吳瑕

(湖北師范學(xué)院體育學(xué)院 湖北 黃石 435002)

內(nèi)分泌系統(tǒng)對免疫功能的調(diào)節(jié)越來越受到重視,生長激素的作用也越來越重要。筆者以NK細(xì)胞、白細(xì)胞介素(IL)-1A以及IL-2活性、腫瘤壞死因子(TNFA)的含量以及TNFA mRNA表達(dá)作為指標(biāo)項目,觀察去除垂體的大鼠以及生長激素缺乏癥的患兒在生長激素治療前后的免疫指標(biāo)。

1 資料與方法

1.1 6周歲的大鼠,去除垂體后恢復(fù)10天,分為A、B、C三組,使用不同激素的替代治療:

A組(11只):早上8時給每只大鼠腹腔注射60Mg氫化可的松,每只大鼠口服3Mg左旋甲狀腺素,使用3次以后,晚上8時每只大鼠加用300mU的Bio-hGH,使用皮下注射的方式,使用8d。

B組(12只):早上8時給每只大鼠腹腔注射60Mg氫化可的松,每只大鼠口服3Mg左旋甲狀腺素,使用10d。

C組(12只):早上8時給每只大鼠腹腔注射0.2mL的生理鹽水。

對照組(12只):手術(shù)后恢復(fù)10d,早上以及晚上8點(diǎn)分別腹腔注射0.2mL的生理鹽水,使用10d。

生長激素缺乏癥患兒組:一共有11例,有7例患者的療程小于6個月,患兒年齡最大為17歲,最小為10歲;骨齡最大為15歲,最小為5歲。對照組:20例正常兒童,8例女患兒,12例難患兒,最大年齡為8歲,最小為4歲。對生長激素缺乏癥的患者進(jìn)行治療:每天0.1U/k的R-hGH,在每天晚上睡覺前一個小時大腿伸側(cè)皮下注射。

1.2 方法

NK細(xì)胞活性測定:乳酸脫氫酶(LDH)釋放法。IL-1A及IL-2活性的測定:四甲基偶氮唑鹽(MTT)比色法。TNFA含量測定:采用北京邦定公司提供的ELISA藥盒檢測,敏感度100pg/mL,批間、批內(nèi)變異系數(shù)均在10%以內(nèi)。TNFA mRNA表達(dá)測定:(1)肺巨噬細(xì)胞總RNA提取作;(2)TNFA探針制備:TNFA cDNA質(zhì)粒用HindⅢ BamHⅠ酶切,回收650,750bp二個片段,同位素A-32P標(biāo)記,過Sephadex G-50柱收集標(biāo)記探針;(3)TNFA mRNA斑點(diǎn)雜交。

2 結(jié)果

去除垂體以后脾臟淋巴細(xì)胞數(shù)及脾臟NK細(xì)胞活性比對照組低,A組治療后兩者都明顯升高,但是仍然比對照組低。C組IL-1活性明顯降低,A組IL-1活性明顯升高,對對照組無明顯差異。C組IL-2活性明顯降低,A組IL-2活性比C組明顯增高。B組的上述指標(biāo)均與C組相近。去垂體C組TNFA mRNA表達(dá)明顯降低,B組TNFA mRNA表達(dá)與C組相仿,而A組TNFA mRNA表達(dá)明顯增強(qiáng),且表達(dá)程度與對照組相近。

本組采用R-hGH治療療程＞6月者共7例,其身高年生長速率達(dá)到11.0±2.8 cm。全組在治療前NK細(xì)胞活性明顯降低,經(jīng)生長激素治療3個月后,NK細(xì)胞恢復(fù)到正常水平;治療前IL-1A及IL-2活性偏低,治療后兩者有逐步增高的趨勢,但與治療前相比,差異無顯著意義。

3 討論

生長激素可以恢復(fù)去除垂體后大鼠的TNFA的合成,效果與干擾素沒有很大差異,而且在使用TNFA抗血清后,生長激素對巨噬細(xì)胞的毒活性的促使作用就完全消除,這說明生長激素對巨噬細(xì)胞的作用可能是由于TNF所介導(dǎo)的。本組的研究結(jié)果表明,生長激素的作用部位可能是在基因轉(zhuǎn)錄水平,但是這種作用的機(jī)制還不是很清楚。體外研究表明,生長激素不能夠直接促進(jìn)TNFA的合成。產(chǎn)生這種體內(nèi)外差異的原因可能有:生長激素通過淋巴細(xì)胞促進(jìn)干擾素的合成,影響了TNFA的合成;生長激素導(dǎo)致類胰島素生長因子的合成以及釋放;生長激素刺激巨噬細(xì)胞從而產(chǎn)生超氧化物,對TNFA的合成有促進(jìn)作用。

[1]謝建新,顧巖,趙淑民,羅寶國,吳肇漢,左煥琛.GH和附加G1n腸外營養(yǎng)聯(lián)合應(yīng)用對短腸大鼠小腸黏膜上皮細(xì)胞分裂增殖能力的影響[J].復(fù)旦學(xué)報(醫(yī)學(xué)版),2002(3).

[2]范志勇,王康寧,周定剛.EGF、G1n和pGRF基因質(zhì)粒對早期斷奶仔豬生產(chǎn)性能、免疫功能及相關(guān)激素水平的影響[J].畜牧獸醫(yī)學(xué)報,2005(9).