高 艷 張險峰

(1黃石理工學(xué)院醫(yī)學(xué)院,湖北黃石 435003; 2黃石市中心醫(yī)院消化內(nèi)科,湖北黃石 435000)

結(jié)腸癌是消化道常見惡性腫瘤,主要死亡原因是腫瘤的浸潤和轉(zhuǎn)移。結(jié)腸癌的侵襲和轉(zhuǎn)移的發(fā)生是一個多基因、多因子共同作用的結(jié)果,主要涉及多種相關(guān)癌基因的激活和(或)轉(zhuǎn)移抑制相關(guān)基因的失活。本實驗采用免疫組化法檢測c-erb B-2、bcl-2和nm23蛋白在結(jié)腸癌組織中的表達,并分析其與結(jié)腸癌各臨床病理參數(shù)的關(guān)系,以期闡述其在結(jié)腸癌的發(fā)生發(fā)展和浸潤轉(zhuǎn)移中的作用。

1 材料與方法

1.1 資料

1.1.1 標本

收集 2007年 -2010年黃石市中心醫(yī)院 45例結(jié)腸癌患者行根治手術(shù)切除獲得的結(jié)腸癌組織標本。45例結(jié)腸癌患者中男 27例,女 18例,年齡(47.5±16.2)歲;TMN分期采用美國癌癥聯(lián)合委員會標準。本組病例術(shù)前均未行化療和放療;所獲標本均經(jīng) 10%甲醛固定,石蠟包埋,4μm連續(xù)切片,HE染色證實為結(jié)腸癌。

1.1.2 主要試劑

兔抗c-erb B-2單克隆抗體購自Santa-Cruz Biotechnology公司,bcl-2抗體購自福建邁新生物公司,nm 23抗體購自博士德公司, S-P試劑盒、DAB試劑盒購自北京中山生物技術(shù)有限公司。

1.2 方法

采用免疫組化S-P法檢測45例結(jié)腸癌組織中c-erb B-2、bcl-2和nm 23蛋白的表達,實驗步驟嚴格按照說明書進行。并用已知結(jié)腸癌標本作陽性對照,以PBS代替一抗作陰性對照。

1.3 結(jié)果判斷

c-erb B-2以細胞膜或細胞漿呈棕色顆粒為表達陽性,bcl-2以細胞漿或細胞膜染成棕黃色為陽性,nm 23蛋白染色均以細胞質(zhì)內(nèi)呈棕黃色或黃色顆粒且明顯高于背景者為陽性。采用雙評分半定量法評分:＜25%細胞陽性為 0分,25% ～50%細胞陽性為 1分, 51%～75%細胞陽性為 2分,＞75%細胞陽性為 3分。顯色度按細胞顯色的有無及深淺評分:細胞無顯色為 0分,淺黃色為 1分,棕黃色為 2分,棕褐色為 3分。然后根據(jù) 2項之和判斷結(jié)果,0～2分為(-),3～4分為(+),5～6分為(++)。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理

采用SPSS16.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計分析,計數(shù)資料比較采用 χ2檢驗,相關(guān)性分析采用Spearman相關(guān)分析,檢驗水準α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 c-erb B-2、bcl-2和nm23蛋白在結(jié)腸癌組織中的表達

c-erb B-2、bcl-2及nm23蛋白在結(jié)腸癌組織中的陽性表達分別為 20、30、27例,陽性率分別為44.4%、66.7%、60%。c-erb B -2在結(jié)腸癌中表達,細胞漿呈棕色顆粒(圖1);bcl-2在結(jié)腸癌中表達,細胞漿呈棕色顆粒(圖2);nm 23蛋白在結(jié)腸癌中表達,細胞漿呈棕色顆粒(圖3)。

圖1 c-erb B-2在結(jié)腸癌中表達,細胞漿呈棕色顆粒(200×)

圖2 bcl-2在結(jié)腸癌中表達,細胞漿呈棕色顆粒(200×)

圖3 nm23蛋白在結(jié)腸癌中表達,細胞漿呈棕色顆粒(200×)

2.2 c-erb B-2、bcl-2和nm23蛋白在結(jié)腸癌組織中表達的意義

c-erb B-2、bcl-2及nm23蛋白在結(jié)腸癌組織中的表達及其與各臨床病理參數(shù)之間的關(guān)系見表1。bcl-2、nm23蛋白的表達與結(jié)腸癌腫塊大小無關(guān)(P＞0.05),c-erb B-2的表達與結(jié)腸癌腫塊大小相關(guān)(P＜0.01);c -erb B-2、bcl-2與分化程度相關(guān),nm23蛋白表達與腫瘤分化程度無關(guān)(P＞0.05);cerb B-2、bcl-2、nm23蛋白表達與腫瘤浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和遠隔轉(zhuǎn)移有關(guān)。

表1 結(jié)腸癌中c-erb B-2、bcl-2及nm23蛋白的表達與各臨床病理參數(shù)的關(guān)系

3 討論

原癌基因c-erb B-2位于常染色體17q21,其基因編碼產(chǎn)物為一跨細胞膜蛋白P185,它同表皮生長因子 EGFR具有高度同源性,并具有酪氨酸激酶活性,腫瘤細胞中 cerb B-2的擴增和表達提示預(yù)后不良。Lee等報道c-erb B-2表達與臨床病理有密切關(guān)系[1];Kay等發(fā)現(xiàn)在乳腺癌、宮頸癌、胃癌中 c -erb B-2表達與預(yù)后不良有關(guān)[2];Yang等發(fā)現(xiàn)結(jié)腸癌肝轉(zhuǎn)移患者c-erb B-2蛋白表達升高[3]。乳腺癌、結(jié)腸癌、小細胞肺癌中 c-erb B-2已成為標志物[4-5]。本實驗發(fā)現(xiàn) c-erb B-2表達率為 44.4%,且大部分腫瘤直徑大于5 cm,有淋巴轉(zhuǎn)移者及遠隔轉(zhuǎn)移者表達率更高,與分化程度相關(guān)。提示c-erb B-2與結(jié)腸癌轉(zhuǎn)移預(yù)后有關(guān)。

原癌Bcl-2基因是最早發(fā)現(xiàn)的細胞凋亡抑制基因,一旦Bcl-2基因被激活,導(dǎo)致Bcl -2蛋白過度表達,抑制細胞凋亡,延長細胞的生存期,為細胞癌變提供機會。Bcl-2蛋白主要定位于細胞膜的線粒體和粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)上,其生物學(xué)功能為延長細胞的生命周期并增強細胞對凋亡刺激因素的耐受性而達到抗凋亡的作用,是較肯定的細胞凋亡調(diào)控基因[6]。它在體內(nèi)以二聚體形式發(fā)揮作用,若形成同聚體則抑制細胞凋亡。近來研究發(fā)現(xiàn),Bcl-2本身既無增殖作用,也無促進細胞惡性轉(zhuǎn)化作用,但它可以在無生長因子作用下延長細胞存活時間,增加細胞染色體畸變和病毒感染的機會,導(dǎo)致細胞惡變和腫瘤形成[7]。本實驗發(fā)現(xiàn)Bcl-2表達率與腫瘤直徑、性別及年齡不相關(guān),但與浸潤程度、淋巴轉(zhuǎn)移者及遠隔轉(zhuǎn)移者相關(guān)。

nm 23基因是Steeg等[8]于1988年首次從小鼠黑色素瘤 K-1735細胞株中用消減雜交法分離出來的能抑制肺癌轉(zhuǎn)移的相關(guān)基因,是一種腫瘤抑制基因。人類 nm 23基因定位于17號染色體的 q22區(qū),現(xiàn)已鑒定出 3種亞型: nm232H1、nm232H2、nm232H3。其中,發(fā)揮基因調(diào)控作用的主要是 nm 232H 1,其表達與多種惡性腫瘤的浸潤和轉(zhuǎn)移有關(guān)。大量研究表明,nm23蛋白表達水平與腫瘤細胞轉(zhuǎn)移呈顯著負相關(guān),nm232H 1基因在癌細胞內(nèi)具有等位基因缺失及基因突變的遺傳學(xué)特征[9]。本實驗發(fā)現(xiàn),nm23蛋白的表達與腫瘤大小、分化程度、性別及年齡不相關(guān)。隨結(jié)腸癌浸潤的加深,其陽性表達逐漸降低,有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者的陽性表達較無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者顯著降低,提示nm23基因的缺失和突變與結(jié)腸癌轉(zhuǎn)移有關(guān), nm 23在結(jié)腸癌轉(zhuǎn)移中發(fā)揮負性調(diào)節(jié)作用。有研究表明在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的結(jié)直腸癌中, nm23與c-erb B-2的表達呈負相關(guān),提示c -erb B-2和nm 23基因蛋白異常表達在結(jié)直腸癌的發(fā)生發(fā)展和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移中起重要作用。

總之,c-erb B-2、Bcl-2及nm23蛋白的異常表達與結(jié)腸癌的發(fā)生發(fā)展和浸潤轉(zhuǎn)移有關(guān),聯(lián)合檢測c-erb B-2、Bcl-2及nm23對判斷結(jié)腸癌患者預(yù)后和轉(zhuǎn)移有一定的價值。

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