蘇香1號(hào)對(duì)小鼠記憶障礙模型的影響

劉魁英 廖磊 李蜀平 劉冬平 劉洋

蘇香1號(hào)為金縷梅科植物蘇香1號(hào)樹(LiquidambarorientalisMill)所分泌的樹脂。有通竅辟穢，開郁祛痰，行氣止痛的作用，主治中風(fēng)痰厥，氣厥之寒閉癥;溫瘧，驚癇;濕濁吐利;心腹卒痛以及凍瘡、疥癬。蘇香1號(hào)樹脂含揮發(fā)油、萜類，現(xiàn)代藥理研究發(fā)現(xiàn)蘇香1號(hào)有抗血栓功能，對(duì)心血管有明顯影響，可抑菌、抗炎。本試驗(yàn)采用小鼠水迷宮行為實(shí)驗(yàn)法，檢測(cè)蘇香1號(hào)對(duì)戊巴比妥鈉、乙醇以及亞硝酸鈉引起小鼠學(xué)習(xí)、記憶障礙的作用。

1 材料

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 清潔級(jí)昆明小鼠，220只，雄性，體重22～24 g。北京華阜康生物技術(shù)股份有限公司，合格證號(hào):SCXK(京)2009-0007。

1.2 試劑與藥物 蘇香1號(hào)，1 g藥粉含生藥0.07991 g生藥。批號(hào):20090810。由北京市衛(wèi)生局臨床藥學(xué)研究所植化室提供。吡拉西坦片，廣東華南藥業(yè)集團(tuán)有限公司生產(chǎn)，批號(hào):090104。戊巴比妥鈉，國藥集團(tuán)化學(xué)試劑公司，進(jìn)口分裝，批號(hào):F20041117。95%乙醇，北京化工廠生產(chǎn)，批號(hào):20090618。亞硝酸鈉，北京紅星化工廠生產(chǎn)，批號(hào):090612。

1.3 實(shí)驗(yàn)儀器和統(tǒng)計(jì)軟件 BL-2200H電子天平，日本島津公司。Morris水迷宮:中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥物研究所。采用SPSS 10.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。

2 實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果

2.1 蘇香1號(hào)對(duì)戊巴比妥鈉所致小鼠記憶獲得障礙模型的影響［1，2］將小鼠隨機(jī)分為6組，即空白對(duì)照組、模型對(duì)照組、吡拉西坦組(640 mg/kg)、蘇香1號(hào)28、14、7 mg/kg組。灌胃給藥，1次/d，連續(xù)10 d，空白對(duì)照組及模型對(duì)照組分別給予等體積去離子水。于第11 d開始造模并進(jìn)行Morris水迷宮測(cè)試。每天各組小鼠口服灌胃給藥30 min后，除空白對(duì)照組腹腔注射等量的生理鹽水外，其余各組小鼠均腹腔注射戊巴比妥鈉15 mg/kg，直到實(shí)驗(yàn)全部結(jié)束。各組于造模后30 min進(jìn)行水迷宮測(cè)試。訓(xùn)練4次/d，動(dòng)物找到并爬上站臺(tái)后，讓其停留20s，若動(dòng)物入水后60 s未找到站臺(tái)者，將其引致站臺(tái)，放置20s引導(dǎo)其學(xué)習(xí)與記憶，潛伏期記為60s。第1 d、第2 d為訓(xùn)練，第3～5 d按上述方法測(cè)試(但不再對(duì)其進(jìn)行引導(dǎo))，將各組小鼠最后一天的平均潛伏期離作為衡量其學(xué)習(xí)記憶能力的指標(biāo)。t檢驗(yàn)進(jìn)行組間比較。結(jié)果見表1。

2.2 蘇香1號(hào)對(duì)乙醇所致小鼠記憶再現(xiàn)障礙模型的影響2-3將小鼠隨機(jī)分為6組，即空白對(duì)照組、模型對(duì)照組、吡拉西坦組、蘇香1號(hào)28、14、7 mg/kg組。給藥劑量、方法同前。第11～14 d，在各組口服灌胃給藥后1 h進(jìn)行水迷宮實(shí)驗(yàn)。每只小鼠連續(xù)訓(xùn)練4 d，4次/d，60s/次。方法同上。試驗(yàn)當(dāng)日，除空白對(duì)照組灌胃去離子水外，其余各組動(dòng)物給藥1 h后，灌胃50%乙醇7 ml/kg，30 min后，進(jìn)行水迷宮試驗(yàn)，結(jié)果以小鼠的平均潛伏期為指標(biāo)，t檢驗(yàn)進(jìn)行組間比較。結(jié)果見表2。

2.3 蘇香1號(hào)對(duì)亞硝酸鈉所致小鼠記憶鞏固障礙模型的影響［2-4］將小鼠隨機(jī)分為6組，即空白對(duì)照組、模型對(duì)照組、吡拉西坦組、蘇香1號(hào)28、14、7 mg/kg組。給藥劑量、方法同前。第11～13 d，在各組口服灌胃給藥后1 h進(jìn)行水迷宮試驗(yàn)。每只小鼠連續(xù)訓(xùn)練3 d，4次/d，60s/次。訓(xùn)練方法同上。除空白對(duì)照組注射等體積生理鹽水外，其余各組動(dòng)物于每日學(xué)習(xí)完后立即皮下注射120 mg/kg亞硝酸鈉。14 d，各給藥組給藥1 h后，進(jìn)行水迷宮試驗(yàn)，方法同上，結(jié)果以小鼠的平均潛伏期為指標(biāo)，t檢驗(yàn)進(jìn)行組間比較。結(jié)果見表3。

3 結(jié)果

3.1 對(duì)戊巴比妥鈉所致小鼠記憶獲得障礙模型的影響 模型對(duì)照組動(dòng)物于實(shí)驗(yàn)第2～5 d，與空白對(duì)照組比較平均潛伏期比較均顯著延長(P＜0.05或P＜0.01)，小鼠記憶獲得障礙模型成立;與模型對(duì)照組比較，蘇香1號(hào)28、14 mg/kg組動(dòng)物造模第4、5天平均潛伏期均顯著縮短(P＜0.05或P＜0.05)。表明蘇香1號(hào)28、14 mg/kg組能顯著降低戊巴比妥鈉引起的憶獲得障礙模型小鼠的潛伏期。見表1。

表1 蘇香1號(hào)對(duì)戊巴比妥鈉所致的記憶獲得障礙小鼠潛伏期的影響(s，±s)

表1 蘇香1號(hào)對(duì)戊巴比妥鈉所致的記憶獲得障礙小鼠潛伏期的影響(s，±s)

注:與空白對(duì)照組比較▲P＜0.05，▲▲P＜0.01，與戊巴比妥鈉組比較*P＜0.05，＊＊P＜0.01，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義

組別 劑量mg/kg 第1天(s) 第2天(s) 第3天(s) 第4天(s) 第5天(s)空白對(duì)照組 - 46.76±10.43 27.22±14.25 23.96±9.33 26.75±8.06 18.65±9.88模型對(duì)照組 - 52.34±11.98 40.99±9.89▲ 36.86±14.72▲ 37.82±12.99▲ 35.63±9.80▲▲吡拉西坦組 640 52.17±11.70 36.75±17.15 24.83±10.11* 25.15±9.22* 20.40±8.81＊＊蘇香1號(hào)組 28 46.29±14.64 42.68±13.44 40.28±15.56 32.95±14.60 21.84±10.52*蘇香1號(hào)組 14 43.55±12.14 46.17±9.33 29.07±11.90 20.57±8.64＊＊ 19.74±11.65*蘇香1號(hào)組 7 49.22±13.21 45.43±10.29 33.17±13.56 34.66±13.40 30.25±13.69

3.2 對(duì)乙醇所致小鼠記憶再現(xiàn)障礙模型的影響 各組小鼠學(xué)習(xí)訓(xùn)練4 d后，平均潛伏期較第一天均已經(jīng)明顯縮短，各組動(dòng)物均能找到站臺(tái)。第5日，一次性口服灌胃50%乙醇7 ml/kg后，與空白對(duì)照組比較模型對(duì)照組動(dòng)物潛伏期延長差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)，小鼠記憶再現(xiàn)障礙模型成立;與模型對(duì)照組比較蘇香1號(hào)28、14 mg/kg組動(dòng)物潛伏期明顯縮短(P＜0.05)。表明蘇香1號(hào)28、14 mg/kg組能顯著降低乙醇引起記憶再現(xiàn)障礙模型小鼠找到站臺(tái)的潛伏期。見表2。

表2 蘇香1號(hào)對(duì)乙醇所致的記憶再現(xiàn)障礙小鼠潛伏期的影響(s，±s)

表2 蘇香1號(hào)對(duì)乙醇所致的記憶再現(xiàn)障礙小鼠潛伏期的影響(s，±s)

注:與空白對(duì)照組比較▲▲P＜0.01，與模型對(duì)照組比較*P＜0.05，＊＊P＜0.01，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義

組別 劑量mg/kg 第1天(s) 第2天(s) 第3天(s) 第4天(s) 第5天(s)空白對(duì)照組 - 43.10±7.33 30.04±11.66 29.10±12.99 24.74±9.93 21.57±10.13模型對(duì)照組 - 42.75±13.88 32.64±14.85 32.55±10.24 26.79±13.78 45.50±7.19▲▲吡拉西坦組 640 44.22±10.25 37.51±13.20 31.50±11.24 25.06±10.45 20.14±9.78＊＊蘇香1號(hào)組 28 43.53±12.88 39.26±13.52 33.53±10.55 29.84±11.26 28.54±11.77*蘇香1號(hào)組 14 44.41±10.51 45.48±10.65 41.79±11.93 30.06±15.61 28.94±15.38*蘇香1號(hào)組 7 37.83±9.83 33.26±14.97 30.53±14.98 30.06±12.62 35.37±17.53

3.3 對(duì)亞硝酸鈉所致小鼠記憶鞏固障礙模型的影響實(shí)驗(yàn)第2～4 d，與空白對(duì)照組比較模型對(duì)照組小鼠潛伏期比較均顯著延長(P＜0.05)。實(shí)驗(yàn)第4 d，與模型對(duì)照組比較，蘇香1號(hào)28、14、7 mg/kg組動(dòng)物潛伏期均明顯縮短(P＜0.05和P＜0.01)。表明蘇香1號(hào)28 mg/kg組能顯著降低亞硝酸鈉引起記憶鞏固障礙模型小鼠找到站臺(tái)的潛伏期。見表3。

表3 蘇香1號(hào)對(duì)亞硝酸鈉所致記憶鞏固障礙小鼠平均潛伏期的影響(s，±s)

表3 蘇香1號(hào)對(duì)亞硝酸鈉所致記憶鞏固障礙小鼠平均潛伏期的影響(s，±s)

注:與空白對(duì)照組比較▲P＜0.05，與模型對(duì)照組比較*P＜0.05，＊＊P＜0.01，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義

組別 劑量mg/kg 第1天(s) 第2天(s) 第3天(s) 第4天(s)空白對(duì)照組 - 44.24±7.19 28.54±11.91 15.97±6.22 22.46±6.81模型對(duì)照組 - 48.36±9.26 42.85±10.47▲ 23.44±6.88▲ 31.76±7.39▲吡拉西坦組 640 47.88±9.56 33.12±10.26 18.21±6.02 18.43±6.17＊＊蘇香1號(hào)組 28 51.57±11.58 35.81±11.79 30.10±15.79 22.92±7.05*蘇香1號(hào)組 14 45.52±14.55 30.54±8.30 29.84±17.80 32.78±15.79蘇香1號(hào)組 7 49.83±13.20 37.17±9.56 29.26±11.02 31.26±9.62

3 討論

學(xué)習(xí)記憶屬于高級(jí)神經(jīng)活動(dòng)，其基本過程可以大致分為獲得(Acquisition)、鞏固(Consolidation)和再現(xiàn)(Retrieval)三個(gè)階段［5］。學(xué)習(xí)和記憶既是腦的高級(jí)功能，又是極復(fù)雜的神經(jīng)活動(dòng)過程，相應(yīng)的，學(xué)習(xí)記憶障礙的產(chǎn)生機(jī)制也十分復(fù)雜，涉及神經(jīng)生理學(xué)、神經(jīng)藥理學(xué)、神經(jīng)生化學(xué)等多學(xué)科的內(nèi)容。根據(jù)記憶過程的生理生化基礎(chǔ)，在進(jìn)行藥物研究中，通常在訓(xùn)練前或訓(xùn)練后不同時(shí)間給予動(dòng)物某些化學(xué)藥物，造成各種記憶障礙模型。此種模型較正常動(dòng)物更能正確反應(yīng)藥物的作用，從而可用于藥物的篩選或初步分析其作用機(jī)理。

中樞神經(jīng)抑制劑戊巴比妥鈉，能破壞動(dòng)物的學(xué)習(xí)記憶獲得，致使小鼠記憶獲得障礙。蘇香1號(hào)28、14 mg/kg能使記憶獲得障礙小鼠平均潛伏期縮短，與模型對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。乙醇在低濃度下可明顯破壞記憶過程［6］，能明顯干擾記憶的在現(xiàn)，造成記憶再現(xiàn)障礙，且結(jié)果穩(wěn)定。蘇香1號(hào)28、14 mg/kg組能明顯縮短記憶再現(xiàn)障礙小鼠的平均潛伏期(P＜0.05)。小鼠皮下注射亞硝酸鈉(NaNO2)可致動(dòng)物腦部缺氧［5］，造成腦血循環(huán)發(fā)生障礙，導(dǎo)致記憶能力下降。蘇香1號(hào)28 mg/kg組動(dòng)物能明顯縮短記憶鞏固障礙小鼠的平均潛伏期(P＜0.05)。以上實(shí)驗(yàn)表明，蘇香1號(hào)能明顯改善戊巴比妥鈉、乙醇和亞硝酸鈉所致的記憶獲得障礙、記憶再現(xiàn)障礙以及記憶鞏固障礙。

［1］董曉華，張丹參，房杰.大黃酚對(duì)東莨菪堿致小鼠學(xué)習(xí)記憶障礙的作用及腦內(nèi)NO和NOS的影響.河北北方學(xué)院醫(yī)學(xué)報(bào)，2009，26(1):7-9.

［2］徐叔云，卞如濂，陳修.藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué).第二版，北京:人民衛(wèi)生出版社，1992，662-663.

［3］顧健，胡錦官，譚睿。石菖蒲及其有效成分對(duì)小鼠學(xué)習(xí)記憶的作用及α-細(xì)辛醚藥物動(dòng)力學(xué)研究.世界科學(xué)技術(shù)中醫(yī)藥現(xiàn)代化基礎(chǔ)研究，2003，5(1):53-57.

［4］陳艷萍.珍腦膠囊對(duì)NaNO2所致記憶鞏固障礙小鼠學(xué)習(xí)記憶能力的影響.現(xiàn)代中藥研究與實(shí)踐，2009，23(4):39-40.

［5］吳馥梅，蕭信生.學(xué)習(xí)記憶及其腦內(nèi)突觸機(jī)制.自然雜志，1991，14(10):746.

［6］汪根盛.乙醇的神經(jīng)行為毒性及作用機(jī)制，職業(yè)衛(wèi)生與應(yīng)急救援，1997，15(3):148-150.