柳懷玉 王 斕 周小洲 韓 冰 張海鋒 才子斌 (吉林大學(xué)動物實驗中心，吉林 長春 00)

羥喜樹堿是目前我國臨床上應(yīng)用較多的喜樹堿類藥物，其活性強于喜樹堿數(shù)十倍〔1〕。喜樹堿類藥物比較難溶于水〔2〕，而易溶于堿性溶液，在堿性溶液中，內(nèi)酯環(huán)結(jié)構(gòu)易于打開，從而形成鈉鹽;但是喜樹堿類藥物的內(nèi)酯結(jié)構(gòu)是發(fā)揮抗癌作用的重要結(jié)構(gòu)，所以增加水溶性后療效會降低。本研究運用復(fù)乳法將羥基喜樹堿包裹于聚乳酸羥基乙酸(PLGA)中制備羥喜樹堿PLGA緩釋納米粒，從而延長羥喜樹堿發(fā)揮抗腫瘤作用的時間，提高患者的依從性和生物利用度。本文觀察羥喜樹堿PLGA納米粒的表觀形態(tài)、粒徑、載藥量、體外釋放等特性。

1 材料與方法

1.1 材料 羥喜樹堿購于上海龍翔生物科技公司;PLGA購于美國雷克少公司;二氯甲烷、乙腈等常規(guī)試劑購于天津化工;BS124S型電子天平(德國賽多麗絲公司);JY88-IIN型超聲細胞破碎儀(寧波新芝科技公司);高效液相色譜儀(德國安捷倫公司)。

1.2 方法

1.2.1 羥喜樹堿PLGA納米粒的制備 取一定量的PLGA，用有機溶液將其溶解，并向其中加入一定量的羥喜樹堿水溶液，溶解后超聲處理制備成乳狀溶液。將此溶液逐滴加入到50 ml聚乙烯醇(PVA)水溶液中，高速攪拌，之后加水稀釋，將PVA濃度控制在2%，700 r/min低速攪拌2 h。將外水相濾出，對剩余溶液進行離心，每次20 min，離心2次。最后將其濃縮后，向納米粒中加入5%的甘露醇并進行凍干。

1.2.2 納米粒的表面形貌觀測及粒徑測定 取一定量的羥喜樹堿PLGA納米粒樣品，用水溶解后用顯微鏡進行觀察，記錄表面形貌。利用粒度分析儀對納米粒的粒徑進行測定并記錄分析。

1.2.3 納米粒的載藥量測定 取5 mg納米粒樣品，將之置于10 ml離心管底部，向其中加入乙腈溶液，渦旋振蕩處理，而后利用高效液色譜儀相對羥喜樹堿進行檢測，利用上述方法對多批制備得到的羥喜樹堿PLGA納米粒分別進行載藥量的測定。

1.2.4 納米粒的體外釋放檢測 取20 mg納米粒樣品，置于10 ml離心管底部，加入5 ml pH7.0的磷酸鹽緩沖液(PBS)，封口膜封口，將離心管置于37℃的搖床中，120 r/min進行搖動，固定的時間點離心，取出4 ml上清液，其中20 ml用于液相檢測，其余棄掉，同時向離心管中補充4 ml新鮮PBS緩沖液，使釋放繼續(xù)進行。每次相應(yīng)檢測時間點重復(fù)上述檢測。共對3批制備得到的納米粒樣品進行體外釋放檢測，繪制三批樣品的平均釋放曲線。

2 結(jié)果

2.1 納米粒的表面形貌及粒徑 經(jīng)測定羥喜樹堿PLGA納米粒的平均粒徑為139.4 nm。制備的羥喜樹堿PLGA納米粒表觀形態(tài)完整，細小均勻。見圖1。

圖1 羥喜樹堿PLGA納米粒的表面形態(tài)

2.2 納米粒的載藥量 A、B、C三組的羥喜樹堿PLGA納米粒的平均載藥量為6.03%，各組制備的羥喜樹堿PLGA納米粒的載藥量無統(tǒng)計學(xué)差異(P＜0.01)。結(jié)果顯示羥喜樹堿PLGA納米粒制備的工藝重現(xiàn)性良好，組間差異小。見表1。

表1 A、B、C三組的羥喜樹堿PLGA納米粒載藥量結(jié)果(%)

2.3 納米粒的體外釋放 將釋放藥物累積后做百分比圖，其中橫坐標(biāo)為時間，縱坐標(biāo)為累計釋放百分比，納米粒的體外藥物釋放基本呈現(xiàn)0級釋放，釋放周期維系1個月左右。見圖2。

圖2 羥喜樹堿PLGA納米粒的藥物體外釋放曲線

3 討論

近幾年來，藥劑學(xué)的快速發(fā)展使緩釋制劑得以很好的發(fā)展，很多藥物都逐步開始了在緩釋制劑平臺的應(yīng)用研究工作〔3〕。制備納米粒的材料很多，本研究采用的是新型聚合物PLGA，該材料具有良好的生物降解性、生物相容性及降解速度可調(diào)節(jié)性。PLGA同時是美國食品藥品管理局(FDA)批準的可用于注射的藥用輔料。復(fù)乳法超聲載藥納米粒相對殼聚糖、蛋白材料、脂質(zhì)體材料等制備出的納米粒穩(wěn)定性較好，可顯著延長納米粒的使用時間并使給藥持久體現(xiàn)血藥濃度，同時降低系統(tǒng)中藥物產(chǎn)生的毒性刺激性。該羥喜樹堿PLGA納米粒的體外釋放圖譜顯示在體外釋放液中，羥喜樹堿PLGA納米粒釋放平穩(wěn)，藥物顯效期可長達一個月，說明該納米粒具備良好的釋放特性。本文利用復(fù)乳法成功制備了羥喜樹堿PLGA納米粒，結(jié)果表明，納米?？梢猿蔀殡y溶性的喜樹堿類抗腫瘤藥物的極具潛力的給藥系統(tǒng)。

1 Zhou YY，Du YZ，Wang，L，et al.Preparation and pharmacodynamics of stearic acid and poly(lactic-co-glycolic acid)grafted chitosan oligosaccharide micelles for 10-hydroxycamptothecin〔J〕.Int J Pharmacol，2010;393(1):143-51.

2 Chow DS，Gong L，Wolfe MD.Modified lactone/carboxylate salt equilibria in vivo by liposomal delivery of 92nitro-camptothecin〔J〕.Ann N Y Acad Sci，2000;922:164-74.

3 Han B，Wang HT，Liu HY，et al.Preparation of pingyangmycin PLGA microspheres and related in vitro/in vivo studies〔J〕.Int J Pharmacol，2010;398(1-2):130-6.