李飛，陳靜，張耀廣，趙建飛，朱宏

（石家莊君樂寶乳業(yè)有限公司質(zhì)量中心，石家莊 050221）

GC-MS檢測乳制品中15種鄰苯二甲酸酯物質(zhì)方法研究

李飛，陳靜，張耀廣，趙建飛，朱宏

（石家莊君樂寶乳業(yè)有限公司質(zhì)量中心，石家莊 050221）

建立了乳制品中鄰苯二甲酸酯的GC-MS測定方法。樣品用正已烷萃取，硅膠固相萃取凈化后，用GC-MS測定：HP-5MS毛細(xì)管管柱分離，定性離子豐度比定性，外標(biāo)法定量離子定量。標(biāo)準(zhǔn)曲線相關(guān)系數(shù)在0.9991～0.9998之間，方法檢出限0.05 mg/kg，平均加標(biāo)回收率在90.67%～107.33%之間，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差在0.94%～3.83%之間，精密度相對標(biāo)準(zhǔn)偏差在3.79%～6.91%之間。結(jié)果表明所建立的方法經(jīng)濟(jì)、準(zhǔn)確、可靠，適用于乳制品鄰苯二甲酸酯的檢測。

GC-MS；乳制品；鄰苯二甲酸酯

0 引 言

鄰苯二甲酸酷類化合物廣泛運(yùn)用于材料、食品等領(lǐng)域中，為人們的生活、工作帶來了極大的便利[1]。然而這些化合物在自然界中原本不存在，且難以降解，對生態(tài)平衡具有破壞作用，通過環(huán)境和食品的污染及生物富集作用與食物鏈，可通過呼吸、飲食和皮膚接觸進(jìn)入人體和動物體內(nèi)[2]。通過物質(zhì)與功能的積蓄對人體健康產(chǎn)生的慢性與遠(yuǎn)期的危害不可忽視[3]。2011年5月28日，網(wǎng)絡(luò)報(bào)道稱臺灣某添加劑廠爆出添加劑中涉嫌摻入塑化劑（鄰苯二甲酸酯類物質(zhì)），事件經(jīng)過幾天發(fā)展，涉及相關(guān)食品達(dá)900多種。2011年6月1日，衛(wèi)生部緊急發(fā)布公告，將鄰苯二甲酸酯類物質(zhì)列入食品中可能違法添加的非食用物質(zhì)和易濫用的食品添加劑名單[4]。

1 實(shí) 驗(yàn)

1.1 儀器與試劑

氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀（Agilent 6850-5975C）；電子天平；超聲波清洗儀；固相萃取裝置；高速離心機(jī)

乙酸乙酯；正己烷（色譜純）；無水硫酸鈉；氯化鈉。

1.2 樣品處理

（1）液態(tài)乳、酸奶、乳飲料。稱取2 g樣品于玻璃離心管中，加入4 mL的正己烷，1 g氯化鈉，20℃水浴超聲萃取15 min。10 000轉(zhuǎn)/min離心5 min，取上清經(jīng)無水硫酸鈉過濾，氮吹濃縮至1 mL，待過柱用。

（2）奶粉。 用40～50℃水按1∶7比例稀釋至為液體，以下按1.2（1）步驟操作。

（3）將1 mL提取液過預(yù)先用乙酸乙酷活化過的500 mg/3 mL的液相硅膠固相萃取小柱進(jìn)行凈化和濃縮富集，上樣完畢后，用3 mL乙酸乙酯洗脫，洗脫速率為1 mL/min，用10 mL氮吹管收集洗脫液，氮吹濃縮至1 mL，過0.45 μm的一次性針筒式微膜過濾器于進(jìn)樣瓶中，可直接進(jìn)樣分析。

1.3 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

15種鄰苯二甲酸酯混標(biāo)質(zhì)量濃度為1 000 mg/L。

鄰苯二甲酸酯標(biāo)準(zhǔn)儲備液：吸取5 mL混標(biāo)正己烷定容至100 mL容量瓶中得到50 μg/mL鄰苯二甲酸酯標(biāo)準(zhǔn)儲備液。

分別吸取1.0，2.0，4.0，8.0，10.0mL標(biāo)準(zhǔn)儲備液正己烷定容至100 mL容量瓶中，得到鄰苯二甲酸酯標(biāo)準(zhǔn)溶液質(zhì)量濃度分別為0.5，1.0，2.0，4.0，5.0 mg/L。

1.4 GC-MS儀器條件

1.4.1 色譜條件

色譜柱：HP-5 MS石英毛細(xì)管柱30 m×0.25 mm（內(nèi)徑）×0.25 μm；進(jìn)樣口溫度：250℃；升溫程序：初始柱溫60℃，保持1 min，以20℃/min升溫至220℃，保持1 min，再以5℃/min升溫至280℃，保持4 min；載氣為氦氣（純度≥99.999%），流速1 mL/min；進(jìn)樣方式為不分流進(jìn)樣；進(jìn)樣量為1 μL。

1.4.2 質(zhì)譜條件

色譜與質(zhì)譜接口溫度：280℃；電離方式：電子轟擊源 （EI），監(jiān)測方式：選擇離子掃描模式（SIM）；電離能量：70eV；溶劑延遲：6 min[5]。

2 結(jié)果與討論

2.1 前處理過程的優(yōu)化

乳制品中含有大量蛋白質(zhì)，加入正己烷提取液后形成乳濁液，本研究加入氯化鈉，使水層與有幾層分離，并通過高速離心得到澄清透明有機(jī)提取液，有利于凈化過程。

2.2 固相萃取柱的選擇

固相萃取中固定相的選擇主要是根據(jù)目標(biāo)化合物的性質(zhì)和基體性質(zhì)。目標(biāo)化的極性與吸附劑的極性非常相似時(shí)，可以得到目標(biāo)化合物的最佳保留。本實(shí)驗(yàn)的提取液為非極性的正己烷，所以選用正相填料的硅膠固相萃取小柱[3]。

2.3 本底的影響

由于鄰苯二甲酸酯類物質(zhì)在環(huán)境中普遍存在，為了減少本底的影響，本實(shí)驗(yàn)選取了玻璃離心管，避免使用塑料容器[6]，溶劑采用色譜純的正己烷，最大程度減少本底的影響。

2.4 色譜柱的選擇

由于鄰苯二甲酸酷類化合物沸點(diǎn)較高，而且15種PAES分子量相差比較大，程序升溫所需要的溫度較高，極性越強(qiáng)的色譜柱能達(dá)到的溫度越低，因此，,選擇弱極性的HP-5 ms（5%的苯基十95%聚二甲基硅氧烷）熔融彈性石英毛細(xì)管柱分離15種PAES，色譜圖如圖1所示。

由圖1可以看出，15種化合物能在26min內(nèi)有效的分開，峰型尖銳，對稱性好，出峰附近都沒干擾峰，各峰間間隔適宜，是理想的色潛檢測條件。

2.5 標(biāo)準(zhǔn)曲線和檢出限（LOD）

取15種鄰苯二甲酸酷的混合標(biāo)準(zhǔn)系列溶液，按照上述第1.4中所述儀器條件進(jìn)行分析，外標(biāo)法定量。每次進(jìn)樣1 μL，平行測定3次，以峰面積Y對質(zhì)量濃度X（mg/L）進(jìn)行線性回歸，回歸方程和相關(guān)系數(shù)如表1所示。

最低檢出限的做法：取質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1mg/kg的標(biāo)準(zhǔn)液，進(jìn)樣1 μL，按公式計(jì)算，得到各組分的最低檢出限（見表1）。

式中：CL為最低檢測限（mg/kg）；C為標(biāo)準(zhǔn)液的質(zhì)量分?jǐn)?shù)（mg/kg）；Nd：基線噪聲峰高；H為標(biāo)準(zhǔn)液色譜峰高；V為進(jìn)樣體積1 μL。

由表1可以得出15種鄰苯二甲酸酯類物質(zhì)在0.5～5.0 mg/kg線性范圍內(nèi)其豐度呈線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)在0.9991～0.9998之間，表明線形良好，符合準(zhǔn)確度的要求。檢出限為0.05 mg/kg。

表1 回歸方程及檢出限

2.6 方法準(zhǔn)確度（樣品回收率）

為了驗(yàn)證方法的準(zhǔn)確度，本論文對樣品進(jìn)行了標(biāo)準(zhǔn)加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)，做3份平行實(shí)驗(yàn)，計(jì)算平均回收率和標(biāo)準(zhǔn)偏差。結(jié)果如表2所示。

由表2可以看出，在空白樣品中添加質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1 mg/kg的15種鄰苯二甲酸酯類混標(biāo)，3次平行試驗(yàn)平均回收率在90.67%～107.33%之間，RSD在0.94%～3.83%之間，其回收率及精密度均符合標(biāo)準(zhǔn)要求。

2.7 方法精密度

精密度是使用特定的分析程序，在受控條件下重復(fù)分析均一樣品所得的測定值之間的一致程度，檢驗(yàn)分析方法的精密度時(shí)，通常以標(biāo)準(zhǔn)溶液、實(shí)際樣品和樣品加標(biāo)3種方法分析樣品。本研究采用標(biāo)準(zhǔn)樣品做精密度實(shí)驗(yàn)，結(jié)果如表3所示。

表2 加標(biāo)回收率結(jié)果%

表3 標(biāo)準(zhǔn)樣品的方法精密度%

由表3可以看出，以質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.5 mg/kg的標(biāo)準(zhǔn)溶液連續(xù)進(jìn)樣5次，所得質(zhì)量分?jǐn)?shù)的平均值在0.486%～0.566%之間，其精密度在3.79%～6.91%之間，精密度符合標(biāo)準(zhǔn)要求。

3 結(jié) 論

本文建立了乳制品中15種鄰苯二甲酸酯的GCMS測定方法。根據(jù)乳制品的特點(diǎn)采用加氯化鈉及高速離心得到澄清提取液，采用玻璃離心管及色譜純試劑最大程度減少了本底的影響。通過加標(biāo)回收率驗(yàn)證了方法的準(zhǔn)確性，重復(fù)性實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證了方法的精密度，結(jié)果表明：標(biāo)準(zhǔn)曲線相關(guān)系數(shù)在0.9991～0.9998之間，方法檢出限為0.05 mg/kg，平均加標(biāo)回收率在90.67%～107.33%之間，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差在0.94-3.83%之間，精密度相對標(biāo)準(zhǔn)偏差在3.79%～6.91%之間?；厥章?、相對標(biāo)準(zhǔn)偏差和精密度都符合相關(guān)要求，可以快速、高效、準(zhǔn)確檢測乳制品中鄰苯二甲酸酯類物質(zhì)。

[1]魏愛雪，徐曉白.環(huán)境污染治理技術(shù)與 設(shè)備，2005，6（7）：90-93.

[2]李文蘭，季宇彬，楊波，等.城市環(huán)境與城市生態(tài),2003,16（1）：22-24.

[3]柴麗月.食品及包裝材料中鄰苯二甲酸醋的檢測與遷移規(guī)律的初步研究[D].南京農(nóng)業(yè)大學(xué)，2008：30-31.

[4]關(guān)于公布食品中可能違法添加的非食用物質(zhì)和易濫用的食品添加劑名單（第六批）的公告.衛(wèi)生部公告2011年第16號[R].

[5]GB/T 21911-2008食品中鄰苯二甲酸酯的測定[S].

[6]徐向華,方曉明,丁卓平，等.高效液相色譜測定牛奶中鄰苯二甲酸酯的方法研究[J].化學(xué)通報(bào),2008（6）：420-424.

Determination of phthalic acid esters in dairy products by GC-MS

LI Fei，CHEN Jing，ZHANG Yao-guang，ZHAO Jian-fei，ZHU Hong
（Shijiazhuang Junlebao Dairy Co.Ltd,Quality Center 050221）

In this paper,a method of GC-MS for detection of 15 phthalic acid esters in Dairy products was be established：The sample was extracted with n-Hexane,then purified by Silica SPE kit,finally detected by GC-MS,it was separated by HP-5MS capillary column,Characterization of ion abundance ratios of qualitative and quantified by external standard method ion quantitation.The correlation coefficient of the standard curve in 0.9991～0.9998,the detection limit of the method are 0.05mg/kg,the average recoveries in 90.67%～107.33%,the relative standard deviation in 0.94-3.83%.The relative standard deviation of precision in 3.79%～6.91%.The results show that the established method is economic,accurate and reliable,applicable to Determination of Phthalic Acid Esters in Dairy products.

GC-MS；dairy products；Phthalic Acid Esters

TS252.7

A

1001-2230（2011）10-0050-04

2011-08-04

李飛（1982-），男，碩士，從事乳制品檢驗(yàn)方法研究。