白飯樹水提物對小鼠佐劑性關(guān)節(jié)炎的作用

付 翔， 鄧俊剛， 鄧立東

(桂林醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院，廣西桂林541001)

白飯樹Fluggea virosa為大戟科白飯樹屬Flueggea植物，為廣西壯民族藥，以全株入藥，苦、微澀，性涼，有小毒，具清熱解毒、可治療濕疹、膿皰瘡、過敏性皮炎、瘡癤及燒燙傷［1-2］等。近年來，中國大陸及臺灣地區(qū)的學(xué)者對白飯樹祛風(fēng)除濕的生理及藥理毒理活性關(guān)注程度越來越高，在這方面做了一些有益的研究［3］。本實驗選擇小鼠佐劑性關(guān)節(jié)炎模型觀察白飯樹根皮不同質(zhì)量濃度水提取物的治療作用，探索藥物的作用機制，為臨床合理用藥提供實驗信息。

1 實驗材料

1.1 白飯樹提取物 取白飯樹500 g，用3000 mL水溶液煎煮3次，合并煎煮液，得濃縮液1800 mL，經(jīng)濃縮蒸干得到的膏狀物即為水提取物，稱質(zhì)量得28.24 g，每克提取物相當(dāng)于17.70 g/g(生藥/提取物)。實驗時，用蒸餾水將提取物溶解并配制成相當(dāng)于生藥 0.5 g/mL、0.25 g/mL、0.125 g/mL 的受試液，備用。

1.2 試劑 醋酸地塞米松(山東魯抗辰欣制藥有限公司，批號07123120);0.9%氯化鈉注射液(安徽雙鶴藥業(yè)有限責(zé)任公司);Freund‘s完全佐劑(sigma公司，批號:098k8729)。

1.3 儀器 調(diào)溫電熱套(鞏義市予華儀器有限責(zé)任公司產(chǎn)品);旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(上海亞榮生化儀器廠);DZF-250真空干燥器(鄭州長城科工貿(mào)有限公司);B2500S-M7超聲波清洗器(必能信超聲有限公司產(chǎn)品);HANGPING FA2004電子天平(上海精科天平儀器廠)。

1.4 動物 清潔級昆明種小鼠50只，體質(zhì)量20～25 g，由廣西醫(yī)科大學(xué)實驗動物中心提供，動物生產(chǎn)許可證號:SCXK桂2003-0002。

2 實驗方法

2.1 模型制備與實驗治療［4］小鼠50只，隨機分為5組，每組10只，分別在其左后足趾皮下注射Freund’s完全佐劑0.1 mL，0.5 h 后灌胃給藥［5］。A 組:0.9%氯化鈉注射液;B組:白飯樹10 g/kg;C組:5 kg/kg;D組:白飯樹2.5 kg/kg;E組:地塞米松水溶液，每日1次，連續(xù)24 d，分別在第2、8、12、16、20、24天測量各組小鼠左后足體積，并計算腫脹體積(ΔMl)。第24天后處死小鼠，摘取脾臟及胸腺，稱質(zhì)量，計算免疫器官系數(shù)(臟器重/體質(zhì)量)。

3 實驗結(jié)果

3.1 對AA模型小鼠繼發(fā)性足趾腫脹的影響 實驗結(jié)果顯示，白飯樹高、中劑量灌胃均能明顯抑制AA模型小鼠繼發(fā)性足腫脹，與地塞米松治療效果相當(dāng)，低濃度效果不明顯，結(jié)果見表1。

3.2 對AA小鼠胸腺與脾臟作用 白飯樹水提取物高、中、低濃度三組胸腺系數(shù)(胸腺/體質(zhì)量)均低于模型組，見表2。

表1 白飯樹水提取物對AA小鼠繼發(fā)性炎癥反應(yīng)的影響(± s，n=10)

表1 白飯樹水提取物對AA小鼠繼發(fā)性炎癥反應(yīng)的影響(± s，n=10)

注:與模型組比較，*P ＜0.05。

組別 給藥前10 min/(ΔmL)給藥后足趾腫脹體積/(ΔmL)第2天 第8天 第12天 第16天 第20天 第24天A 0.1183 ±0.0214 0.0738 ±0.0414 0.0824 ±0.0357 0.0825 ±0.0437 0.0645 ±0.0308 0.0628 ±0.0263 0.0642 ±0.0273 B 0.0730 ±0.0299 0.0655 ±0.0289 0.0730 ±0.0299 0.0563 ±0.0326 0.0508 ±0.0351 0.0431 ±0.0201* 0.0387 ±0.0372*C 0.1066 ±0.0217 0.0715 ±0.0243 0.0782 ±0.0170 0.0613 ±0.0183 0.0507 ±0.0262 0.0418 ±0.0213* 0.0393 ±0.0254*D 0.0950 ±0.0312 0.0685 ±0.0220 0.0662 ±0.0199 0.0633 ±0.0144 0.0590 ±0.0154 0.0585 ±0.0136 0.0557 ±0.0175 E 0.1005 ±0.0089 0.0585 ±0.0289 0.0622 ±0.0091 0.0553 ±0.0167* 0.0410 ±0.0107* 0.0420 ±0.0173* 0.0323 ±0.0111*

表2 白飯樹水提取物對AA小鼠胸腺與脾臟作用(± s，n=10)

表2 白飯樹水提取物對AA小鼠胸腺與脾臟作用(± s，n=10)

注:與模型組比較，*P ＜0.05。

地塞米松組胸腺/體質(zhì)量(×10 －3) 1.99 ±0.09 1.05 ±2.21* 1.12 ±1.97* 1.34 ±2.09* 1.13 ±0.11組別 模型組 高質(zhì)量濃度組A 中質(zhì)量濃度組B 低質(zhì)量濃度組C*脾/體質(zhì)量(×10 －3) 2.51 ±0.12 1.30 ±0.59* 1.13 ±0.14* 1.24 ±0.40* 1.53 ±0.21*

4 討論

4.1 用Freund’d完全佐劑誘發(fā)的關(guān)節(jié)炎繼發(fā)病變是一種遲發(fā)型超敏反應(yīng)(DTH)，其原理為BCG作為抗原進入機體使T細胞致敏(稱急性炎癥反應(yīng))，當(dāng)再次接觸抗原，致敏T細胞分化增殖，釋放各種淋巴因子以及直接殺傷靶細胞，引起單核細胞浸潤，同時由抗原抗體形成的免疫復(fù)合物激活補體，導(dǎo)致白細胞趨化激活［6］。釋放一系列致炎因子產(chǎn)生局部和全身性炎癥反應(yīng)(稱繼發(fā)反應(yīng))。一般認為微生物感染及其抗原在類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎RA的發(fā)病機制中占主導(dǎo)地位，近年來證明細胞免疫更突出。在細胞免疫中T淋巴細胞對機體免疫穩(wěn)定起著重要的調(diào)節(jié)作用。從本實驗可看出，白飯樹對胸腺和脾臟有抑制作用，減輕了AA小鼠的繼發(fā)性足腫脹，這可能與藥物的免疫調(diào)節(jié)有關(guān)，可進一步研究其細胞免疫調(diào)節(jié)機制。

4.2 從本實驗的結(jié)果看，白飯樹高、中質(zhì)量濃度組的給藥劑量對佐劑性關(guān)節(jié)炎小鼠的足腫脹有明顯的抑制作用，低質(zhì)量濃度組未顯示明顯的治療效果，可以以此給藥量來作為臨床用藥劑量參考依據(jù)。

4.3 白飯樹是深藏于民間的一味中草藥，它開發(fā)和利用的道路還有很長要走，在目前已有的研究中，藥理研究方面僅以水煎劑、醇提物為報道［3，7］，研究還較粗淺，許多藥理作用尚處于探索階段，毒理研究更是空白。如能進一步加強其藥理學(xué)研究，將其化學(xué)成分與藥理作用、毒理作用研究結(jié)合起來，闡明其藥效成分及其藥理作用，一定能提高其應(yīng)用價值。

［1］中國植物志編輯委員會.中國植物志［M］.北京:科學(xué)出版社，1997:68-72.

［2］中華本草編委會.中華本草［M］.上海:上海科學(xué)技術(shù)出版社，1999:858-859.

［3］許實波，王正濂，趙金華，等.白飯樹水提物對實驗性肝損傷的保護作用［J］.中山大學(xué)學(xué)報論叢，1994，(6):54-57.

［4］周 健，丁長海，徐叔云，等.口服Ⅱ型膠原治療大鼠佐劑性關(guān)節(jié)炎的研究［J］.中國藥理學(xué)通報，1999，15(5):478.

［5］徐淑云，卞如濂，陳 修，等.藥理實驗方法學(xué)［M］.北京:人民衛(wèi)生出版社，2006:920.

［6］王莘智，范伏元，賀選玲.當(dāng)歸多糖對佐劑性關(guān)節(jié)炎足趾腫脹值及小鼠醋酸作用扭體反應(yīng)的實驗研究［J］.中國免疫學(xué)雜志，2008，24(10):891-895.

［7］Tatematsu H，Mori M，Yang TH，et al.Cytotoxic principles of Securinega virosa:Virosecurinine and viroallosecurinine and related derivatives［J］.J Pharm Sci，1991，80(4):325-327.