(河北省人民醫(yī)院，石家莊 050051)

脂肪分解代謝是脂肪細(xì)胞內(nèi)中性脂質(zhì)水解釋放甘油和游離脂肪酸(FFA)的過程，此過程受激素敏感性脂肪酶(HSL)和脂肪組織甘油三酯脂酶(ATGL)調(diào)控［1］。研究顯示，內(nèi)臟脂肪與脂肪代謝紊亂、糖尿病及心血管疾病有關(guān)［2～4］，胰島素抵抗(IR)與脂肪分解代謝異常有關(guān)［3，4］。為探討膽囊三角脂肪堆積與其脂肪組織中脂肪酶活性、IR的關(guān)系，我們對(duì)55例肝膽疾病患者進(jìn)行了脂肪組織中的ATGL mRNA、HSL mRNA及其蛋白表達(dá)檢測(cè)?，F(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選擇2007年9月～2008年3月在我院肝膽微創(chuàng)外科擇期行腹腔鏡膽囊切除術(shù)患者55例，男35 例、女20 例，年齡(40.78 ±11.56)歲;其中膽囊結(jié)石39例，非膽囊結(jié)石16例。排除急性炎癥、腫瘤、肝腎功能不全、自身免疫性疾病及其他影響機(jī)體代謝的內(nèi)分泌疾病(如甲狀腺功能亢進(jìn)、Cushing綜合征、多囊卵巢綜合征等)。根據(jù)術(shù)中所見膽囊三角區(qū)脂肪堆積程度，分為正常組(薄層脂肪均勻堆積)27例、脂肪堆積組(脂肪堆積)28例，兩組性別、年齡有可比性。兩組均于術(shù)中取約2.0 cm×1.0 cm×1.0 cm大小的膽囊三角脂肪一塊，置入液氮中－70℃保存，用于RNA和蛋白提取。

1.2 方法

1.2.1 臨床參數(shù)測(cè)定 測(cè)量?jī)山M血壓、腰圍及臀圍，根據(jù)腰圍、臀圍計(jì)算腰臀比(WHR)。

1.2.2 實(shí)驗(yàn)室檢測(cè) 抽取患者入院次晨空腹肘靜脈血5 ml，離心后分離血清。采用美國(guó)產(chǎn)全自動(dòng)生化儀檢測(cè)空腹血糖，放射免疫法檢測(cè)空腹胰島素(FINS)，銅顯色法檢測(cè)游離脂肪酸(FFA);計(jì)算胰島素抵抗指數(shù)(HOMA-IR)。

1.2.3 ATGL mRNA、HSL mRNA 及其蛋白表達(dá)檢測(cè) ① ATGL、HSL蛋白表達(dá):采用Western Blotting法檢測(cè)ATGL、HSL蛋白表達(dá)，結(jié)果用樣品的光密度值與β-actin的光密度比值表示。②ATGL mRNA、HSL mRNA表達(dá):采用RT-PCR法檢測(cè)ATGL mRNA、HSL mRNA表達(dá)。用RNAiso plus進(jìn)行組織總RNA提取，1%瓊脂糖凝膠電泳鑒定所提RNA的完整性，紫外分光光度計(jì)比色測(cè)定OD260/OD280鑒定RNA的純度，并進(jìn)行定量。引物設(shè)計(jì)用DNAMAN軟件設(shè)計(jì)，由上海生物工程公司合成。人ATGL引物序列上游引物:5'-GTGTCAGACGGCGAGAA TGT-3'，下游引物:5'-GTTGAACTGGATGCTGGTGTTG-3';人HSL引物序列上游引物:5'-ACCTCTTTGACCTGGACCCA-3'，下游引物:5'-CCTGTCTCGTTGCGTTTGTAG-3';人β-actin引物序列上游引物:5'-TGGCACCACACCTTCTACAA-3'，下游引物:5'-AATGTCACGCACGATTTCCC-3'。用UVP凝膠圖像成像分析系統(tǒng)讀取目的基因與內(nèi)參基因條帶密度，并以兩者比值作為目的基因表達(dá)的相對(duì)量。

1.2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用 SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件，計(jì)量資料用±s表示，先行正態(tài)性檢驗(yàn)及方差齊性檢驗(yàn)，兩樣本均數(shù)比較用t檢驗(yàn)或χ2檢驗(yàn);各指標(biāo)間用直線相關(guān)分析。P≤0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組臨床參數(shù)比較 脂肪堆積組WHR為0.90 ±0.24，正常組為 0.70 ±0.15，兩組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05);兩組血壓比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P ＞0.05)。

2.2 兩組實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)比較 正常組 FINS、FFA、HOMA-IR 分別為(11.15 ±4.67)mIU/L、(0.66 ±0.23)mmol/L、1.44 ± 0.49，脂肪堆積組分別為(25.87 ±14.21)mIU/L、(1.35 ±0.45)mmol/L、2.5±0.5。兩者比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P均＜0.05)。

2.3 兩組ATGL mRNA、HSL mRNA及其蛋白表達(dá)比較 見表1。

2.4 相關(guān)分析 ATGL、HSL蛋白表達(dá)均與 FINS、FFA呈明顯負(fù)相關(guān)(r分別為 －0.235、－0.214、－0.185、－0.246，P 均 ＜0.05)。直線相關(guān)分析顯示，ATGL與HSL蛋白表達(dá)呈高度正相關(guān)(r=0.708，P ＜0.01)。

表1 兩組ATGL mRNA、HSL mRNA及其蛋白表達(dá)比較( ±s)

表1 兩組ATGL mRNA、HSL mRNA及其蛋白表達(dá)比較( ±s)

注:與正常組比較，*P ＜0.05，＊＊P ＜0.01

組別 n mRNA ATGL HSL蛋白ATGL HSL正常組27 2.32 ±0.25 2.43 ±0.41 0.98 ±0.15 1.56 ±0.30脂肪堆積組 28 1.12 ±0.21＊＊1.45 ±0.25* 0.60 ±0.12* 1.03 ±0.19*

3 討論

HSL和ATGL是脂肪分解代謝的關(guān)鍵酶，占脂肪組織中甘油三酯水解活性酶的95%。本研究顯示，與正常組比較，脂肪堆積組的內(nèi)臟脂肪組織(膽囊三角)ATGL mRNA、HSL mRNA及其蛋白表達(dá)均降低，且其ATGL和HSL蛋白表達(dá)呈高度正相關(guān)，與文獻(xiàn)報(bào)道一致［1］;說明膽囊三角脂肪組織中的ATGL、HSL活性決定脂肪堆積程度。本研究還發(fā)現(xiàn)，脂肪堆積組的血清FFA高于正常組，且與脂肪組織中的ATGL和HSL蛋白表達(dá)呈負(fù)相關(guān);說明脂肪組織中的ATGL mRNA、HSL mRNA轉(zhuǎn)錄和蛋白表達(dá)不僅影響內(nèi)臟脂肪代謝，還與FFA水平有關(guān)。本研究結(jié)果與有關(guān)報(bào)道一致［5］。

IR 是多種內(nèi)科疾病發(fā)病的基礎(chǔ)，據(jù)報(bào)道［2，3］，脂肪代謝紊亂與IR形成機(jī)制有關(guān)。本研究脂肪堆積組HOMA-IR、FFA明顯高于正常組，與多數(shù)報(bào)道一致［2，3，5］。說明內(nèi)臟脂肪組織在 IR 形成機(jī)制中可能起一定作用。另外，本研究脂肪堆積組WHR明顯高于正常組，且WHR與其HSL蛋白表達(dá)呈負(fù)相關(guān);WHR可否作為臨床評(píng)估內(nèi)臟脂肪組織中HSL活性和膽囊三角脂肪堆積程度的指標(biāo)，尚待進(jìn)一步研究。

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