徐兵 李同明 格桑達娃 王慧（①山東農(nóng)業(yè)大學動物科技學院 泰安 271018 ②濰坊大衛(wèi)動物科學研究所 西藏自治區(qū)畜牧總站）

?

雞源性大腸桿菌的分離鑒定與藥敏試驗

徐兵①②李同明①**格桑達娃③王慧①*（①山東農(nóng)業(yè)大學動物科技學院 泰安 271018 ②濰坊大衛(wèi)動物科學研究所 ③西藏自治區(qū)畜牧總站）

對濰坊地區(qū)雞源性菌株進行分離鑒定和藥敏試驗，結(jié)果表明，分離得到的菌株屬大腸桿菌；藥敏試驗發(fā)現(xiàn)：該菌株對頭孢噻肟、磷霉素、氟苯尼考、頭孢曲松和多粘菌素高敏，對環(huán)丙沙星中敏，對諾氟沙星、紅霉素和氨芐西林不敏感。

雞 致病性 大腸桿菌病 藥敏試驗

雞大腸桿菌病(Chicken colibacillosis)是由大腸桿菌(Escherichia coli，E.coli)中某些致病菌株引起的雞體局部或全身性感染的疾病[1]。在各地雞場時有發(fā)生，對抗生素的耐藥性也越來越強[2]。為控制大腸桿菌病，雞場常在飼料中添加抗生素，又反過來使越來越多的細菌呈現(xiàn)多重耐藥，且耐藥水平越來越高，給雞大腸桿菌病的防治帶來極大困難[3-5]。大腸桿菌的抗原構(gòu)造復雜和血清型極多。不同血清型之間缺乏交叉免疫作用，因此，用單一血清型菌制成的滅活疫苗并不能預防各種不同血清型菌引起的大腸桿菌病。大腸桿菌病型復雜。病原與某些血清型有關(guān)，不同的部位可分離到不同血清型的菌株，而不同的血清型菌株可引起不同的癥狀，且易與慢性呼吸道病、新城疫、傳染性支氣管炎、傳染性法氏囊病、葡萄球菌病、組織滴蟲病或球蟲病并發(fā)或繼發(fā)。臨床診斷必須做好類癥鑒別，分清是原發(fā)還是繼發(fā)或并發(fā)[5]。大腸桿菌易出現(xiàn)耐藥株。因此，用藥時最好進行藥敏試驗，并交替使用各種抗大腸桿菌的藥物[3]。

1 試驗材料與方法

1.1 細菌的分離培養(yǎng) 采用常規(guī)法將細菌病料接種于麥康凱培養(yǎng)基上，37℃培養(yǎng)18~24 h。挑取單個菌落，于普通瓊脂平板上進行純培養(yǎng)，37℃培養(yǎng)18~24 h。挑取單菌落，進行革蘭氏染色、鏡檢。

1.2 生化試驗 取待檢菌純培養(yǎng)物分別接種在蛋白胨水、緩沖蛋白胨水、枸櫞酸鹽、葡萄糖、乳糖、麥芽糖、甘露醇、蔗糖、尿素瓊脂、三糖鐵瓊脂、半固體瓊脂培養(yǎng)基上，置37℃恒溫箱中，培養(yǎng)18~24h，觀察結(jié)果。

1.3 藥敏試驗 將麥糠凱培養(yǎng)基上認定的大腸桿菌菌落，無菌環(huán)境下以接種環(huán)挑出，均勻涂布在營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基上，同時等距離放置若干種藥敏片。置恒溫箱中培養(yǎng)24h。測量各藥敏片的抑菌圈范圍，減去其標準抑菌范圍，其抑菌圈越大的即為敏感藥物。選用的藥敏片有：鏈霉素、氨芐西林、克林霉素、氟哌酸、紅霉素、環(huán)丙沙星、青霉素、氧氟沙星、強力霉素、慶大霉素、諾氟沙星、頭孢唑啉、頭孢噻呋、卡那霉素、阿米卡星、壯觀霉素等。

2 結(jié)果與分析

2.1 細菌的分離培養(yǎng)與鑒定結(jié)果 在營養(yǎng)瓊脂平板上經(jīng)過37℃培養(yǎng)18~24h，革蘭氏染色后，鏡下可見大量散在的紅色、中等大小、兩端鈍圓的無芽孢直桿菌[4]。初步斷定為大腸桿菌。分離菌株生化實驗結(jié)果顯示：能發(fā)酵葡萄糖、乳糖、麥芽糖、甘露醇，產(chǎn)酸。尿素酶試驗陰性，不產(chǎn)生H2S，有鞭毛，能運動。生化實驗結(jié)果表明，分離菌株符合大腸桿菌的生化特性，證實確為大腸桿菌。

2.2 藥敏試驗結(jié)果 經(jīng)過藥敏試驗發(fā)現(xiàn)，該次分離的大腸桿菌對環(huán)丙沙星中度敏感，對諾氟沙星、紅霉素和氨芐西林不敏感。而頭孢噻肟、磷霉素、氟苯尼考、頭孢曲松和多粘菌素等抗生素具有很好的抗菌效果，分離菌對其耐藥率低于10%。

3 討論

大腸桿菌易對抗菌藥物產(chǎn)生耐藥性，必須通過藥敏試驗篩選敏感藥物進行治療，才能達到較好效果[5]。雞大腸桿菌的藥敏試驗結(jié)果有時與臨床療效不一致，常出現(xiàn)敏感藥物無效、而不敏感藥物有效的情況，分析引起這種現(xiàn)象的原因：第一，雞大腸桿菌非原發(fā)病原，而是繼發(fā)感染。一般藥敏試驗分離培養(yǎng)只能培養(yǎng)出需氧菌，而一些特殊細菌以及病毒等無法培養(yǎng)，若這類細菌、病毒是主要致病因素，藥敏結(jié)果與臨床效果會出現(xiàn)差異。第二，體內(nèi)、體外環(huán)境不一致，大腸桿菌可以利用某些體內(nèi)物質(zhì)生成抵抗抗生素的成分，導致抗生素失效，從而出現(xiàn)體外敏感而體內(nèi)耐藥的情況。第三，藥敏試驗操作的影響。采集病料的部位、藥敏紙片或藥物濃度的變化、細菌培養(yǎng)條件不達標等都會造成假陰性。

搞好飼養(yǎng)管理，防重于治。控制好溫度、濕度、光照、通風換氣、適時分群、減少不良刺激、防應(yīng)激、加強飼料保管以防霉變和污染、飼喂時少添勤添、定期清洗水箱和供水管道、飲水器、及早發(fā)現(xiàn)病雞、隔離治療、不用患大腸桿菌病雞群的種蛋、孵化時要嚴格按規(guī)程消毒、保持雞群的整齊度、定期給雞舍消毒、做好人員、車輛和其他環(huán)節(jié)的疾病防范措施、病死雞要焚燒、深埋。雞群發(fā)生大腸桿菌病時，如能緊急注射有效疫苗則能很快控制疫情。用本場分離的菌株制備自場疫苗，也會得到較好的效果[2]。

[1]裴建武, 甘孟侯. 雞致病性大腸桿菌研究進展[J]. 中國獸醫(yī)學報, 1997, 17(2): 207-208.

[2] 崔保安, 盧中華, 毛春生. 雞大腸桿菌病的危害及防治[J]. 河南農(nóng)業(yè)科學, 1992, 6: 33-35.

[3] 馬全理, 張福泉, 郝相正, 岳桂玲. 幾種類型雞大腸桿菌病的防制對策[J]. 山東家禽, 2003, 2: 36-37.

[4] 李慧, 王雨薇. 雞源性致病性大腸桿菌的分離鑒定[J]. 畜牧獸醫(yī)科技信息, 2010, 11: 14-15.

[5] 馬自榮, 毛航平. 肉仔雞大腸桿菌病的診治[J]. 畜牧獸醫(yī)雜志, 2009, 28(6): 84-85.

（2011–04–19）

山東省農(nóng)業(yè)良種工程課題資助。山東農(nóng)業(yè)大學博士后流動站研究經(jīng)費資助。

**同等貢獻作者

通訊作者

S852.61+4

A

1007-1733(2011)07-0009-02