張春艷，盧華衛(wèi)，鄭書展，劉來俊,白國濤，李紅

（內(nèi)蒙古出入境檢驗(yàn)檢疫局，呼和浩特 010020）

調(diào)制乳中8種合成色素的快速測定

張春艷，盧華衛(wèi)，鄭書展，劉來俊,白國濤，李紅

（內(nèi)蒙古出入境檢驗(yàn)檢疫局，呼和浩特 010020）

以乙腈溶液沉降蛋白并提取樣品中人工合成色素，應(yīng)用反相高效液相色譜—多波長紫外檢測器，外標(biāo)法定量，測定了調(diào)制乳中8種人工合成色素的質(zhì)量濃度。8種人工合成色素質(zhì)量濃度在0.1～10.0 mg/L范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系，r=0.9999,平均加標(biāo)回收率為81.7%～106.0%，CV=0.77%～8.97%。該方法簡便,準(zhǔn)確，重現(xiàn)性好，可用于調(diào)制乳中8種合成色素質(zhì)量濃度的測定。

高效液相色譜法；調(diào)制乳；色素；測定

0 引 言

人工合成色素是由人工合成的、含有一定苯胺的有機(jī)色素。該類色素色澤鮮艷、染色穩(wěn)定，在我國飲料生產(chǎn)中允許限量使用。但事實(shí)上，企業(yè)為追求巨大的經(jīng)濟(jì)利益，使食品中合成色素的超標(biāo)現(xiàn)象時有發(fā)生。為了加強(qiáng)調(diào)制乳合成色素的監(jiān)管，需研制相應(yīng)測試方法。目前文獻(xiàn)報(bào)道的色素測定方法有高效液相色譜法[1-3]、分光光度法[4]等。其樣品處理有的采用吸附與解吸附法，步驟繁瑣，不適合調(diào)制乳快速測定，有的采用直接用水定容，由于調(diào)制乳含有較多蛋白和脂肪，也不適合調(diào)制乳。本實(shí)驗(yàn)用乙腈沉淀樣品蛋白、離心并去除乙腈后，用快速分離柱分離、高效液相色譜儀進(jìn)行測定，建立了調(diào)制乳中8種合成色素的測定方法，具有方法簡便、快捷、回收率高、準(zhǔn)確性好等特點(diǎn)。

1 材料和方法

1.1 儀器與設(shè)備

快速液相色譜儀（1260型），配紫外可見多波長檢測器和在線脫氣機(jī)；超聲波清洗儀（KQ-250E）；離心機(jī)（3K-15型）；氮吹儀（EFGC-11250）；漩渦混勻器；0.45 μm針式濾膜。

1.2 試劑和材料

除另有規(guī)定外，試劑均為分析純，水為去離子水。乙腈（色譜級）；乙酸銨（分析純）；8種標(biāo)準(zhǔn)儲備液（1 000 mg/L）：稱檸檬黃、新紅、莧菜黃、胭脂紅、日落黃、誘惑紅、酸性紅、亮藍(lán)各0.025 g，分別用水定容于25 mL容量瓶；標(biāo)準(zhǔn)混和使用液（100 mg/L）：分取上述8種標(biāo)準(zhǔn)儲備液1.0 mL標(biāo)準(zhǔn)儲備液于10.0 mL容量瓶，用水定容。

1.3 色譜條件

色譜柱：ZORBAX SB-C18柱，50 mm×4.6 mm i.d，1.8-Micron。 流動相為乙腈︰乙酸銨初始濃度5%：95%，梯度洗脫，0～2 min,5%乙腈；2～10 min，5%～60%乙腈；10～10.5；60%～5%乙腈；10.5～13min,5%乙腈。,流速為0.5 mL/min；柱溫為30℃；進(jìn)樣量為10 L；測定波長檸檬黃410 nm，新紅、莧菜紅、胭脂紅、日落黃、誘惑紅、赤蘚紅、酸性紅520 nm、亮藍(lán)630 nm。

1.4 操作步驟

1.4.1 樣品提取

準(zhǔn)確稱取10 g（精確至0.01 g）調(diào)制乳，置于25 mL容量瓶中，加入15 mL乙腈，混勻，用水定容后，超聲提取10 min，以10 000 r/min離心10 min，移取2 mL上清液于帶刻度試管，于40℃下氮吹至乙腈全部除凈,用水定容至2 mL，過0.45 μm針式濾膜，上機(jī)測定。

2 結(jié)果與討論

2.1 樣品提取、衍生條件的選擇

據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道[3]，食品中如碳酸飲料、果汁等，可采用直接趕二氧化碳，用水提取，離心，定容。通過實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，由于調(diào)制乳本身含有較多蛋白質(zhì)、脂肪，直接提取不適合該類產(chǎn)品。也有文獻(xiàn)報(bào)道[1]，復(fù)雜的食品樣品采用尼龍66吸附-解附的方法提取色素，該種前處理時間長，不適于快速測定。本法利用乙腈、三氯乙酸溶液能夠沉降蛋白的作用，使干擾物質(zhì)快速沉降，達(dá)到快速處理樣品。在實(shí)驗(yàn)中，分別試驗(yàn)了在10 g調(diào)制乳中加入15 mL、10 mL、5mL乙腈、1 mL乙腈及用1%三氯乙酸等方式沉降蛋白，通過超聲提取，發(fā)現(xiàn)采用15mL乙腈沉降蛋白效果最佳，溶液澄清，且色素回收率最高，而用三氯乙酸提取，色素回收率幾乎為零。同時在實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，樣品溶液中含有乙腈會導(dǎo)致色素峰在色譜柱分離上存在較大位移，因此采用在樣品中蛋白被乙腈沉降色素被提取后，用氮吹將乙腈除去，再進(jìn)行檢測效果最佳。

2.2 分析條件的選擇

2.2.1 色譜柱的選擇

目前通常采用的色譜柱均為普通C18柱，本研究針對ZORBAX SB-C18柱，250 mm×4.6 mm i.d，5-Micron柱和50 mm×4.6 mm i.d，1.8-Micron柱測試進(jìn)行比較，發(fā)現(xiàn)采用50 mm×4.6 mm i.d，1.8-Micron柱，可達(dá)到較好分離，且分析時間短的特點(diǎn)，測試一個樣品只需13分。，而250 mm柱則每測試一個樣品需25 min左右，因此，采用50 mm×4.6 mm i.d，1.8-Micron柱可達(dá)到快速測試作用。

2.2.2 流動相的選擇

乙酸銨溶液和乙腈、乙酸銨溶液和甲醇體系是應(yīng)用于色素測定較為廣泛的流動相，據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道[1-3]，測定色素通常采用甲醇︰0.02 mol/L乙酸銨，也有用乙腈︰0.1 mol/L乙酸銨,流動相體系，本研究通過對上述流動相體系實(shí)驗(yàn)對比，發(fā)現(xiàn)乙腈-乙酸銨體系可使各組分較快分離，達(dá)到快速檢測，而甲醇-乙酸銨體系要慢近3 min作用。同時本實(shí)驗(yàn)也對乙腈與不同濃度的乙酸銨體系 （0.01,0.02,0.05,0.1 mol/L）進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)，當(dāng)乙酸銨濃度增加時，各色素出峰時間向后推移，通過綜合比較，采用乙腈︰濃度為0.05 mol/L乙酸銨溶液=5%︰95%作為流動相，梯度洗脫0～2 min,5%乙腈，2～10 min：5%～60%乙腈，最佳。

2.2.3 檢測波長的選擇

文獻(xiàn)報(bào)道，色素測試多數(shù)采用250 nm,但也有采用410,520，630 nm,本法經(jīng)采用質(zhì)量濃度為1mg/L標(biāo)液，通過多波長監(jiān)測，對各種色素波長吸收進(jìn)行監(jiān)測。試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，所有色素在250 nm處均有吸收，但樣品雜質(zhì)在其相應(yīng)處同樣有吸收，干擾極大，甚至?xí)?dǎo)致誤識，影響測試。而在410,520，630 nm處，樣品中干擾峰極少,通過比較，確定檸檬黃采用410 nm，新紅、莧菜黃、胭脂紅、日落黃、誘惑紅、酸性紅、赤蘚紅采用520 nm,亮藍(lán)采用630 nm可獲得較好的測試值。

3.1 方法的線性范圍和檢出限

分別配制質(zhì)量 濃度為0.1，0.25，0.5，1.0，2.50，5.0，10.0 mg/L的8種色素系列混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，在選定的色譜條件下進(jìn)行測定，進(jìn)樣量10 μL，用峰面積與標(biāo)準(zhǔn)工作溶液對各組分的絕對量做圖。發(fā)現(xiàn)標(biāo)液在0.1～10.0 mg/L的范圍內(nèi)呈線性關(guān)系，8種合成色素0.1 mg/L吸收峰的信噪比（S/N）、檢出限結(jié)果如表1所示。8種合成色素標(biāo)準(zhǔn)色譜圖如圖1所示。

表1 方法的線性范圍和檢出限

表2 調(diào)制奶樣品添加回收率和精密度結(jié)果（n=6）%

3.2 方法的精密度和回收率

為了評價方法的準(zhǔn)確度及精密度，用不含色素的調(diào)制奶樣品中分別進(jìn)行0.25，1.25，2.5 mg/kg（均為質(zhì)量分?jǐn)?shù)，下同）3個水平的添加回收率和6次平行測定精密度實(shí)驗(yàn)。結(jié)果如表2所示。由表2可以看出，本方法的平均回收率為81.7%～106.0%，變異系數(shù)為0.77%～8.97%。

[1]李娜.快速液相色譜法測定食品中11種合成著色劑[J].分析檢測，2009，30（01）：313-312.

[2]食品中合成著色劑的測定（GB/T 5009.35-2003）[S].

[3]食品中的誘惑紅、酸性紅、亮藍(lán)、日落黃的測定（SN/T 1743-2006）[S].

[4]許路貴.多波長分光光度法測定食品中的合成色素[J].現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學(xué)，2002，29（5）：715-716

Quickly determination of eight kinds of synthetical pigmentsin blend milk

ZHANG Chun-yan,LU Hua-wei,ZHENG Shu-zhan,LIU Lai-jun,BAI Guo-tao,LI Hong
（Inner Mongolia Entry-Exit Inspection and Quarantine Bureau,Huhhot 010020，China）

Protein in blend milk was coagulated by CH3CN and eight kinds of synthetical pigments in blend milk was purified,the solution was determined by HPLC-DAD.Results showed the linearity of eight kind of synthetical pigments was in the range of 0.1～10.0 mg/L,r=0.9999.The average recovery was in the range of 81.7%～106.0%,CV was between 0.77%and 8.97%.This method was quickly and accurate with good reproducibility and can be used for the determination of eight kinds of synthetical pigments in blend milk.

HPLC；blend milk；synthetical pigment；determintion

TS252.7

A

1001-2230（2011）10-0048-02

2011-07-04

張春艷（1969-），女，高級工程師，從事食品、乳制品的檢驗(yàn)與研究工作。