廣西桂林食品藥品檢驗(yàn)所(541002)蔣玲
廣西中醫(yī)學(xué)院(530001)曾榕榕
功勞木溶液是由功勞木藥材經(jīng)提取加工制成的溶液型醫(yī)院制劑,具有清熱解毒,消毒殺菌之功效,臨床上用于沖洗傷口或濕敷患處。該醫(yī)院制劑現(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中無含量測定項(xiàng)目[1]。功勞木中主含鹽酸小檗堿[2]。本研究采用高效液相色譜法測定制劑中鹽酸小檗堿的含量,結(jié)果滿意。
美國Waters公司515HPLC泵,Waters2487檢測器,Waters717自動進(jìn)樣器,Easy3000色譜工作站。
鹽酸小檗堿對照品由中國藥品生物制品檢定所提供(含量98.1%,批號:110713-200609),功勞木溶液由桂林市中醫(yī)院提供(批號:20080103、20070321、20060926、20060216),乙腈、磷酸為色譜純,水為高純水,其他試劑均為分析純。
2.1 色譜條件 色譜柱:phenomenex C18色譜柱,(5μm,4.6mm×250mm);流動相:乙腈-0.1%十二烷基硫酸鈉-磷酸(480:520:1);流速:1.0ml?min-1;檢測波長:265nm;柱溫:30℃;進(jìn)樣量:10μl。
2.2 對照品溶液的制備 精密稱取鹽酸小檗堿10.10mg,置50ml容量瓶中,加甲醇至刻度,搖勻,作為儲備液。取儲備液1ml,置20ml量瓶中,加甲醇至刻度(含鹽酸小檗堿9.9081μg?ml-1)搖勻,微孔濾膜(0.45μm)濾過,取續(xù)濾液,即得。
2.3 供試品溶液的制備 精密吸取供試品2ml,置25ml容量瓶中,加鹽酸-甲醇(1∶100)溶液至刻度,搖勻;精密吸取2ml,置25ml容量瓶中,加甲醇至刻度,搖勻,微孔濾膜(0.45μm)濾過,取續(xù)濾液,即得。
2.4 測定波長選擇 取鹽酸小檗堿對照品加甲醇制成每1ml含10μg的溶液,在200~400μm范圍內(nèi)進(jìn)行紫外掃描,結(jié)果在265nm處有最大吸收,故選擇265nm為測定波長。
2.5 空白試驗(yàn) 本品為單一藥材制成的制劑,以溶劑作為空白溶液,再取上述對照品溶液和供試品溶液,照色譜條件測定,結(jié)果表明溶劑對測定無干擾,見附圖。
附圖 HPLC色譜圖
2.6 線性范圍考察 取鹽酸小檗堿對照品儲備液2ml置10ml容量瓶中,加甲醇至刻度,搖勻。微孔濾膜濾過,取續(xù)濾液,分別進(jìn)樣1μl、2μl、5μl、10μl、15μl、20μl、25μl、30μl進(jìn)行測定,以峰面積積分值為縱坐標(biāo),進(jìn)樣量為橫坐標(biāo),進(jìn)行線性回歸,鹽酸小檗堿回歸方程為:Y=4882966X-2419,r=0.99996,表明鹽酸小檗堿在0.03964μg~1.18897μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。
2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn) 對同一供試品溶液(批號:20080103),分別在0h、2 h、4 h、6 h、8 h、10 h、12 h、14 h、18 h測定。結(jié)果,鹽酸小檗堿峰面積積分平均值為661549,RSD為 1.3%,說明供試液在18小時內(nèi)穩(wěn)定。
2.8 精密度試驗(yàn) 取對照品溶液,按“2.1”項(xiàng)下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣5次,峰面積的RSD為0.7%,說明精密度良好。
2.9 重復(fù)性試驗(yàn) 精密量取同一供試品(批號:20080103)6份,按供試品溶液的制備方法制備供試品溶液,按色譜條件測定。結(jié)果平均含量為2.087mg?ml-1,RSD=0.8%。
2.10 回收率試驗(yàn) 精密量取已知含量的供試品(批號:20080103)1ml,精密加入一定量的鹽酸小檗堿對照品溶液,按供試品溶液的制備方法制備供試品溶液,測定并計算回收率。結(jié)果,鹽酸小檗堿平均回收率為 100.4%,RSD=1.3%(n=6),見附表1。
附表1 鹽酸小檗堿加樣回收試驗(yàn)結(jié)果
附表2 樣品含量測定結(jié)果
2.11 樣品測定 取樣品,分別按供試品溶液的制備方法制備供試品溶液,測定,結(jié)果見附表2。
3.1 考察了乙腈-磷酸二氫鉀緩沖液(用磷酸調(diào)至pH3.0)、乙腈-十二烷基磺酸鈉-磷酸和乙腈-十二烷基硫酸鈉-磷酸等流動相系統(tǒng),同時還考察了以不同濃度的十二烷基硫酸鈉作為水相時對峰形、分離度、理論塔板數(shù)、保留時間等的影響,最后確定以乙腈-0.1%十二烷基硫酸鈉-磷酸(480:520:1)為流動相,在此條件下,理論塔板數(shù)高、峰形較好、分離效果最佳。值得借鑒使用。
3.2 對柱溫20℃、25℃、30℃、35℃、40℃進(jìn)行比較,以25℃~30℃效果最佳。
3.3 供試品溶液制備方法的選擇。比較了供試品2ml,先加鹽酸-甲醇(1∶100)至25ml,再取2ml加甲醇至25ml,兩步均用甲醇稀釋的方法,結(jié)果以前者為佳。