性SHR大鼠隨機分成兩組 (各10只/組)，用腹腔注射戊巴比妥鈉 (45 mg/kg)的方法麻醉，按5 mL移植物/只的劑量將移植物緩慢注入動物背部兩側(cè)4個點的皮下。

1.2.6血壓、體重和尿量等生理指標的測定[10]

每周定期稱量動物體重，用鼠尾夾法測大鼠尾動脈收縮壓，用代謝籠法收集尿液并測量其體積和其中的鉀、鈉等電解質(zhì)濃度，自眼眶取血、分離血漿并測定其中mhANP多肽的濃度。

1.2.7統(tǒng)計學處理

2 結(jié)果

2.1 目的基因mhANPcDNA在移植細胞基因組中的整合和表達情況

對PCR擴增產(chǎn)物進行的分子量鑒定結(jié)果見圖1，其中只有以攜帶有目的基因mhANP cDNA的表達重組體質(zhì)粒pLHY24為模板的陽性對照組 (泳道2) 和以被表達重組體 pLHY24逆轉(zhuǎn)錄病毒顆粒感染的SHR新生鼠皮膚成纖維細胞的基因組DNA為模板的試驗組 (泳道 5)，其 PCR產(chǎn)物中才含有特定分子量的擴增片段，而在以空載體質(zhì)粒pLNCX (泳道1) 或被空載體病毒顆粒感染的細胞基因組 DNA為模板(泳道4) 時，則沒有任何擴增產(chǎn)物存在。這提示目的基因mhANPcDNA整合進了移植細胞的基因組。對移植細胞的培養(yǎng)液上清進行放免法檢測時所獲結(jié)果與此一致，即只有基因組中整合了目的基因mhANPcDNA的移植細胞才能有效表達 mhANP多肽，106個細胞在.24 h內(nèi)的表達水平為 (13.37 ± 2.36) ng。

2.2 mhANP表達細胞移植對SHR大鼠血漿ANP濃度的影響

針對ANP進行的放免法檢測結(jié)果見表1?？梢钥闯?，與空載體組動物血漿中的ANP濃度相比，在細胞移植7 d后，實驗組動物血漿中的ANP濃度顯著高于空載體組 (P＜0.01)。雖然這種差異的顯著性從第14天起就消失了，但實驗組動物血漿中的ANP濃度在未來幾周里卻始終保持在一個相對較高的水平。該結(jié)果表明，由移植到動物皮下的 mhANP表達細胞表達和分泌的 mhANP多肽可順利進入動物的血循環(huán)。

2.3 mhANP表達細胞移植對 SHR大鼠血壓的影響

與動物血漿中ANP濃度的情況一致，雖然實驗組動物的血壓也會隨個體發(fā)育而不斷升高，但其血壓值在細胞移植后的49 d內(nèi)卻始終顯著低于空載體組 (表2)，其中又以第14天時的差距最大，達33 mm Hg (P＜0.01)。該結(jié)果表明，由mhANP表達細胞表達和分泌的 mhANP多肽不但能順利進入動物的血循環(huán)，而且還能正常發(fā)揮其降血壓的生物學活性。該結(jié)果提示，盡管人與大鼠的ANP之間存在著一定的種屬差異，然而這種差異尚不足以影響人ANP功能的發(fā)揮。

圖 1 PCR檢測突變型人心鈉素 cDNA在遺傳工程細胞基因組中的整合情況Fig.1 Integration of mhANP cDNA in the genome of the cell line genetically engineered to express and secrete mhANP. 1: the PCR template was retroviral empty vector pLNCX; 2: the PCR template was retroviral vector pLHY24 carrying mhANP cDNA;3: DNA marker; 4: the PCR template extracted from the infant rat skin fibroblast line infected with retroviral empty vector pLNCX;5: the PCR template was extracted from the infant rat skin fibroblast line infected with retroviral vector pLHY24 carrying mhANP cDNA.

2.4 mhANP表達細胞移植對 SHR大鼠尿量的影響

對動物尿量的監(jiān)測結(jié)果見表 3?？梢钥闯?，與血漿中的ANP濃度和血壓的情況一致，在實驗開始后的第7天和第14天，實驗組動物的尿量都顯著高于空載體組 (P＜0.01)。該結(jié)果表明，由mhANP表達細胞表達和分泌的 mhANP多肽還能正常發(fā)揮其利尿活性，并且再次提示，人與大鼠ANP之間的種屬差異尚不足以阻止人ANP功能的發(fā)揮。

2.5 mhANP表達細胞移植對 SHR大鼠體重的影響

對動物體重的監(jiān)測結(jié)果見表 4。可以看出，在整個實驗期間，實驗組和空載體組動物的體重均不斷增長，并且在兩者間的差異也無顯著性。這說明mhANP表達細胞的移植不會影響幼齡SHR大鼠體重的正常增長。

2.6 mhANP表達細胞移植對SHR尿中Na+、K+離子濃度的影響

對動物尿液中 Na+、K+離子濃度的監(jiān)測結(jié)果見表5和表6?？梢钥闯觯谡麄€實驗期間，mhANP表達細胞的移植對幼齡SHR尿中Na+、K+離子濃度無顯著影響。

表1 mhANP表達細胞移植對SHR大鼠血漿ANP濃度的影響 (nmol/L，±s)Table 1 Effect of transplantation of the cell line genetically engineered to express and secrete mhANP on the ANP concentration in serum

表1 mhANP表達細胞移植對SHR大鼠血漿ANP濃度的影響 (nmol/L，±s)Table 1 Effect of transplantation of the cell line genetically engineered to express and secrete mhANP on the ANP concentration in serum

Emp V: empty vector; BT: before transplantation. ??P< 0.01vsempty vector.

Post transplantation Group Number(n) BT 7 d 14 d 21 d 28 d 35 d 42 d 49 d Emp V 10 108 ± 11 106 ± 7 109 ± 18 109 ± 14 113 ± 23 125 ± 19 117 ± 27 121 ± 21 mhANP 10 102 ± 24 136 ± 8?? 124 ± 19 123 ± 18 126 ± 23 132 ± 20 129 ± 24 126 ± 17

表2 mhANP表達細胞移植對SHR大鼠血壓的影響 (mm Hg，±s)Table 2 Effect of transplantation of the cell line genetically engineered to express and secrete mhANP on blood pressure

表2 mhANP表達細胞移植對SHR大鼠血壓的影響 (mm Hg，±s)Table 2 Effect of transplantation of the cell line genetically engineered to express and secrete mhANP on blood pressure

Emp V: empty vector; BT: before transplantation. ?P< 0.05; ??P< 0.01vsempty vector.

Post transplantation Group Number(n) BT 7 d 14 d 21 d 28 d 35 d 42 d 49 d Emp V 10 147 ± 6 145 ± 8 157 ± 9 169 ± 6 166 ± 7 181 ± 8 183 ± 10 189 ± 12 mhANP 10 148 ± 8 131 ± 9 ?? 124 ±12?? 152 ± 9?? 154 ± 8?? 163 ± 9?? 170 ± 8?? 175±10?

表3 mhAnP表達細胞移植對SHR大鼠尿量的影響 (mL/6 h，±s)Table 3 Effect of transplantation of the cell line genetically engineered to express and secrete mhANP on urine volume

表3 mhAnP表達細胞移植對SHR大鼠尿量的影響 (mL/6 h，±s)Table 3 Effect of transplantation of the cell line genetically engineered to express and secrete mhANP on urine volume

Emp V: empty vector; BT: before transplantation. ??P< 0.01vsempty vector.

?

表4 mhNAP表達細胞移植對SHR大鼠體重的影響 (g，±s)Table 4 Effect of transplantation of the cell line genetically engineered to express and secrete mhANP on urine volume

表4 mhNAP表達細胞移植對SHR大鼠體重的影響 (g，±s)Table 4 Effect of transplantation of the cell line genetically engineered to express and secrete mhANP on urine volume

Emp V: empty vector; BT: before transplantation.

Post transplantation Group Number(n)BT 7 d 14 d 21 d 28 d 35 d 42 d 49 d Emp V 10 92 ± 15 117 ± 14 138 ± 12 164 ± 28 170 ± 32 194 ± 35 205 ± 37 219 ± 43 mhANP 10 90 ± 16 114 ± 16 134 ± 18 154 ± 30 169 ± 35 178 ± 39 189 ± 34 206 ± 35

表5 mhANP表達細胞移植對SHR大鼠尿Na+濃度的影響 (mmol/L，±s)Table 5 Effect of transplantation of the cell line genetically engineered to express and secrete mhANP on urine Na+

表5 mhANP表達細胞移植對SHR大鼠尿Na+濃度的影響 (mmol/L，±s)Table 5 Effect of transplantation of the cell line genetically engineered to express and secrete mhANP on urine Na+

Emp V: empty vector; BT: before transplantation.

Post transplantation Group Number(n) BT 7 d 14 d 21 d 28 d 35 d 42 d 49 d Emp V 10 106 ± 17 108 ± 20 114 ± 21 107 ± 18 109 ± 23 115 ± 26 119 ± 23 115 ± 21 mhANP 10 114 ± 23 121 ± 27 119 ± 23 114 ± 25 124 ± 19 119 ± 20 125 ± 19 124 ± 19

表6 mhANP表達細胞移植對SHR大鼠尿K+濃度的影響 (mmol/L，±s)Table 6 Effect of transplantation of the cell line genetically engineered to express and secrete mhANP on urine K+

表6 mhANP表達細胞移植對SHR大鼠尿K+濃度的影響 (mmol/L，±s)Table 6 Effect of transplantation of the cell line genetically engineered to express and secrete mhANP on urine K+

Emp V: empty vector; BT: before transplantation.

Post transplantation Group Number(n) BT 7 d 14 d 21 d 28 d 35 d 42 d 49 d Emp V 10 102 ± 20 115 ± 19 122 ± 17 116 ± 20 119 ± 22 124 ± 21 122 ± 21 120 ± 18 mhANP 10 99 ± 19 108 ± 17 116 ± 18 118 ± 18 114 ± 17 118 ± 19 118 ± 23 115 ± 16

3 討論

大量基礎(chǔ)研究和臨床實踐表明，ANP多肽不但能夠有效治療急性心衰，而且還具有治療高血壓和慢性心腎功能衰竭等慢性疾病的應(yīng)用潛力，但是，其半衰期短和需要長時間靜脈滴注才具療效的不足卻限制了其應(yīng)用潛力的充分發(fā)揮[5-6]。為彌補 ANP多肽的這一不足，更為探求治療上述慢性心血管系統(tǒng)疾病的新方法，筆者將藥物形式由半衰期只有2.5 min的 ANP多肽改為相對穩(wěn)定的 ANP基因mhANP，并引入了ex vivo基因治療策略，即將可穩(wěn)定表達和分泌 mhANP多肽的遺傳工程細胞直接導入幼齡SHR大鼠體內(nèi)。結(jié)果表明，該方法可顯著抑制幼齡SHR大鼠血壓的上升趨勢和增強其腎臟的泌尿功能。

第一，人mhANP表達細胞移植于SHR大鼠皮下可有效發(fā)揮ANP多肽生理作用的基礎(chǔ)。雖然人與大鼠的ANP之間存在著種屬差異，但這種差異尚不足以阻止 ANP功能的發(fā)揮，F(xiàn)ürst等的工作早已證明了這一點[11]，因此，本實驗將人 mhANP表達細胞移植于SHR大鼠皮下可顯著抑制血壓的上升趨勢和增強泌尿功能，關(guān)鍵首先在于mhANPcDNA在SHR新生鼠皮膚成纖維細胞基因組中的整合、表達和分泌，更在于 mhANP表達細胞移植后其表達產(chǎn)物可順利地進入血液循環(huán)，后者表現(xiàn)為實驗組動物血漿心鈉素濃度在細胞移植 7 d后明顯升高，并且在整個實驗過程中 (49 d) 都處于相對較高的水平。

第二，mhANP表達細胞移植的有效性。與空載體組動物的血壓相比，雖然實驗組動物的血壓同樣會隨個體發(fā)育而不斷升高，但實驗組動物的血壓在整個實驗過程中 (49 d) 都處于明顯的低水平狀態(tài)。而從腎功能方面來看，mhANP表達細胞移植則可顯著增強動物的泌尿功能。顯然，泌尿功能的改善對于動物血壓上升幅度的縮小和血壓狀況惡化進程的推遲是有利的。

mhANP表達細胞移植一次的有效利尿作用時間和有效降血壓作用時間分別為14 d和49 d，這是目前臨床所用利尿劑和降壓藥難以企及的。就半衰期只有 2.5 min因而需長期靜脈滴注才可有效治療急性心衰的心鈉素多肽來說，mhANP表達細胞移植的這種長效性無疑是一次質(zhì)的飛躍。

總之，mhANP表達細胞移植具有相對高效和長效等特點，在高血壓和慢性心腎功能衰竭等慢性疾病的治療方面具有應(yīng)用潛力，值得進一步研究。

REFERENCES

[1] Israili ZH, Hernández-Hernández R, Valasco M. The future of antihypertensive treatment.Am J Ther,2007,14(2): 121?134.

[2] Steinhelper ME, Cochrane KL, Field LJ. Hypertension in transgenic mice expressing atrial natriuretic factor fusion genes.Hypertension, 1990, 16(3): 301?307.

[3] John SW, Krege JH, Oliver PM,et al.Genetic decreases in atrial natriuretic peptide and salt sensitive hypertension.Science,1995, 267(5198): 679?681.

[4] Lopez MJ, Wong SK, Kishimoto I,et al.Salt-resistant hypertension in mice lacking the guanylyl cyclase-A receptor for atrial natriuretic peptide.Nature,1995,378(6552): 65?68.

[5] Lee CY, Burnett JC Jr. Natriuretic peptides and therapeutic applications.Heart Fail Rev, 2007, 12(2): 131?142.

[6] Nomura F, Kurobe N, Mori Y,et al.Multicenter prospective investigation on efficacy and safety of carperitide as a first-line drug for acute heart failure syndrome with preserved blood pressure COMPASS:arperitide effects observed through monitoring dyspnea in acute decompensated heart failure study.Circ J, 2008,72(11): 1777?1786.

[7] Lortal B, Gross F, Peron JM,et al.Preclinical study of anex vivogene therapy protocol for hepatocarcinoma.Cancer Gene Ther, 2009, 16(4): 329?337.

[8] Li T, Liang HY, Lu G,et al.Hypotensive effect of encapsulated genetically engineered fibroblasts expressing mutant atrial natriuretic peptide in hypertensive rats.Nat Med J Chin, 2002, 82(16): 1086?1089.

李濤, 梁紅雁, 盧果, 等. 皮下移植心鈉素表達細胞膠囊對高血壓大鼠的降血壓效應(yīng). 中華醫(yī)學雜志, 2002,82(16): 1086?1089.

[9] E Z. Tissue Culture and Molecullar Cellular Techology.Beijing: Beijing Press, 1995: 50?70.

鄂征. 組織培養(yǎng)和分子細胞學技術(shù). 北京: 北京出版社,1995: 50?70.

[10] Chao J, Jin L, Chen LM,et al. Systemic and portal vein delivery of human kallikrein gene reduces blood pressure in hypertensive rats.Hum Gene Ther, 1996, 7(8):901?911.

[11] Fürst R, Brueckl C, Kuebler WM,et al. Atrial natriuretic peptide induces mitogen-activated protein kinase phosphatase-1 in human endothelial cells via Rac1 and NAD(P)H oxidase/Nox2-activation.Circ Res, 2005, 96(1):43?53.

Transplantation of atrial natriuretic peptide-expressing fibroblasts reduces blood pressure and increases urine volume in spontaneously hypertensive rats

Tao Li, Hongyan Liang, Jinzhi Lu, Weijing Chen, and Shengdong Lu

National Laboratory of Medical Molecular Biology,Institute of Basic Medical Sciences,Chinese Academy of Medical Sciences,School of Basic Medicine,Peking Union Medical College,Beijing100005,China

Received:December 8, 2009;Accepted:March 15, 2010

Corresponding author:Shengdong Lu. Tel: +86-10-65295905; Fax: 86-10-65124876; E-mail: lusd@pumc.edu.cn