金辛鎮(zhèn)痛液對(duì)急性血瘀證大鼠PGF1α及TXB2的影響*

張紅星 黃國(guó)付 祁 青 易艷東 林世和周 利鄒 燃安 雪唐 雷

1湖北省武漢市中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院（湖北武漢430022）

2湖北中醫(yī)藥大學(xué)（湖北武漢430065）

金辛鎮(zhèn)痛液是武漢市中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院中藥外用制劑，主要成分為洋金花、細(xì)辛、乙醇等。其對(duì)動(dòng)物急慢性炎癥、疼痛模型有明顯的抗炎、鎮(zhèn)痛作用［1］，臨床應(yīng)用于痹證的關(guān)節(jié)、肌肉、筋骨疼痛等療效確切［2］。本研究在前期基礎(chǔ)上通過(guò)建立急性血瘀證模型，觀察其對(duì)大鼠血液流變學(xué)指標(biāo)和血漿前列腺素F1α（PGF1α）、血栓素 B2（TXB2）的影響。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物 SPF級(jí)SD大鼠（雌雄各半，體質(zhì)量180～220g），由武漢大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供，許可證號(hào)：SCXK（鄂）2008-0004，合格證號(hào)為00008546。

1.2 藥物與試劑 金辛鎮(zhèn)痛液由武漢市中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院制劑中心提供，批號(hào)：051106；鹽酸腎上腺素注射液（武漢遠(yuǎn)大制藥集團(tuán)有限公司，批號(hào)：H42021700）；麝香舒活精（黃石飛云制藥有限公司，批號(hào)：050701）；肝素（萬(wàn)邦醫(yī)藥，批號(hào)：H32020612）；PGF1α和TXB2試劑盒均由武漢華瑞康生物試劑有限公司提供。

1.3 分組及給藥 取大鼠60只，采用隨機(jī)數(shù)字表法分為正常對(duì)照組，模型對(duì)照組，麝香舒活精組，金辛鎮(zhèn)痛液低劑量組（100%金辛鎮(zhèn)痛液）、中劑量組（200%金辛鎮(zhèn)痛液）、高劑量組（400%金辛鎮(zhèn)痛液），每組10只。各組大鼠在乙醚淺麻下常規(guī)方法背部脫毛，面積約8cm2。第2日于脫毛區(qū)涂以相應(yīng)藥物，每只大鼠用藥0.5mL/100g，每日2次，連續(xù)給藥5d。

1.4 造模及采血 于第6日第1次給藥后1h，除正常對(duì)照組外，其余各組均于皮下注射鹽酸腎上腺素0.08mL/100g，共2次，兩次間隔4h。在第1次注射鹽酸腎上腺素后2h將大鼠浸入冰水中游泳5min，以造成急性血瘀證模型［3］。造模后將所有大鼠禁食12h，次日晨用10%水合氯醛0.03mL/100g腹腔注射麻醉，腹主動(dòng)脈采血。

1.5 觀察指標(biāo) （1）血液流變學(xué)指標(biāo)測(cè)定：取血5mL肝素抗凝，進(jìn)行全血黏度切變率（1.00，5.00，30.00，200.00）、血漿黏度、紅細(xì)胞聚集指數(shù)、全血高切相對(duì)指數(shù)、全血低切相對(duì)指數(shù)的檢測(cè)。（2）血漿 PGF1α 和 TXB2測(cè)定：取血 2mL，3000r/min，離心 10min分離血漿，采用酶聯(lián)免疫法（ELISA）測(cè)定血漿PGF1α和 TXB2含量。全部樣品測(cè)定均由專人負(fù)責(zé)，并嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書(shū)所提供的方法操作。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 應(yīng)用SPSS17.0軟件，計(jì)量資料以 （x±s）表示，組間差異比較采用單因素方差分析法。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 金辛鎮(zhèn)痛液對(duì)血瘀證模型大鼠血液流變學(xué)的影響 見(jiàn)表1。模型組與正常組比較，血液流變學(xué)指標(biāo)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P＜0.01），結(jié)合生物表征，血瘀證模型成立。金辛鎮(zhèn)痛液3個(gè)劑量組和麝香舒活精組均能不同程度改善血液流變學(xué)指標(biāo)，且與模型組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05或0.01）；金辛鎮(zhèn)痛液組與麝香舒活精組相比無(wú)明顯差異；提示金辛鎮(zhèn)痛液有改善急性血瘀證大鼠血液流變學(xué)的作用，降低血液濃、黏、聚、凝狀態(tài)。

表1 各組大鼠血液流變學(xué)指標(biāo)比較

表1 各組大鼠血液流變學(xué)指標(biāo)比較

與正常組比較，*P＜0.01；與模型組比較，△P＜0.05，△△P＜0.01。 下同。

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2.2 金辛鎮(zhèn)痛液對(duì)血瘀證模型大鼠血漿PGF1α和TXB2的影響 見(jiàn)表2。與正常組比較，模型組大鼠血漿PGF1α的含量明顯減少，而TXB2含量明顯增加，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。金辛鎮(zhèn)痛液3個(gè)劑量組和麝香舒活精組均能提高PGF1α的含量，降低TXB2的含量，TXB2/PGF1α值明顯改善，與模型對(duì)照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05或0.01）。提示金辛鎮(zhèn)痛液能調(diào)節(jié)PGF1α/TXB2平衡，改善血瘀狀態(tài)。金辛鎮(zhèn)痛液高劑量組TXB2水平和麝香舒活精組相比，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。提示金辛鎮(zhèn)痛液組與麝香舒活精組效果大致相等。

表2 各組血漿PGF1α和TXB2含量比較（）

表2 各組血漿PGF1α和TXB2含量比較（）

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3 討 論

中醫(yī)學(xué)認(rèn)為寒凝等病因所致血行不暢，停遏于經(jīng)脈之內(nèi)及瘀積于臟腑組織器官均稱為瘀血。故根據(jù)寒凝則血瘀理論，本研究以冰水浴刺激結(jié)合皮下注射腎上腺素造成血瘀證模型。腎上腺素為α、β受體興奮劑，具有收縮外周血管和增加心臟收縮力的作用，與冰水浴刺激結(jié)合，可使外周血管強(qiáng)烈收縮，心臟后負(fù)荷增加，心肌耗氧代謝增加，心功能逐漸下降，從而使血液運(yùn)行障礙，血液黏度增加，形成瘀血的病理改變［3］，從而建立急性血瘀證模型。實(shí)驗(yàn)研究表明血瘀證與血液循環(huán)障礙和內(nèi)皮功能、血液濃黏聚凝滯狀態(tài)、血小板活化和黏附聚集、組織細(xì)胞代謝異常、免疫功能障礙等多種生理病理改變有很大關(guān)聯(lián)，血液流變學(xué)指標(biāo)異常為診斷血瘀證的重要客觀指標(biāo)［4］。同時(shí)有研究表明，血栓素 A2（TXA2）、前列腺素（PGI2）代謝平衡在血瘀證發(fā)病中起著重要作用［5］。TXA2為血小板激活劑，是目前已知的最強(qiáng)的縮血管物質(zhì)和血小板聚集劑之一，能促進(jìn)血栓的形成，并誘導(dǎo)白細(xì)胞趨化、聚集，參與炎癥反應(yīng)及組織損傷；PGI2是血小板功能抑制物，是最強(qiáng)的內(nèi)源性血小板聚集抑制劑和血管擴(kuò)張劑，對(duì)血小板聚集引起的血管痙攣有保護(hù)作用。正常狀態(tài)下，TXA2、PGI2的產(chǎn)生和釋放處于動(dòng)態(tài)平衡，以防止血小板在血管壁上黏附和血小板的自發(fā)性聚集，保持血管活力，維持血小板及其他細(xì)胞機(jī)能，防止血栓形成［6］。當(dāng)內(nèi)皮細(xì)胞損傷后，血小板被激活，TXA2產(chǎn)生增多，其通過(guò)抑制腺苷酸環(huán)化酶使血小板和血管壁平滑肌內(nèi)環(huán)磷腺苷（cAMP）減少，或者作為Ca2+載體直接促進(jìn)Ca2+內(nèi)流和致密管系統(tǒng)的Ca2+釋放，從而促進(jìn)血小板聚積和局部血管收縮，加重內(nèi)皮損傷。鄰近的正常血管內(nèi)皮細(xì)胞能利用血小板釋放的前列腺素環(huán)內(nèi)過(guò)氧化物來(lái)增加PGI2合成。PGI2通過(guò)興奮腺苷酸環(huán)化酶，增加cAMP濃度，起到擴(kuò)張血管、限制血小板聚積和保護(hù)受損內(nèi)皮的作用［7］。若TXA2/PGI2調(diào)節(jié)發(fā)生紊亂，能明顯影響凝血與抗凝血的平衡，導(dǎo)致脈絡(luò)瘀阻。血栓素A2（TXA2）、前列腺素（PGI2）均系前列腺素代謝衍生物，二者在體內(nèi)極為不穩(wěn)定，TXA2于30s、PGI2于3min后分別降解為無(wú)活性的 TXB2及 6-keto-PGF1α，因此血漿TXA2和PGI2的含量水平變化可通過(guò)檢測(cè)TXB2和6-keto-PGF1α的含量來(lái)反映。

在本研究中，金辛鎮(zhèn)痛液低中高劑量組、麝香舒活精組均能不同程度地降低大鼠血液流變學(xué)指標(biāo)，使大鼠血漿TXB2含量減少和PGF1α含量明顯增多，TXB2/PGF1α比值相應(yīng)增高。這些指標(biāo)的變化提示金辛鎮(zhèn)痛液對(duì)血瘀證模型大鼠有著明顯的活血化瘀作用，抑制TXB2釋放，促進(jìn)PGF1α分泌，糾正 TXB2/PGF1α平衡，從而抑制了血小板的聚集和炎癥介質(zhì)活性，可能是其發(fā)揮抗血栓形成作用機(jī)制之一，但是其發(fā)揮作用的物質(zhì)基礎(chǔ)和深層機(jī)理有待于進(jìn)一步研究。

［1］ 張紅星，易艷東，劉倩，等.金辛鎮(zhèn)痛噴霧劑抗炎鎮(zhèn)痛作用的實(shí)驗(yàn)研究［J］.湖北中醫(yī)雜志，2006，28（7）：10-11.

［2］ 張紅星，鄒燃，黃國(guó)付，等.中藥離子滲透治療腰椎間盤突出癥療效觀察［J］.湖北中醫(yī)雜志，2009，31（1）：13-14.

［3］ 苗明三，朱飛鵬.常用醫(yī)藥研究動(dòng)物模型［M］.北京：人民衛(wèi)生出版社，2007：438-439.

［4］ 中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合研究會(huì).血瘀證的診斷標(biāo)準(zhǔn)［J］.中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合雜志，1987，7（3）：129.

［5］ 鄭健，吳群勵(lì)，鄭建洵，等.腎康靈對(duì)阿霉素腎病大鼠血栓素B2和6-酮-前列腺素 F1α 的影響［J］.中醫(yī)雜志，2004，45（8）：619-622.

［6］ 陳志強(qiáng)，范煥芳，郭登洲，等.化瘀通絡(luò)中藥對(duì)MsPGN大鼠血栓素B2及6-酮前列腺素F1α表達(dá)的影響［J］.中國(guó)中醫(yī)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)雜志，2009，15（3）：197-199.

［7］ 王昕，姚凝，劉健鴻，等.舒經(jīng)玫瑰膠囊對(duì)小鼠原發(fā)性痛經(jīng)血漿血栓素B2、6-酮-前列腺素 F1α 的影響［J］.中國(guó)中醫(yī)藥信息雜志，2008，15（6）：41-42.