盧 青

（聊城大學(xué)東昌學(xué)院 山東 聊城 252059）

自由基是生物機(jī)體在生命活動中通過生物化學(xué)反應(yīng)所產(chǎn)生的中間產(chǎn)物。在正常的生理情況下，機(jī)體內(nèi)的自由基的產(chǎn)生和消除處于一個動態(tài)平衡之中，其濃度也維持在較低水平，此時自由基不僅不會損傷機(jī)體，還可顯示出獨(dú)特的生理作用；而在某些病理情況下，機(jī)體自由基的產(chǎn)生和消除功能將失去平衡，由于自由基具有很高的反應(yīng)活性，因此它將在分子、細(xì)胞乃至器官水平給機(jī)體造成損傷，從而加快機(jī)體的衰老過程，并可誘導(dǎo)癌癥心血管疾病等諸多疾病的發(fā)生。[1，2]生物體內(nèi)氧化代謝產(chǎn)生的羥基自由基 （·OH）具有強(qiáng)反應(yīng)活性，它能與蛋白質(zhì)、糖類等物質(zhì)發(fā)生鏈反應(yīng)，導(dǎo)致細(xì)胞損傷甚至疾病。具有清除自由基活性的物質(zhì)，即自由基清除劑。由于自由基清除劑具有廣泛的生物活性，因而有關(guān)研究受到世界各國的普遍重視。目前已發(fā)現(xiàn)的天然自由基清除劑主要包括酶和非酶兩大類。酶類如：超氧化物歧化酶（SOD）、過氧化氫酶（CAT）、谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-PX）等。非酶類有：肽和非酶蛋白類、生物堿及含氮雜環(huán)類、抗壞血酸、生育酚、胡蘿卜素類、多酚類、黃酮及類黃酮、苯丙素類等。我們?nèi)粘Ｊ秤玫氖卟?、水果和中藥中往往含有大量的自由基清除劑。本文選取常見蔬菜作為研究對象，其中含有的維生素C、維生素E、胡蘿卜素、生物堿、檸檬酸等都具有一定的自由基清除能力[3]，其乙醇提取液的自由基清除率是多種自由基清除劑共同作用的結(jié)果。

1 試驗(yàn)部分

1.1 儀器、試劑與樣品

自動分析天平，TU-1810紫外可見分光光度計(jì)，超聲波清洗器。

水楊酸（AR），H2O2（30%），F(xiàn)eSO4·7H2O(AR)，乙醇（AR）。

選取市售新鮮成熟生菜、油菜、青辣椒、柿子椒、胡蘿卜、青蘿卜。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 ·OH的產(chǎn)生及測定原理

·OH-自由基產(chǎn)生體系模型:H2O2+Fe2+→OH+Fe3+。在反應(yīng)體系中加入水楊酸,能有效捕捉·OH并產(chǎn)生有色產(chǎn)物。該產(chǎn)物在510nm處有強(qiáng)吸收,若加入有清除·OH功能的被測物,便會與水楊酸競爭·OH,使有色產(chǎn)物的生成量減少,采用固定反應(yīng)時間法,在510nm處測量含被測物的反應(yīng)液的吸光度,與空白液比較,便能測定被測物對·OH的清除作用[4]。

1.2.2 樣品液的提取

以生菜的乙醇提取液為例，將生菜洗凈干燥，準(zhǔn)確稱取50g生菜，搗碎，加入100mL的乙醇，室溫下用超聲波清洗器震蕩三小時，得樣品粗提取液。

1.2.3 ·OH的制備

在 50mL容量瓶中加入 2.5mL H2O2（0.088mol/L）,2.5mL Fe2+（9.0mmol/L）和 0.5mL 水楊酸（9.1mmol/L）。

1.2.4 空白試液吸光度的測定

將配制好的自由基試液定容至50ml,取2ml在510nm處測其吸光度記為A0。

1.2.5 提取液吸光度的測定

將配制好的自由基試液中加入樣品提取液，定容至50ml,搖勻固定反應(yīng)時間為3min，測其吸光度，記為As。每個樣品平行測定三次，取平均值進(jìn)行計(jì)算：消除率（%）=A0-As/A0×100%

2 結(jié)果與討論

2.1 柿子椒和紅辣椒對·OH的清除作用及清除能力的比較

向·OH產(chǎn)生體系中分別加入柿子椒和紅辣椒的提取液，測定吸光度。兩種提取液對·OH的清除率均隨提取液的濃度升高而升高。紅辣椒較柿子椒強(qiáng)，但差異不明顯，見圖1。分析原因是紅辣椒雖比柿子椒中胡蘿卜素、抗壞血酸的含量高，但維生素E的含量后者較高[5]。

圖1 柿子椒和紅辣椒對羥基自由基清除作用的比較

圖2 胡蘿卜和青蘿卜得羥基自由基清除作用的比較

圖3 生菜對羥基自由基的清除作用

圖4 油菜對羥基自由基的清除作用

2.2 胡蘿卜和青蘿卜對·OH的清除作用及清除能力的比較

向·OH產(chǎn)生體系中分別加入胡蘿卜和青蘿卜的提取液，測定吸光度。兩種提取液對·OH的清除率均隨提取液的濃度升高而升高。胡蘿卜較青蘿卜強(qiáng),見圖2。分析原因是胡蘿卜中維生素C的含量與青蘿卜中維生素C的含量幾乎一樣；胡蘿卜中維生素E的含量大約是青蘿卜中維生素E的含量的2倍；胡蘿卜中胡蘿卜素的含量遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過青蘿卜中胡蘿卜素的含量，大約是青蘿卜的70倍[5]。

2.3 生菜對·OH的清除作用

向·OH產(chǎn)生體系中加入生菜的提取液，測定吸光度。提取液對·OH的清除率隨提取液的濃度升高而升高，見圖3。分析原因是生菜中含維生素C、維生素E、胡蘿卜素和抗壞血酸。這些成分是清除自由基的有效成分。

2.4 油菜對·OH的清除作用

向·OH產(chǎn)生體系中加入油菜的提取液，測定吸光度。提取液對·OH的清除率隨提取液的濃度升高而升高，見圖4。分析原因是生菜中含維生素C、維生素E、胡蘿卜素和抗壞血酸。這些成分是清除自由基的有效成分。

2.5 結(jié)論

以上結(jié)果表明生菜、油菜、胡蘿卜、青蘿卜、柿子椒和紅辣椒的乙醇提取液對自由基都有一定的清除作用。通過比較表明：紅辣椒較柿子椒的清除自由基作用高但差異不顯著，胡蘿卜較青蘿卜的清除自由基作用高，差異顯著。生菜和油菜都有清除自由基的作用。因此，如果我們在日常的飲食生活中有針對性的選擇蔬菜，同樣可以很好地清除自由基，達(dá)到預(yù)防疾病和保健駐顏得的目的。

［1］鄭榮梁,黃中洋.自由基醫(yī)學(xué)與農(nóng)學(xué)基礎(chǔ)[M].北京:高等教育出版社,施普林格出版社,2001.

［2］趙保路.氧自由基與天然抗氧化劑[M].北京:科學(xué)出版社,2001.

［3］陸瑞利，胡豐林，丁曉娟，等.黃山欒樹葉中具有清除自由基活性物質(zhì)的分離和制備[M].安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報，2002（04）.

［4］丁利軍，鐘金玲.幾種水果蔬菜對羥自由基清除作用的研究.廣州食品工業(yè)科技，2002（04）.

［5］中國預(yù)防科學(xué)院和營養(yǎng)與視頻衛(wèi)生所.食品成分表.科學(xué)出版社，1997，52.