秦清明,程 浩,雷嘉耀,李德如,黃群山

(華南農(nóng)業(yè)大學獸醫(yī)學院,廣東廣州510642)

雌激素的主要作用是促進和維持雌性動物性器官和第二性征發(fā)育,對骨骼造血機能也有作用。在小動物臨床,雌激素類藥物主要用于雌犬貓錯配、絕育后尿失禁、誘導發(fā)情等,也用于雄犬貓肛門腺瘤、性欲過盛、前列腺增生等。臨床實踐中發(fā)現(xiàn),給犬注射雌激素會產(chǎn)生骨髓抑制[1-2]、子宮蓄膿[3]等副作用。在用雌二醇和孕酮模擬犬發(fā)情周期的試驗中,作者觀察到了嚴重貧血和廣泛出血癥狀,止血和支持治療沒有改善病情,試驗犬最終死亡。作者再次模擬犬的發(fā)情周期,觀察試驗犬的臨床表現(xiàn),檢測外周血象及骨髓細胞,揭示雌二醇對犬骨髓造血機能的影響,為犬合理使用雌二醇提供參考數(shù)據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗動物 成年雜種雌犬4只,體重12～14 kg,切除卵巢子宮45 d后開始試驗。

1.2 主要試劑 苯甲酸雌二醇注射液,批號061211,杭州動物藥品廠。黃體酮注射液,批號051103,浙江仙琚制藥有限公司。

1.3 方法 肌肉注射苯甲酸雌二醇和黃體酮,模擬犬發(fā)情周期中雌激素和孕酮的變化規(guī)律。苯甲酸雌二醇每天注射量：1～4 d 0.2 mg,5～6 d 0.4 m g,7～10 d 0.6mg,11～18 d 0.4mg。黃體酮每天注射量：5～8 d 0.4 mg,9～12 d 0.8 mg,13～14 d 2m g,15、16 、17、18 d 分別為 6、8、10 mg 和 12 m g,19～39 d 20mg。1～8 d為模擬發(fā)情前期,9～18 d為發(fā)情期,19～39 d發(fā)情間期。

試驗前和試驗開始后每4天取1次血樣,16 d起改為每6天取1次血樣。人工計數(shù)紅細胞、白細胞、血小板和網(wǎng)織紅細胞,用XK-2血紅蛋白儀檢測血紅蛋白含量。

試驗前和12、24、36 d用骨髓穿刺針穿刺股骨,進行骨髓涂片,檢查骨髓中有核細胞的豐度。

2 結果

2.1 臨床觀察 從第14天開始,犬出現(xiàn)不同程度的精神沉郁,末端冰涼,體溫低于37.5℃,可視黏膜蒼白,呼吸短促,鞏膜有出血點,齒齦出血不止,嘴角自發(fā)性血腫,兩前肢腫大,皮膚有出血斑點,3只犬分別于22、32、37 d死亡。1只較強壯犬停藥后2周出血和浮腫癥狀慢慢消失,精神和食欲有所改善,但仍表現(xiàn)黏膜蒼白,呼吸短促,停藥后2月死亡。剖檢發(fā)現(xiàn)內(nèi)臟器官和肌肉廣泛性出血。

2.2 外周血象 試驗前期白細胞數(shù)升高,16 d時最高達到23.67×109±13.43×109/L。16 d后血液開始變稀,白細胞數(shù)、紅細胞數(shù)、血小板數(shù)、血紅蛋白含量和網(wǎng)織紅細胞百分數(shù)均呈進行性下降,28 d時血液稀薄如水。紅細胞數(shù)最低降到2.79×1012±1.55×1012/L,白細胞數(shù)最低7.97×109±4.63×109/L(表1)。

表1 試驗犬外周血象變化 (±SD)

表1 試驗犬外周血象變化 (±SD)

天數(shù) 白細胞(109/L) 紅細胞(1012/L) 血小板(1011/L) 血紅蛋白(g/dL) 網(wǎng)織紅細胞(%)0 15.25±3.07 5.58±0.21 5.93±1.64 10.93±1.56 2.0±0.25 4 23.45±3.43 5.30±0.31 5.90±1.50 - -8 19.27±9.91 5.31±0.38 5.80±1.82 - -12 17.89±8.77 4.75±1.21 5.23±1.53 9.82±2.03 1.8±0.32 16 23.67±13.43 4.55±1.26 4.50±1.68 - -22 18.65±3.17 3.53±1.57 3.73±1.54 4.85±2.43 0.3±0.21 28 12.38±0.76 3.75±0.94 2.53±1.46 - -34 7.97±4.63 2.79±1.55 1.90±1.06 - -

2.3 骨髓細胞 試驗前骨髓中有許多有核細胞,試驗開始后有核細胞進行性減少,脂肪組織所占比例增加,24 d有核細胞數(shù)急劇減少,36 d脂肪滴增多,有核細胞幾乎消失(圖1)。

3 討論

雌激素是獸醫(yī)臨床實踐中經(jīng)常使用的藥物,不同動物的骨髓造血機能對雌激素的敏感性有較大的差異。雪貂對雌激素非常敏感,有時持續(xù)性發(fā)情就會導致骨髓細胞再生不良[4];犬對雌激素也比較敏感,不同年齡、性別的犬對雌激素的敏感性有較大差異[5],使用不當會導致嚴重的再生障礙性貧血[1-2],甚至患睪丸支持細胞腫瘤的雄犬也有發(fā)生再生障礙性貧血的記錄[6]。給嚙齒類動物注射雌激素可引起血液學改變,但貧血癥狀沒有犬嚴重。貓則表現(xiàn)出很強的雌激素毒性耐受性[4]。

圖 1 骨髓穿刺涂片(瑞-姬氏染色×200)

犬的雌激素毒性反應首先是白細胞短暫性增多,隨后發(fā)展成為全血細胞減少癥。在本試驗中,試驗犬的白細胞數(shù)在第16天最高,達到23.67×109±13.43×109/L,此后白細胞數(shù)呈進行性下降。白細胞數(shù)升高可能是雌激素促進了骨髓細胞的成熟與釋放[6]。試驗犬全血細胞在16 d后表現(xiàn)出進行性下降,提示發(fā)生了血液生成障礙和/或失血。試驗犬網(wǎng)織紅細胞計數(shù)從2.0%±0.25%下降到0.3%±0.21%,反映骨髓造血機能受到嚴重抑制;骨髓有核細胞數(shù)明顯減少,脂肪組織成分增多,進一步表明骨髓細胞的增殖活動受到嚴重抑制。試驗犬血液第16天變稀、第28天稀薄如水,紅細胞數(shù)下降到3.75×1012±0.94×1012/L。試驗犬全血細胞進行性下降,同時表現(xiàn)骨髓造血功能障礙,推測雌激素對犬骨髓具有明顯的抑制作用,引起了再生障礙性貧血,表現(xiàn)為各類血細胞顯著減少。骨髓中原始粒細胞的增殖分化,先經(jīng)過早幼粒細胞和中幼粒細胞,后成為晚幼粒細胞,此后再進入血液循環(huán)發(fā)揮生理作用,這個過程大概需要14 d,這與試驗犬白細胞數(shù)下降的時間相符。試驗犬血小板減少明顯,最低降到1.9×1011±1.06×1011/L。血小板減少引起凝血不良,試驗犬表現(xiàn)廣泛性內(nèi)出血,體表可見鞏膜出血,皮膚出現(xiàn)淤血斑點,出血進一步加重了貧血的嚴重程度。3只試驗犬分別在試驗的第22、32、37天死亡,說明不同個體犬對雌激素的敏感性有差異;那只強壯犬在停藥后仍表現(xiàn)黏膜蒼白,呼吸困難,并于停藥后2個月死亡,表明骨髓造血機能最終沒有恢復。孕酮能降低雌激素受體的數(shù)量[7],從而可以降低機體對雌激素的敏感性。盡管試驗中一直在使用孕酮,或許能在一定程度上減輕雌激素的毒性作用,但雌激素的毒性作用仍然明顯。鑒于雌激素對犬骨髓造血機能具有明顯的毒性作用,給犬使用雌激素要劑量低和療程短。

雌激素引起犬再生障礙性貧血的機理尚還不完全清楚。雌激素不能直接損害鼠的骨髓粒-單細胞系造血祖細胞,而是刺激胸腺細胞產(chǎn)生一種抑制骨髓細胞增殖因子[8]。與此類似,雌激素能夠刺激體外培養(yǎng)的犬胸腺細胞產(chǎn)生一種抑制骨髓細胞增殖的因子,用雌激素直接處理犬骨髓細胞并不引起顯著的抑制作用[9]。這些發(fā)現(xiàn)表明,犬對雌激素的高敏感性可能是雌激素刺激胸腺產(chǎn)生了骨髓抑制性的介質。注射雌激素后,犬血清里很快出現(xiàn)胸腺細胞產(chǎn)生的骨髓抑制因子,這種因子可能在雌激素誘導的骨髓抑制中發(fā)揮關鍵作用[10]。

[1] H all E J.Use of lithium fo r treatment of estrogen-induced bonemarrow hypoplasia in a dog[J].Jou rnal of the American Veterinary M edical Association,1992,200(6)：814-816.

[2] Teske E.Estrogen-induced bonemarrow toxicity[M]//K irk's Cur rent Veterinary Therapy IX.Small Anim al Practice.Bonagu ra J D,K irk R W.Philadelphia：W B Saunders,1989：495-498.

[3] Whitehead M L.Risk of pyometra in bitches treated for m ismating w ith low doses of oestradiol benzoate[J].Veterinary Record,2008,162(23)：746-747.

[4] HillyerIE V.Ferret endocrinology[M]//Kirk's Current Veterinary Therapy X I.Small Animal Practice.Bonagu ra J D,K irk RW.Philadelphia：W B Saunders,1992：1185-1188.

[5] Suess RP,Barr SC,Sacre B J,et al.Bonemarrow hypoplasia in a fem inized dog with an interstitial cell tumo r[J].Jou rnal of the Am erican Veterinary Medical Association,1992,200(9)：1346-1348.

[6] 吳祖澤,孫伯威,薛惠華,等.3-棕櫚酸-17β-棕櫚酸雌二醇(棕二)對正常狗骨髓CFU-C的作用[J].中國人民解放軍軍事醫(yī)學科學院院刊,1979(1)：1-6.

[7] Dhaliw al G K,England G C W,Noakes D E.Immunocytochem ical localization of oestrogen and progesterone receptors in the uterus of the normal bitch during oestrus and metoestrus[J].Journal of Reproduction and Fertility,1997,51(Suppl)：167-176.

[8] Luster M I,Boorman G A,Koach K S,etal.Mechanisms of estrogen-induced myelotoxicity：evidence of thym ic regulation[J].In ternational Journal of Imm unopharmacology,1984,6(4)：287-297.

[9] FarrisG M,Benjam in S A.Inhibition ofmyelopoiesisby conditioned medium from cultu red canine thym ic cells exposed to estrogen[J].American Jou rnal of Veterinary Research,1993,54(8)：1366-1373.

[10]FarrisG M,Benjam in S A.Inhibition of myelopoiesis by serum fo rm dogs exposed to estrogen[J].Am erican Jou rnal of Veterinary Research,1993,54(8)：1374-1379.