禽IL-2與傳染性法氏囊VP2融合蛋白免疫學特性

王臣，趙戰(zhàn)勤，張春杰，劉一塵，丁軻，李銀聚，程相朝，陳溥言

1 河南科技大學 動物傳染病與微生物實驗室，洛陽 471003 2 南京農(nóng)業(yè)大學 農(nóng)業(yè)部動物疫病與診斷重點實驗室，南京 210095

禽IL-2與傳染性法氏囊VP2融合蛋白免疫學特性

王臣1,2，趙戰(zhàn)勤1，張春杰1，劉一塵1，丁軻1，李銀聚1，程相朝1，陳溥言2

1 河南科技大學 動物傳染病與微生物實驗室，洛陽 471003 2 南京農(nóng)業(yè)大學 農(nóng)業(yè)部動物疫病與診斷重點實驗室，南京 210095

為研究禽細胞因子IL-2與IBDV主要保護性抗原VP2基因融合蛋白的免疫學特性，將重組的rVP2-IL-2融合蛋白免疫雞，通過IBDV-VP2 ELISA抗體效價、抗體亞型(IgG1和IgG2a)、淋巴細胞增殖、INF-γ和IL-4細胞因子的分泌水平、中和抗體以及動物攻毒試驗檢測評價其對雞體免疫水平的影響?？贵w滴度測定和淋巴細胞增殖試驗結(jié)果顯示，rVP2-IL-2融合蛋白免疫雞體的體液和細胞免疫應(yīng)答水平均明顯高于單獨的VP2蛋白免疫組。抗體亞型測定結(jié)果顯示，rVP2-IL-2融合蛋白免疫組雞體能產(chǎn)生一個平衡的IgG1和IgG2a抗體反應(yīng)。細胞因子ELISA試驗結(jié)果表明rVP2-IL-2融合蛋白能有效平衡 Th1(γ-IFN)和 Th2(IL-4)類型的細胞免疫反應(yīng)。動物攻毒試驗 rVp2-IL-2融合蛋白免疫組雞體獲得了85%的保護率，表明構(gòu)建的rVP2-IL-2融合蛋白對IBDV的攻擊具有較好的免疫保護作用。本研究為進一步研制IBD高效的基因工程疫苗奠定了基礎(chǔ)。

傳染性法氏囊，VP2基因，IL-2，融合蛋白

Abstract:In order to research immunogenicity of the recombinant rVP2-IL-2 fusion protein, we obtained the rVP2-IL-2 fusion protein usingPichia pastorisexpression system, and then evaluated its potential to induce immune responses in chicken.The effect was determined in the form of protective anti-IBDV VP2 titers, antibodies(IgG1 and IgG2a), lymphocyte proliferation, the levels of interferon-γ and interleukin-4 cytokines, and challenge experiment.Antibody titers and proliferation lymphocyte level suggested that the fusion protein could elicit specific humoral immune and cellular immune responses.antibody sub-type results indicated that the rVP2-IL-2 fusion protein induced secretion both of IgG1 and IgG2a.The seem result elicited from cytokines ELISA test, secretion of both of Th1(γ-IFN)and Th2(IL-4)were induced by the rVP2-IL-2 fusion protein.Challenge experiment result shown that chicken immunized the rVP2-IL-2 fusion protein obtained 85% protection.These results confirm that the fusion protein enhances the protection against IBDV through both humoral and cell-mediated immunity, and thus could serve as a candidate for the developmentof IBDV subunit vaccine.

Keywords:infectious bursal disease virus(IBDV),VP2gene, IL-2, fusion protein

傳染性法氏囊病(Infectious bursal disease，IBD)是由傳染性法氏囊病病毒(Infectious bursal disease virus，IBDV)引起的幼雞和青年雞的一種急性、高度接觸性傳染病，發(fā)病率高，病程短。臨床上主要表現(xiàn)為間歇性腹瀉、厭食、高度虛弱、體重減輕和電解質(zhì)平衡紊亂。病變特征主要為脫水、肌肉出血、腎臟尿酸鹽沉積和法氏囊腫大。尤其是IBDV主要侵害雞的體液免疫中樞——法氏囊，從而導致免疫抑制，降低機體對其他傳染病的免疫反應(yīng)，使機體對其他病毒病和細菌性疾病的易感性增高[1]。該病的復雜性和潛在的威脅引起了獸醫(yī)界的廣泛關(guān)注，并逐漸成為各國獸醫(yī)科技工作者研究的焦點之一。對于傳染性疫病的控制，目前普遍認為免疫接種是簡單而又有效地途徑。但是實際生產(chǎn)過程中，免疫失敗時常發(fā)生。分析其原因，除了有關(guān)疫苗接種因素外，強毒株、超強毒株和變異株的存在，使疫苗不能提供有效地免疫保護?；蛘咴诮臃N的同時，環(huán)境中存在數(shù)量較大的野毒株，在機體還未產(chǎn)生高水平抗體之前，就被野毒株感染，這樣勢必也導致免疫失敗。IBDV屬于雙鏈雙節(jié)段RNA病毒，A節(jié)段包括兩個部分重疊的開放閱讀框架(ORF1和ORF2)。ORF1編碼的多聚蛋白前體經(jīng)加工剪切形成 3個成熟的蛋白 VP2、VP4和VP3，VP2不僅是病毒的主要結(jié)構(gòu)蛋白，還是病毒的主要宿主保護性抗原，與病毒的抗原漂移、毒力變異、中和抗體的誘導和細胞凋亡有關(guān)[2-3]。

應(yīng)用細胞因子作為免疫佐劑能提高各種免疫反應(yīng)的強度和速度。IL-2是一種糖蛋白，能誘導T淋巴細胞的克隆增殖和活化，伴隨抗原刺激后產(chǎn)生記憶效應(yīng)，而且還能和其他淋巴因子協(xié)同作用，誘導B淋巴細胞的克隆和增殖，誘導產(chǎn)生抗體的漿細胞和記憶細胞分化。所有這些特點，都是IL-2作為疫苗佐劑的理論依據(jù)。

本研究以酵母為載體融合表達 IBDV主要保護抗原 VP2基因和禽細胞因子 IL-2，用重組的rVP2-IL-2靶向融合蛋白免疫雞，通過對其免疫學特性的檢測。評價其對雞體的特異性細胞免疫和體液免疫水平的影響，為進一步提高 IBDV基因疫苗的免疫效果，開發(fā)新型IBDV疫苗奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料及試驗動物

酵母表達的重組蛋白 rVP2、rIL-2、rVP2-IL-2為本課題組制備[4-5]。辣根過氧化物酶標記的羊抗雞IgG購自中山公司。HRP標記的羊抗雞IgG1和IgG2a購自Caltag Laboratories公司。四甲基偶氮唑鹽(MTT)、淋巴細胞分離液為上海生物工程公司產(chǎn)品。細胞因子含量測定ELISA試劑盒購自武漢中美生物工程公司。RPMI-1640培養(yǎng)基、刀豆蛋白 A(ConA)、乙酸豆蔻佛波醇(PMA)、ConA、PMA以RPMI-1640培養(yǎng)液配制成 1 g/L的溶液，MTT以RPMI1640培養(yǎng)液配制成5 g/L的溶液，過濾除菌，?20℃保存?zhèn)溆?。IBDV標準強毒株BC6/85購自中國獸藥監(jiān)察所，毒價為10?5.88ELD50/0.2 mL。血清中和試驗用毒株、IBDV-L017株為本室由L017雞胚適應(yīng)株于雞胚成纖維細胞上反復傳代、馴化而成的細胞適應(yīng)毒，其毒價為10?6.86/TCID50/0.1 mL。IBD抗原由本室應(yīng)用多株地方野毒株的法氏囊組織懸液所制備，AGP效價為 1∶64。中等毒力的活疫苗為B87毒株凍干活疫苗。1日齡非免疫羅曼雛公雞由洛陽市新安縣現(xiàn)代化雞場提供，免疫試驗20日齡前經(jīng)瓊擴試驗和抗體中和試驗檢測證實無 IBDV母源抗體。其他試劑均為國產(chǎn)或進口分析純。

1.2 方法

1.2.1 動物的分組與免疫

將200只20日齡的非免疫羅曼雛公雞隨機分成5組，40只/組，各組均隔離飼養(yǎng)。第1組為陰性對照，免疫200 μL PBS；第2組、第3組、第4組分別免疫200 pmol的rIL-2、rVP2、rVP2-IL-2重組蛋白(用200 μL PBS稀釋)。采用胸部肌肉注射方式進行免疫；第5組為B87毒株凍干活疫苗對照，采用滴鼻、點眼的途徑免疫200 μL；所有組間隔2周免疫1次，共免疫3次。并分別于免疫接種后第0、7、14、21、28、35、42天時各隨機抽取5只心臟采血，分離血清。

1.2.2 抗IBDV血清ELISA抗體效價的測定

抗IBDV血清ELISA抗體效價的測定采用間接ELISA法。以IBDV標準抗原包被酶標板，依次加入不同稀釋度的各試驗組免疫雞血清，溫育、洗滌，然后加入HRP標記的兔抗雞IgG，溫育、洗滌同上。最后用TMB底物顯色，在酶標儀上讀取OD450值。

1.2.3 IBDV抗體亞型檢測

首免后 7 d、21 d、35 d分離的血清檢測IBDV-VP2抗體，用0.05 mol/L carbonate buffer pH 9.6(CBS)稀釋重組 IBDV-VP2蛋白至 10 mg/L，加入96孔酶標板中，每孔100 μL，4℃過夜包被，后用PBST洗滌3次。用1%BSA于室溫下封閉3 h，PBST洗滌3 次。加入1∶10～1∶105稀釋的雞血清(每孔100 μL)作用1 h，再次以PBST洗滌3次。加入1∶2000稀釋的過氧化物酶標記的羊抗雞 IgG1、IgG2a(每孔 100 μL)作用 1 h，PBST 洗滌 3 次，拍干，加入現(xiàn)配的TMB顯色液(每孔100 μL)，室溫避光反應(yīng)20 min后，以2 moL/L H2SO4終止反應(yīng)。在酶標儀上讀取 OD450。每個血清稀釋度對應(yīng)一個ELISA OD值，繪制血清稀釋度(log scale)對應(yīng)OD值曲線。通過擬合曲線回歸分析half maximal OD時的血清稀釋度。計算該血清稀釋度的logarithm值來作為實驗結(jié)果。每個血清滴定重復3次。

1.2.4 中和抗體的測定

常規(guī)方法制備雞胚成纖維細胞，然后按照文獻[6]的介紹，采用固定病毒稀釋血清的方法，測定中和抗體效價，將 IBDV-L017細胞適應(yīng)毒株應(yīng)用Hank's液稀釋成含100 TCID50的病毒懸液。將血清應(yīng)用 Hank's液在 96孔細胞培養(yǎng)板上作倍比系列稀釋(1∶10～1∶10 240)，按需要分別取不同的稀釋度與病毒液進行中和。取每個血清樣品的不同稀釋度100 μL與等量病毒懸液于96孔反應(yīng)板各反應(yīng)孔中，37℃溫箱中和1 h。棄去已長滿單層細胞的96孔板上的營養(yǎng)液，分別取每個稀釋度的病毒血清中和物接種于單層細胞上，20 μL/孔。每個稀釋度接5孔，置37℃、CO2培養(yǎng)箱中吸附1 h。吸附后的細胞單層上加維持液，180 μL/孔，置37℃、CO2培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)，每天觀察2 次，至96 h，記錄細胞病變情況，按Reed-Muench法計算出每個血清樣品的中和保護效價，然后計算 5個血清樣品中和保護效價的平均數(shù)，即為該采血日齡血清的中和抗體效價(GMT 值)。

1.2.5 法氏囊B淋巴細胞增殖試驗

參照文獻[7]的方法，在96孔微量培養(yǎng)板上，每孔加入50 μL含600 ng/mL PMA的RPMI-1640培養(yǎng)液(對照孔只加RPMI-1640培養(yǎng)液)，再取50 μL各法氏囊淋巴細胞懸液于每個孔內(nèi)(PMA終濃度為300 ng/mL)，每個樣品加2孔，5% CO2培養(yǎng)箱40℃培養(yǎng)21 h后，加入10 μL MTT(5 g/L)繼續(xù)培養(yǎng)3 h，再加入10% SDS-0.01 moL/L HCl溶液100 μL，吹打混勻，繼續(xù)培養(yǎng) 2 h后，以對照孔調(diào)零，在酶標儀上測定570 nm時各孔的OD570值。

1.2.6 胸腺T淋巴細胞增殖試驗

參照文獻[8]和[9]的方法，在 96 孔微量培養(yǎng)板上，每孔加入50 μL含40 mg/L ConA的RPMI-1640培養(yǎng)液(對照孔只加RPMI1640培養(yǎng)液)，再取各胸腺淋巴細胞懸液50 μL于每個孔內(nèi)(ConA終濃度為20 μg/mL)，每個樣品加 2 孔，5% CO2培養(yǎng)箱 40℃培養(yǎng)48 h后，加入10 μL MTT(5 g/L)繼續(xù)培養(yǎng)3 h，再加入 10% SDS-0.01 mol/L HCl溶液 100 μL，吹打混勻，繼續(xù)培養(yǎng) 2 h后，以對照孔調(diào)零，在酶標儀上測定570 nm時各孔的OD570值。

1.2.7 血清中IL-4和IFN- γ的測定

二次加強免疫后1 周分離血清檢測免疫后雞血清中IL-4和IFN-γ的含量，應(yīng)用商品化的雞細胞因子試劑盒檢測。按試劑盒說明書進行操作。每次分析時，使用對照的重組細胞因子標準品繪制標準曲線，通過標準曲線來計算血清樣品中細胞因子的含量。

1.2.8 動物攻毒保護試驗

最后一次免疫后1周，試驗組雞各取20只，分別攻擊中國標準強毒株BC6/85株(100 ELD50/只)，同時設(shè)置空白對照組隔離飼養(yǎng)，攻毒后連續(xù)觀察7 d，分別記錄各毒株接種雞7 d內(nèi)的死亡數(shù)，并對7 d后存活雞進行剖檢，稱取各法氏囊、脾臟及總體重，計算法氏囊/體重、脾臟/體重，并觀察病理剖檢變化。

1.2.9 法氏囊病理組織學觀察

取10%甲醛固定后的試驗雞法氏囊，常規(guī)法石蠟包埋、切片，蘇木精-伊紅染色，鏡檢，觀察法氏囊的病理組織學變化。

1.2.10 數(shù)據(jù)分析

采用SPSS 11.5統(tǒng)計軟件對實驗數(shù)據(jù)進行分析，實驗數(shù)據(jù)用±s表示，多組間比較應(yīng)用單因素方差分析(One way-ANOVA)，組間兩兩比較應(yīng)用最小顯著差(LSD)t檢驗，P＜0.05 為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 IBDV VP2抗體和抗體亞型檢測

各免疫組血清抗體效價動態(tài)規(guī)律如圖1所示。首免后7 d內(nèi)各試驗組所誘導產(chǎn)生的抗IBDV血清ELISA抗體效價較低，且相互之間并無明顯差別。各試驗組在首免后3周內(nèi)抗IBDV血清ELISA抗體效價均呈現(xiàn)上升趨勢，第 5周抗體水平達到最高，但rVP2免疫組抗IBDV血清ELISA抗體效價明顯低于其他各試驗組(P＜0.05)。rVP2-IL-2組誘導產(chǎn)生的抗IBDV血清ELISA抗體效價在第1周到第5周內(nèi)均高于rVP2組。且rVP2-IL-2融合蛋白免疫效果接近于疫苗對照組。在整個實驗過程中，正常PBS和IL-2對照組未檢測到抗IBDV特異性抗體。

圖1 各免疫組外周血抗IBDV血清ELISA抗體效價動態(tài)規(guī)律觀察Fig.1 Peripheral blood anti-IBDV ELISA antibody levels of chickens immunized with different vaccines.Data were expressed as the mean ±standard error(S.E.).Statistically significant differences(P＜ 0.05)are indicated with different letters.

相對于 IgG1水平和 IgG2a抗體反應(yīng)(圖2A、2B)，IgG1抗體是 rVP2免疫組雞的主要的抗體亞型，然而，使用 rVP2-IL-2融合蛋白免疫組雞能產(chǎn)生一個平衡的IgG1和IgG2a抗體反應(yīng)。特別是在第2次加強免疫后。觀察到占優(yōu)勢的IgG1和IgG2a抗體的水平，表明IL-2能有助于rVP2-IL-2融合蛋白免疫組雞體產(chǎn)生一個平衡的IgG1和IgG2a抗體反應(yīng)。

2.2 MTT分析

從第一次免疫后第 1、3、5周無菌采取各試驗雞的胸腺、法氏囊，檢測淋巴細胞的增殖情況。結(jié)果顯示(圖3A)，免疫rVP2-IL-2融合蛋白組誘導法氏囊B淋巴細胞增殖能力最強；圖3B顯示rVP2-IL-2免疫組誘導胸腺T淋巴細胞增殖能力最強，其他組依次為rIL-2免疫組、Vaccine免疫組、rVP2免疫組和PBS對照組。

2.3 病毒中和試驗

圖2 IBDV抗體亞型分析Fig.2 Analysis of IBDV IgG isotypes.Prime-boost-boost vaccinations(day 0, day 14 and day 28)were carried out.On day 7(prime), day 21(first boost)and day 35(second boost)sera were taken and VP2-specific immunoglobulin isotypes were analyzed by ELISA.IgG1 and IgG2a titers(Half-Max titer)±standard deviation assayed in triplicates are given.Data shown are representative of two separate experiments.

各試驗組免疫后的中和抗體動態(tài)變化規(guī)律見圖4。各試驗組的血清中和抗體效價均隨時間的推移而穩(wěn)定上升，并在免疫后21 d迅速爬升，至42 d達到峰值。rVP2-IL-2免疫組在 28 d后抗體效價顯著高于 rVP2組(P＜0.05)，在整個試驗的檢測過程中，疫苗組抗體效價顯著高于其他各試驗組(P＜0.05)，但rVP2-IL-2免疫組在免疫后42 d抗體效價略低于疫苗組，但仍有明顯差異(P＜0.05)。

圖3 免疫重組蛋白后的淋巴細胞增值情況Fig.3 Lymphocyte proliferation response of chicken after vaccination with vaccines.Data were expressed as the mean±standard error(S.E.).Standard group is rVP2, **P＜ 0.01,*P＜ 0.05.

圖4 各免疫組誘導的中和抗體動態(tài)變化規(guī)律Fig.4 Neutralization antibody responses of chickens immunized with vaccines.Data were expressed as the mean ±standard error(SE).Statistically significant differences(P＜0.05)are indicated with different letters.

2.4 血清中IL-4和IFN-γ的測定

應(yīng)用定量ELISA對血清中的IL-4和IFN-γ進行定量分析顯示，rVP2-IL-2融合蛋白免疫組誘導IL-4和IFN-γ的分泌在各免疫組最強，差異極顯著(P＜0.01)。其次是rIL-2免疫組，B7 Vaccine免疫組和 rVP2免疫組誘導兩種細胞因子的分泌水平明顯低于rIL-2免疫組，差異顯著(P＜0.05)(圖5)。表明 rVP2-IL-2融合蛋白能有效平衡 Th1(γ-IFN)和Th2(IL-4)類型的細胞免疫反應(yīng)。

圖5 細胞因子檢測Fig.5 Cytokine responses to vaccination.Th1 type Cytokine IFN-γ(pg/mL)and Th2 type Cytokine IL-4(pg/mL)expressed as the mean ±standard error.Data shown are representative of four separate experiments.Standard group is rVP2, ** significant asP＜ 0.01, * significant asP＜ 0.05.

2.5 攻毒試驗結(jié)果

各免疫組于最后一次免疫后1 周，分別攻擊中國標準強毒株BC6/85株(100 ELD50/只)，結(jié)果如表1所示，rVP2組的攻毒保護率僅為 60%，而rVP2-IL-2組為85%，說明rVP2-IL-2融合蛋白的免疫保護效果優(yōu)于單獨的VP2蛋白免疫組。攻毒對照組(PBS組、rIL-2組)均出現(xiàn)IBD典型的臨床癥狀、病理變化和組織學病變。

3 討論

傳統(tǒng)的 IBDV疫苗主要是以刺激機體產(chǎn)生持久的中和抗體為特點。滅活苗或亞單位疫苗主要誘導機體的體液免疫而不是細胞免疫。本實驗通過抗體滴度測定和淋巴細胞增殖試驗結(jié)果顯示，rVP2-IL-2組誘導產(chǎn)生的抗IBDV血清ELISA抗體效價在第1周到第5 周內(nèi)均高于rVP2組。且rVP2-IL-2融合蛋白免疫效果接近于疫苗對照組。這說明ChIL-2能與IBDV VP2蛋白發(fā)揮相互協(xié)同作用，提高VP2誘導的抗IBDV血清ELISA抗體效價。同時，MTT法檢測試驗雞 T、B淋巴細胞對ConA、PMA的反應(yīng)均強于單獨的VP2蛋白免疫組，從接種后第7天開始即與單獨的 VP2蛋白接種組差異明顯(P＜0.05)。rVP2-IL-2融合蛋白免疫雞體的體液免疫應(yīng)答和細胞免疫應(yīng)答水平均明顯高于單獨的 VP2蛋白免疫組，表明細胞因子發(fā)揮了明顯的免疫佐劑效應(yīng)。

表1 各免疫組對強毒株BC6/85的攻擊保護效果比較Table 1 Comparison of protective immune responses of different vaccine immunized chickens challenged by virulent strain BC6/85

抗體亞型測定結(jié)果顯示，相對于 IgG1水平和IgG2a抗體反應(yīng)，IgG1抗體是rVP2免疫組雞的主要的抗體亞型，然而，使用rVP2-IL-2融合蛋白免疫組雞能產(chǎn)生一個占優(yōu)勢的IgG1和IgG2a抗體的水平。IgG2a是 Th1類免疫反應(yīng)代表的抗體分子，其類別轉(zhuǎn)換主要由IFN-γ來實現(xiàn)的，IgG2a與巨噬細胞表面高親和力的FcγR I受體結(jié)合，參與巨噬細胞介導的宿主防御反應(yīng)，巨噬細胞可以直接消除各種異物，殺傷細胞內(nèi)的病原體和腫瘤細胞。而IgG1抗體主要介導吞噬細胞(如肥大細胞和嗜酸性粒細胞)的防御作用。細胞因子 ELISA試驗結(jié)果表明 rVP2-IL-2融合蛋白能有效誘導IFN-γ的分泌。提示rVP2-IL-2融合蛋白有可能是通過 IFN-γ水平的升高來平衡IgG1和IgG2a的分泌水平。細胞因子多為輔助性T細胞分泌。輔助性T細胞(Th細胞)是根據(jù)功能分類的一個T細胞亞群，按分泌的細胞因子不同分為Th0、Thl、Th2三個亞型，Th0細胞是未成熟的前體細胞，既可分泌Thl類細胞因子又可分泌Th2類細胞因子。Th1 細胞偏向于分泌 IL-2、IFN-γ、TNFα/β，介導細胞免疫反應(yīng)和CTL 應(yīng)答，清除細胞內(nèi)細菌和病毒；Th2細胞偏向于分泌IL-4、IL-5、IL-6和IL-10，協(xié)助 B細胞產(chǎn)生 IgE，在體液免疫中起重要作用。Thl、Th2細胞分泌的細胞因子可互相調(diào)控生長分化。Thl 細胞分泌的IFN-γ可抑制Th2細胞增殖；Th2細胞分泌的IL-4、IL-10均可下調(diào)Thl細胞的活性[10-11]，Th1類細胞因子與Th2類細胞因子構(gòu)成了一個相互影響相互制約的免疫網(wǎng)絡(luò)[12]。實驗中用VP2抗原單獨免疫誘導兩種細胞因子的分泌水平較低，而rVP2-IL-2融合蛋白能明顯提高VP2抗原免疫后兩種類型細胞因子的分泌水平，表明 VP2-IL-2融合蛋白能有效平衡Th1和Th2類型的細胞免疫反應(yīng)。

有研究表明，IBDV-VP2特異性抗體水平往往和保護率呈直接的相關(guān)關(guān)系[13-14]。本研究中，免疫rVP2-IL-2融合蛋白的雞群在攻毒前其中和抗體水平比 IBDV活疫苗對照組低，在整個實驗過程中，抗IBDV血清ELISA抗體效價也明顯低于IBDV活疫苗。但其保護效果卻相當。這些結(jié)果提示細胞免疫在IBDV疫苗的保護中也起到了關(guān)鍵作用。

本試驗構(gòu)建的 rVP2-IL-2融合蛋白能有效激發(fā)雞體免疫系統(tǒng)產(chǎn)生抵抗 IBDV強毒攻擊的反應(yīng)，雞體獲得了85%的保護率，表明構(gòu)建的rVP2-IL-2融合蛋白對 IBDV的攻擊具有較好的免疫保護作用。本研究為進一步研制高效的基因工程疫苗用于 IBD的防制奠定了基礎(chǔ)。

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Influence of fusion protein of IBDV VP2 and chicken Interleukin-2 on immune response in chicken

Chen Wang1,2, Zhanqin Zhao1, Chunjie Zhang1, Yichen Liu1, Ke Ding1, Yinju Li1,Xiangchao Cheng1, and Puyan Chen2
1 College of Animal Science and Technology, Henan University of Science and Technology, Luoyang 471003, China 2 Key Laboratory of Animal Disease Diagnosis and Immunology, Nanjing Agricultural University, Nanjing 210095, China

Received:October 10, 2009;Accepted:March 15, 2010

Supported by:Scientific and Technological Project of Henan Province(No.0424050010), Doctor Foundation of Henan University of Science and Technology(No.09001397).

Corresponding author:Chunjie Zhang.Tel/Fax: +86-379-64282905; E-mail: cjzhang@sina.com河南省科技攻關(guān)項目(No.0424050010)，河南科技大學博士基金項目(No.09001397)資助。