邢海杰， 鄧錦文， 卜平風(fēng)， 王明靜， 鄧啟華

主穹窿蛋白(major vault protein，MVP)在人體多種腫瘤細(xì)胞中表達(dá)水平較高［1］，且與腫瘤化療反應(yīng)性及預(yù)后密切相關(guān)［2-3］。最近研究顯示，MVP參與細(xì)胞間信號(hào)傳導(dǎo)、細(xì)胞分化、免疫啟動(dòng)和細(xì)胞凋亡的調(diào)節(jié)［2，4］，是腫瘤潛在的治療靶標(biāo)［5］。MVP 與口咽鱗癌關(guān)系的研究少見報(bào)道。本研究旨在檢測(cè)

MVP在口咽鱗癌中的表達(dá)變化，分析其與口咽鱗癌的臨床病理關(guān)系，為口咽鱗癌的臨床診治提供分子生物學(xué)依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集我院2000年4月至2009年5月收治的口咽鱗癌患者共73例，其中男69例，女4例。年齡27～73歲，中位年齡58.4歲。所有病例均經(jīng)病理檢查證實(shí)為鱗狀細(xì)胞癌。按Broders分類，鱗癌Ⅰ級(jí)34例，Ⅱ級(jí)20例，Ⅲ級(jí)13例，未分級(jí)6例。根據(jù)UICC2002分期標(biāo)準(zhǔn)，T1 3例，T2 28例，T3 32例，T4 10例，N0 47例，N1 13例，N2 11例，N3 2例，所有病例無遠(yuǎn)處器官轉(zhuǎn)移。

1.2 主要儀器及試劑 切片機(jī)及烤箱購自上海醫(yī)療儀器廠，鼠抗人MVP單克隆抗體(MVP-56)、二抗及染色劑均購自武漢博士德生物技術(shù)公司。

1.3 治療方法 單純手術(shù)治療13例，其中根治切除11例，姑息切除2例;單純放療27例;單純化療4例;綜合治療29例，包括手術(shù)+放療9例，手術(shù)+化療3例，放療+化療7例，化療+放療10例。原發(fā)灶放療劑量為58～70 Gy，平均劑量為66 Gy，術(shù)后放療劑量為42～60 Gy，平均劑量為56.4 Gy。頸部放療劑量為42～56 Gy，平均劑量為50.6 Gy，分割劑量均為2 Gy/d?；煼桨高x擇，DDP+5-FU+BLM方案化療16例，DDP+5-FU方案化療5例，泰素+DDP+5-FU方案化療3例，化療2～4個(gè)療程。根據(jù)實(shí)體瘤化療療效評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)，初治接受化療的14例，完全緩解(CR)2例，部分緩解(PR)3例，化療無效及進(jìn)展9例。

1.4 MVP檢測(cè) 收集所有病例組織蠟塊，常規(guī)組織切片，厚度4 μm，脫水脫蠟。采用免疫組織化學(xué)法檢測(cè)。操作步驟按試劑盒說明書進(jìn)行，每批實(shí)驗(yàn)均設(shè)陰性對(duì)照，DAB顯色，蘇木素復(fù)染，樹膠封片。

1.5 MVP表達(dá)結(jié)果判定 以細(xì)胞胞漿出現(xiàn)棕黃或亮黃色顆粒為染色陽性。高倍鏡下任取5個(gè)視野進(jìn)行計(jì)數(shù)，按陽性細(xì)胞比例分為:(－)無陽性細(xì)胞出現(xiàn)或陽性細(xì)胞數(shù)＜10;(+)陽性細(xì)胞數(shù)10～25;(++)陽性細(xì)胞數(shù) 26～50;(+++)陽性細(xì)胞數(shù) ＞50。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 10.0統(tǒng)計(jì)軟件，應(yīng)用非參數(shù)統(tǒng)計(jì)中獨(dú)立樣本檢驗(yàn)、Spearman等級(jí)相關(guān)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，生存分析采用Log-Rank檢驗(yàn)，多因素分析使用COX風(fēng)險(xiǎn)比例模型。P＜0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 MVP表達(dá)陽性率 73例患者中MVP表達(dá)陽性者49例，其中(+)14例，(++)17例，(+++)18例，MVP陽性表達(dá)率為67.1%(49/73)。陰性表達(dá)24例，陽性表達(dá)見圖1。

2.2 MVP表達(dá)與口咽鱗癌臨床病理關(guān)系 MVP表達(dá)水平與口咽鱗癌頸部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及放、化療敏感性相關(guān)，P＜0.05;MVP表達(dá)與口咽鱗癌性別、年齡、病理分化程度以及 T分期無相關(guān)性，P＞0.05，見表1?；颊叩?年生存率分別為6.0% 和51.7%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Log Rank=59.7，P ＜ 0.001)，見圖2、3。

表1 MVP表達(dá)與口咽鱗癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系

圖2 73例口咽鱗癌患者總生存率曲線

圖3 73例MVP表達(dá)陰性和陽性患者生存率曲線

把年齡、性別、病理分化程度、腫瘤T分期、N分期、治療方法以及MVP表達(dá)狀態(tài)引入COX比例風(fēng)險(xiǎn)模型行多因素分析顯示，MVP表達(dá)狀態(tài)是口咽鱗癌生存的獨(dú)立相關(guān)因素，P＜0.001。見表2。

表2 MVP與口咽鱗癌預(yù)后的多因素分析結(jié)果

3 討論

在人體多種腫瘤細(xì)胞中，MVP表達(dá)水平較高，表達(dá)陽性率為 68.6% ～ 96.7%［3，6］。本組資料中，MVP陽性表達(dá)率為67.1%，與有關(guān)報(bào)道相近，顯示在口咽鱗癌細(xì)胞中，MVP的表達(dá)水平較高，MVP與口咽鱗癌的發(fā)生、發(fā)展可能存在密切關(guān)系。

3.1 MVP與腫瘤淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移 MVP表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系尚有不同結(jié)論。Zuo等［1］檢測(cè)68例原發(fā)性乳腺癌中MVP的表達(dá)，結(jié)果顯示MVP表達(dá)陽性的乳腺癌患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的風(fēng)險(xiǎn)增高(P＜0.05)，表明MVP表達(dá)水平與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)。但在食管鱗癌組織中，MVP表達(dá)水平的升高與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無顯著相關(guān)性。

本組資料的結(jié)果顯示，在頸部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移病例中，MVP表達(dá)陽性率顯著高于無頸部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移病例(P＜0.05)，顯示在口咽鱗癌中，MVP表達(dá)與頸部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移存在相關(guān)性，與Zuo的結(jié)論較一致，同時(shí)也表明MVP表達(dá)與腫瘤細(xì)胞的侵襲性有關(guān)，MVP表達(dá)增高者腫瘤的侵襲性強(qiáng)，腫瘤轉(zhuǎn)移的機(jī)率隨之升高。這可能與MVP的細(xì)胞信號(hào)調(diào)節(jié)作用有關(guān)，MVP通過上調(diào)Bcl-2表達(dá)抑制細(xì)胞凋亡［7］，同時(shí)，通過磷酸化途徑調(diào)節(jié)上皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子信號(hào)，影響細(xì)胞的增殖［8］，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移，但其調(diào)節(jié)機(jī)制尚需進(jìn)一步研究。

3.2 MVP與放療敏感性 MVP與放療敏感性關(guān)系的報(bào)道不多。Silva等［9］的研究顯示，口咽癌中MVP表達(dá)水平變化與口咽癌放療敏感性存在相關(guān)性，隨著MVP表達(dá)水平的升高，患者的放療敏感性降低(P＜0.05)。本組資料顯示，MVP表達(dá)水平較高的患者，對(duì)放療的反應(yīng)性較差，與Silva的結(jié)論較一致，但由于病例較少，無法進(jìn)一步分析MVP表達(dá)水平與放療反應(yīng)性的關(guān)系。MVP表達(dá)水平影響口咽癌放射治療敏感性的機(jī)制還不清楚。有學(xué)者認(rèn)為MVP與PTEN(phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome ten)的相互作用是重要機(jī)制之一，PTEN通過PI3K途徑調(diào)節(jié)細(xì)胞生長(zhǎng)，降低cyclin D1水平［10］，高表達(dá)的MVP促進(jìn)PTEN自胞漿轉(zhuǎn)運(yùn)至胞核，在 G0～G1期達(dá)峰值，S期下降，延長(zhǎng)細(xì)胞周期［11］，使放、化療作用于分裂期腫瘤細(xì)胞，而處于靜止期的腫瘤細(xì)胞易于出現(xiàn)放療耐受［12］。

另一方面，放射線可增加MVP磷酸化，與COP1(photomorphogenic protein 1)分離，下調(diào)c-Jun轉(zhuǎn)錄，MVP與c-Jun作用進(jìn)一步調(diào)節(jié)AP-1(activator protein-1)活性，抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)，有利于細(xì)胞修復(fù)潛在的致死性損傷，降低腫瘤細(xì)胞對(duì)藥物和放射治療的敏感性［13］，同時(shí)，DNA損傷增強(qiáng) MVP啟動(dòng)子活性，促進(jìn) MVP 水平的提高［14］。

3.3 MVP與化療敏感性的關(guān)系 目前認(rèn)為，MVP高表達(dá)腫瘤對(duì)化療敏感性較差，主要與MVP的漿-核轉(zhuǎn)運(yùn)功能有關(guān)，MVP可把進(jìn)入胞核內(nèi)的細(xì)胞毒藥物轉(zhuǎn)輸至胞漿，使細(xì)胞毒藥物失去抗腫瘤靶標(biāo)［15］。本組資料只有14例患者初治接受化療，5例有效，雖然分析顯示MVP與腫瘤的化療敏感性有關(guān)(P＜0.05)，但仍需進(jìn)一步積累資料觀察。

在口咽鱗癌發(fā)生過程中致癌和抑癌因素的選擇作用使MVP高表達(dá)的腫瘤細(xì)胞更易于存活并增殖，即MVP表達(dá)陽性的腫瘤細(xì)胞更易轉(zhuǎn)運(yùn)外源或內(nèi)源性抑癌物質(zhì)從而減輕對(duì)癌細(xì)胞核的毒性，使該癌細(xì)胞更易于存活和增殖，這也與MVP的生理功能相吻合。

3.4 MVP與口咽鱗癌預(yù)后 MVP表達(dá)與多種腫瘤的預(yù)后相關(guān)［16］。在卵巢癌和成人急性粒細(xì)胞白血病中，MVP表達(dá)可以作為獨(dú)立的化療反應(yīng)性和預(yù)后的預(yù)測(cè)指標(biāo)［3，17］。

本組患者5年總生存率為24.2%，MVP表達(dá)陽性和陰性患者的5年生存率分別為6.0%和51.7%(P ＜ 0.001)，與 Silva 等［9，18］的結(jié)論一致。隨著MVP表達(dá)水平的升高，口咽鱗癌的放療、化療敏感性下降，臨床療效降低，預(yù)后變差。多因素分析結(jié)果也顯示，MVP表達(dá)陽性是口咽鱗癌預(yù)后的獨(dú)立預(yù)測(cè)因素(P＜0.001)，這一結(jié)果顯示通過檢測(cè)MVP的表達(dá)可評(píng)估口咽鱗癌的臨床治療效果和預(yù)后，值得進(jìn)一步深入研究。

本研究顯示，MVP與口咽鱗癌的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和放、化療反應(yīng)性以及預(yù)后密切相關(guān)，進(jìn)一步探討MVP與口咽鱗癌發(fā)生的關(guān)系，有利于弄清口咽鱗癌的發(fā)展變化，為口咽鱗癌早期診斷和有效治療提供有意義的生物學(xué)評(píng)估指標(biāo)。

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