孫 虹 ，沈 琳 ，胡雅靜 ，胡淑毅 ，許 睿 ，方永奇 ，李 翎

（1.國家中藥現(xiàn)代化工程技術(shù)研究中心，廣東珠海 519020；2.麗珠集團(tuán)利民制藥廠，廣東韶關(guān) 512028；3.廣州中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院臨床實驗中心，廣東廣州 510405）

復(fù)方五指柑膠囊是在部頒標(biāo)準(zhǔn)收載品種復(fù)方五指柑片的基礎(chǔ)上研制而成的一種中藥制劑，具有清熱解表，燥濕止瀉的功效，臨床上用于治療急性胃腸炎、風(fēng)熱感冒、痢疾等疾病[1-2]。本次試驗對復(fù)方五指柑膠囊進(jìn)行毒理學(xué)研究，觀察小鼠灌胃給藥的急性毒性反應(yīng)以及大鼠連續(xù)給藥2個月所產(chǎn)生的毒性反應(yīng)，觀察小鼠灌胃一次給予藥物后所產(chǎn)生的急性毒性反應(yīng)和死亡情況，了解藥物不同劑量長期使用后可能對機(jī)體產(chǎn)生的毒性反應(yīng)，毒性作用的靶器官及其恢復(fù)和發(fā)展情況，確定無毒反應(yīng)劑量，為擬定人用安全劑量提供參考。

1 材料與方法

1.1 藥物

復(fù)方五指柑膠囊（每粒膠囊含3.0g 生藥，麗珠集團(tuán)利民制藥廠，批號：20030416）。

1.2 儀器與試劑

雅培CEU-DYN3500R 型全自動血液分析儀 （美國雅培公司）；OLYMPUS AU600 型全自動生化分析儀 (日本奧林巴斯公司)。

1.3 動物及試驗環(huán)境[3-4]

NIH 小白鼠20 只，雌雄各半，體重18～22g，合格證號：2002A022。SD 大鼠，體重150～200g，雌雄各半，每組20 只。由廣東省醫(yī)學(xué)實驗動物中心提供，合格證號：2002A024。動物房保持通風(fēng)、干燥，室溫18～25℃，濕度60%～80%，普通鼠料飼養(yǎng)，自由飲水。

1.4 小鼠急性毒性試驗[5]

取20 只小鼠，雌雄各半，藥物配成最大濃度50%，按0.8ml/20g體重（20g/20g 體重）灌胃給藥。給藥后連續(xù)觀察7d，觀察期間記錄動物的毒性反應(yīng)情況和死亡情況。

1.5 大鼠長期毒性試驗[5]

取SD 大鼠80 只，隨機(jī)分為4 組，每組20 只，大鼠連續(xù)2個月給予復(fù)方五指柑膠囊灌胃。受試藥劑量分別為：復(fù)方五指柑膠囊高劑量、中劑量、低劑量（2.01、1.02、0.51g/kg）。對照組給予生理鹽水，每日灌胃給藥1次，觀察一般狀況。每周測量體重1次，并調(diào)整給藥量。給藥2個月后，每組處死一半動物并進(jìn)行肉眼尸檢，測量動物器官指數(shù)，進(jìn)行病理、血液學(xué)、血液生化學(xué)檢查。剩余動物停藥繼續(xù)觀察2周后處死，并進(jìn)行上述檢查。

1.6 統(tǒng)計學(xué)方法

各組數(shù)據(jù)均計算組平均值±標(biāo)準(zhǔn)差，采用t 檢驗比較各給藥組與對照組之間的差異，并且將指標(biāo)數(shù)據(jù)與該種系大鼠的正常值范圍比較，確定各項檢查是否出現(xiàn)異常。

2 結(jié)果

2.1 急性毒性試驗結(jié)果

20 只小鼠給予復(fù)方五指柑膠囊，觀察7d，小鼠呼吸均勻，一般狀態(tài)良好，活動、進(jìn)食正常，皮毛均好，體重增加正常，無明顯的毒性反應(yīng)癥狀，動物無一例死亡，無法測出LD50，按給藥量求小鼠最大耐受量。復(fù)方五指柑膠囊小鼠最大耐受量大于0.40g/20g 體重（20g/kg 體重），相當(dāng)于臨床推薦用量的370倍以上。在該劑量下，動物未見異常表現(xiàn)，情況良好，說明該藥無明顯急性毒性作用。

2.2 長期毒性試驗結(jié)果

連續(xù)給予2個月復(fù)方五指柑膠囊后，大鼠活動基本正常，未出現(xiàn)明顯毒性癥狀或死亡；肉眼尸檢：各臟器無異常；動物器官指數(shù)檢查、血液學(xué)檢查、血液生化學(xué)檢查及病理學(xué)檢查，各項指標(biāo)均在正常范圍內(nèi)，未見異常。給藥組與對照組比較無顯著性差異，且各組停藥2周后，各項指標(biāo)與對照組比較無顯著性差異。心、肝、脾、肺、腎、胃、腸、腎上腺、胸腺的病理組織學(xué)檢查也未見明顯病理性變化。

2.2.1 一般狀況 在給藥期間，動物毛發(fā)有光澤，活動自如，精神狀態(tài)正常，攝食、糞便等未見異常。各用藥組動物每周體重逐漸增加，與對照組比較無顯著性差異，見表1。結(jié)果表明藥物對動物體重增加無明顯影響。

表1 長期給藥對大白鼠體重的影響（±s，g）

表1 長期給藥對大白鼠體重的影響（±s，g）

組別 0周 1周2周3周4周5周高劑量組中劑量組低劑量組對照組組別高劑量組中劑量組低劑量組對照組182.5 ±28.6 172.7 ±20.1 191.6 ±20.8 176.7 ±25.0 6周293.0 ±51.8 292.4 ±44.8 304.5 ±41.2 324.2 ±82.9 212.7 ±35.0 215.9 ±25.7 218.4 ±29.7 214.4 ±36.3 7周305.0 ±56.8 307.9 ±51.8 328.2 ±48.5 333.0 ±86.9 228.4 ±40.4 239.1 ±37.3 242.7 ±32.7 244.2 ±47.8 8周310.5 ±61.5 315.3 ±58.5 338.4 ±53.3 338.6 ±90.3 242.8 ±48.8 253.8 ±35.4 256.7 ±30.9 274.3 ±62.4 9周319.2 ±63.0 333.2 ±62.0 358.9 ±57.5 343.9 ±94.1 255.3 ±43.8 264.6 ±39.6 270.1 ±32.3 292.7 ±69.6 11周（停藥2周后）345.0 ±81.0 353.5 ±93.7 352.2 ±63.3 341.1 ±91.4 266.3 ±45.7 273.4 ±41.0 283.8 ±34.6 304.3 ±75.9

2.2.2 血液分析 給藥后各組大鼠血液分析指標(biāo)的變化見表2、3。結(jié)果顯示，給藥2個月后，血液分析各項指標(biāo)未見明顯異常，與對照組比較無顯著性差異。停藥2周后，各項指標(biāo)未見明顯異常，與對照組比較無顯著性差異。

表2 給藥60d后大白鼠血液分析指標(biāo)變化（±s）

表2 給藥60d后大白鼠血液分析指標(biāo)變化（±s）

組別 WBC（×109/L） NEU（×109/L）高劑量組中劑量組低劑量組對照組組別高劑量組中劑量組低劑量組對照組5.39 ±1.51 5.08 ±1.65 4.25 ±1.62 4.74 ±1.70 BASO（×109/L）0.033 ±0.024 0.043 ±0.077 0.014 ±0.012 0.024 ±0.026 0.99 ±0.26 2.06 ±1.10 1.29 ±0.62 1.21 ±0.48 RBC（×1012/L）7.40 ±0.60 7.42 ±0.48 7.49 ±0.56 7.83 ±0.76 LYM（×109/L）2.76 ±0.76 1.89 ±0.55 1.85 ±0.43 2.03 ±1.08 HGB（g/L）140 ±8.39 147 ±16.6 144 ±15.6 148 ±5.30 MONO（×109/L）1.24 ±0.59 1.03 ±0.41 0.85 ±0.29 0.95 ±0.61 HCT（×109/L）0.704 ±0.03 0.739 ±0.03 0.721 ±0.05 0.733 ±0.03 EOS（×109/L）0.038 ±0.025 0.075 ±0.025 0.068 ±0.041 0.060 ±0.047 PLT（×109/L）697 ±126 640 ±81.5 633 ±141 665 ±124

表3 停藥14d后大白鼠血液分析指標(biāo)變化（±s）

表3 停藥14d后大白鼠血液分析指標(biāo)變化（±s）

組別 WBC（×109/L） NEU（×109/L）高劑量組中劑量組低劑量組對照組組別高劑量組中劑量組低劑量組對照組4.54 ±0.95 5.43 ±1.87 3.77 ±0.93 4.02 ±0.90 BASO（×109/L）0.022 ±0.040 0.020 ±0.017 0.040 ±0.066 0.017 ±0.023 1.01 ±0.28 1.93 ±0.88 1.38 ±0.74 1.54 ±0.74 RBC（×1012/L）7.47 ±0.61 7.41 ±0.46 7.46 ±0.68 7.55 ±0.70 LYM（×109/L）2.56 ±0.82 1.85 ±0.46 1.71 ±0.75 2.04 ±0.55 HGB（g/L）144 ±20.8 145 ±22.5 144 ±17.3 155 ±19.7 MONO（×109/L）1.21 ±0.41 1.14 ±0.35 1.02 ±0.25 0.99 ±0.20 PLT（×109/L）679 ±155 678 ±119 633 ±124 623 ±89 EOS（×109/L）0.039 ±0.033 0.074 ±0.071 0.048 ±0.040 0.044 ±0.068 HCT（×109/L）0.75 ±0.06 0.75 ±0.05 0.71 ±0.04 0.74 ±0.04

2.2.3 血液生化學(xué)檢查 給藥后各組大鼠血液生化指標(biāo)的變化見表4、5。結(jié)果顯示，給藥2個月及停藥2周后，各項血液生化指標(biāo)與對照組比較均無顯著性差異。

2.2.4 器官指數(shù)測定 給藥后各組大鼠器官指數(shù)的變化結(jié)果顯示，各給藥組與對照組比較，給藥60d 與停藥14d 后，大鼠的心、肝、脾、肺、腎等五種重要器官的器官指數(shù)與對照組比較均無顯著性差異。

表4 給藥60d后大白鼠血液生化學(xué)指標(biāo)變化（±s）

表4 給藥60d后大白鼠血液生化學(xué)指標(biāo)變化（±s）

組別 BUN（mmol/L） CREA（μmol/L）高劑量組中劑量組低劑量組對照組6.74 ±0.54 7.07 ±1.16 6.61 ±0.60 6.82 ±1.30 54 ±5.09 59 ±5.63 55 ±4.08 61 ±7.42glu（mmol/L）6.21 ±1.56 5.64 ±0.49 6.06 ±0.68 5.85 ±0.44 ALP（μ/L）196 ±43.0 204 ±61.5 197 ±87.4 197 ±51.0 AST（μ/L） ALT（μ/L） TP（g/L） ALB（g/L）gLO（mmol/L）39.6 ±7.8 39.2 ±5.0 39.0 ±6.0 36.9 ±4.3 33.7 ±7.2 38.3 ±9.6 32.0 ±9.6 34.9 ±9.8 79.2 ±3.51 82.8 ±8.10 77.1 ±7.13 78.5 ±4.60 36.2 ±2.3 39.9 ±4.59 35.7 ±1.99 37.5 ±2.72 42.6 ±2.29 42.8 ±4.91 41.4 ±2.59 41.1 ±4.35

表5 停藥14d后大白鼠血液生化學(xué)指標(biāo)的變化（±s）

表5 停藥14d后大白鼠血液生化學(xué)指標(biāo)的變化（±s）

組別 BUN（mmol/L） CREA（μmol/L）高劑量組中劑量組低劑量組對照組6.86 ±0.93 6.68 ±0.44 6.54 ±0.61 6.76 ±0.81 55 ±5.47 56 ±5.95 56 ±4.31 56 ±5.15glu（mmol/L）5.99 ±1.42 5.79 ±0.95 5.87 ±0.28 5.61 ±0.46 ALP（μ/L）145 ±22.6 190 ±48.5 188 ±27.7 181 ±55.0 AST（μ/L） ALT（μ/L） TP（μmol/L） ALB（g/L）gLO（g/L）37.6 ±6.3 39.0 ±6.6 37.2 ±3.8 35.2 ±3.1 35.9 ±4.2 35.9 ±5.6 35.4 ±3.7 33.5 ±3.8 68.5 ±19.5 80.3 ±7.16 74.6 ±4.20 76.7 ±4.34 36.4 ±1.77 39.3 ±3.13 36.7 ±1.11 36.5 ±2.26 42.1 ±3.45 42.5 ±5.76 41.0 ±4.22 41.4 ±3.87

2.2.5 病理組織學(xué)檢查 大體尸解：動物處死后，立即解剖，各組大鼠各臟器未發(fā)現(xiàn)有明顯病變。病理檢查：光鏡下觀察高、中、低劑量組，膠囊輔料組和對照組動物的心、肝、脾、肺、腎、胃、腸、胸腺、腎上腺的組織切片。觀察結(jié)果表明，長期給藥60d 后，各劑量組動物各器官均未見明顯異常。停藥2周后，各組動物各器官亦未見異常。

3 結(jié)論

3.1 小鼠的急性毒性試驗

復(fù)方五指柑膠囊小鼠最大耐受量大于0.40g/20g 體重（20g/kg 體重），相當(dāng)于臨床推薦用量的370倍以上。在該劑量下，動物未見異常表現(xiàn)，情況良好，說明該藥無明顯急性毒性作用。

3.2 大鼠的長期毒性試驗

3.2.1 各用藥組動物每周體重逐漸增加，與對照組比較無顯著性差異，表明藥物對動物體重增加無明顯影響。

3.2.2 一般外觀觀察及肉眼尸檢結(jié)果顯示，無明顯毒性反應(yīng)。

3.2.3 復(fù)方五指柑膠囊給藥60d 后，血液學(xué)檢查、血液生化檢查、動物器官指數(shù)等檢查結(jié)果表明，各用藥組動物與對照組比較，無顯著性差異，所有指標(biāo)均在正常范圍內(nèi)。

3.2.4 病理結(jié)果顯示，長期給藥后大鼠各器官中未發(fā)現(xiàn)毒副作用所引起的病理組織學(xué)改變。

綜上所述，大鼠以復(fù)方五指柑膠囊連續(xù)灌胃給藥2個月，各劑量組各項指標(biāo)均未見異常。復(fù)方五指柑膠囊是一種毒副作用小、不易產(chǎn)生蓄積性毒性作用、安全有效的中藥制劑。

[1]江蘇新醫(yī)學(xué)院.中藥大辭典[M].上海:上海科學(xué)技術(shù)出版社,1986:178,559,1122,1131.

[2]肖培根.新編中藥志[M].北京:化學(xué)工業(yè)出版社,2002:457,701.

[3]鄭虎占,董澤宏,佘靖.中藥現(xiàn)代研究與應(yīng)用[M].北京:學(xué)苑出版社,1998:1349,2365.

[4]國家中醫(yī)藥管理局《中華本草》編委會.中華本草[M].上海:上?？萍技夹g(shù)出版社,1996:561,1587.

[5]中華人民共和國衛(wèi)生部藥政管理局.中藥新藥研究指南（藥學(xué)、藥理學(xué)、毒理學(xué)）[S].北京：中國醫(yī)藥科技出版社,2005:203-205,194-198,205.