周立偉，張贊

(哈藥集團三精制藥股份有限公司，黑龍江 哈爾濱 150069)

*周立偉，E-mail460255301@qq.com

HPLC測定益母草片中鹽酸水蘇堿含量

周立偉*，張贊

(哈藥集團三精制藥股份有限公司，黑龍江 哈爾濱150069)

目的建立益母草片中鹽酸水蘇堿含量的測定方法。方法運用HPLC對鹽酸水蘇堿含量進行測定，色譜柱：強酸型陽離子交換色譜柱 (200mm×4.6mm，5μm)，流動相：0.1%三乙胺的0.05mol·L-1磷酸二氫鉀溶液,用磷酸調(diào)節(jié)pH值2.3,檢測波長：192nm，流速1.0mL·min-1,柱溫：室溫。結(jié)果鹽酸水蘇堿的量在25～300μg·mL-1濃度同峰面積呈良好的線性關(guān)系。平均加樣回收率為100.92%，RSD=0.43%。結(jié)論所建立的方法可靠，可用于益母草片的質(zhì)量控制。

益母草片；鹽酸水蘇堿；高效液相色譜法

益母草片是哈藥集團三精制藥股份有限公司生產(chǎn)的活血調(diào)經(jīng)的中藥制劑，其質(zhì)量標準中鹽酸水蘇堿含量測定為沉淀稱重法[1],但該法操作繁瑣、測定周期長，誤差較大，通過檢索對其他含益母草的藥品檢測方法的文獻發(fā)現(xiàn)，鹽酸水蘇堿含量測定方法較為常見的有薄層色譜法[2]、高效液相色譜法[2,3]、HPLC-ELSD法[5]，本文應用高效液相色譜法測定益母草片中鹽酸水蘇堿含量并對其進行方法學考察，結(jié)果表明該法簡便、快速、準確。

1 儀器和試藥

島津2550紫外分光光度計、島津LC20A高效液相色譜儀(DGU-20A5脫氣機，LC-20AT高效泵，SPD-20A檢測器，SIL-20A自動進樣器)Lc-solution工作站軟件，梅特勒電子分析天平。

三乙胺(分析純，天津科密歐)，磷酸二氫鉀(分析純，天津科密歐)，磷酸(天津科密歐)，0.45μm微孔濾膜(津騰)，溶劑過濾器。益母草片(哈藥集團三精黑河藥業(yè)，批號：100804,100805,100901,100902,101001)。

2 方法與結(jié)果

2.1色譜條件

色譜柱：強酸型陽離子交換色譜柱(200mm×4.6mm,5μm)，填充劑為陽離子交換樹脂。流動相：0.1%三乙胺的0.05mol·L-1磷酸二氫鉀溶液,用磷酸調(diào)節(jié)pH值2.3,檢測波長：192nm，柱溫：室溫。

2.2對照品溶液制備

取經(jīng)105℃烘干至恒重的鹽酸水蘇堿對照品，精密稱定，加70%乙醇溶解轉(zhuǎn)容后，制成25μg·mL-1的鹽酸水蘇堿對照品溶液。

2.3供試品溶液的制備

取同一批益母草片(含量為14.8mg/片、基片重0.25g)去糖衣，取約0.5g，精密稱定，置具塞錐形瓶內(nèi)精密加入70%乙醇25mL，稱定重量，加熱回流2h，放冷再稱定重量，用70%乙醇補足減失的重量，搖勻、濾過，取續(xù)濾液2mL，加70%乙醇定容至100mL，即得。

2.4線性范圍及標準曲線制備

分別吸取1，2，4，6，8，10，12μL對照品溶液，以峰面積為橫坐標，濃度為縱坐標，得線性回歸方程Y=426.821X-25.5，r=0.9998，鹽酸水蘇堿的量在25～300μg·mL-1濃度同峰面積呈良好的線性關(guān)系。

2.5精密度試驗

取鹽酸水蘇堿對照品加70%乙醇溶解制成25μg·mL-1的溶液，精密量取10μL注入色譜儀，按上述色譜條件連續(xù)進樣6次，計算鹽酸水蘇堿峰面積積分值的RSD=0.38%，說明儀器精密度較高。

2.6穩(wěn)定性試驗

取同一批益母草片供試品溶液，分別在1，4，8，12，24h進樣，計算鹽酸水蘇堿峰面積積分值的RSD=0.51%，結(jié)果表明樣品在24h內(nèi)是穩(wěn)定的。

2.7重復性試驗

取同一批益母草片供試品溶液，制備6份供試液，按上述色譜條件進樣，計算鹽酸水蘇堿含量的RSD=1.57%，結(jié)果表明本方法重復性好。

2.8回收率試驗

取5份益母草基片約0.25g，精密稱定，置具塞錐形瓶內(nèi)精密加入70%乙醇25mL，稱定重量，加熱回流2h，放冷再稱定重量，用70%乙醇補足減失的重量，搖勻、濾過，取續(xù)濾液2mL，加70%乙醇定容至100mL，取5mL并同時加入鹽酸水蘇堿對照品0.5752mg，置50mL量瓶，加甲醇至刻度，按上述色譜條件測定，結(jié)果見表1。

表1 鹽酸水蘇堿加樣回收率試驗

2.9樣品含量測定

取5批益母草片用沉淀稱重法及HPLC兩種方法同時測定鹽酸水蘇堿含量，結(jié)果見表2。

表2 益母草片中鹽酸水蘇堿含量測定 mg/片

對比分析表明HPLC較沉淀稱重法測定的鹽酸水蘇堿含量準確度有所提高，耗時大大縮短。

3 討論

3.1實驗方法選擇

文獻中鹽酸水蘇堿的含量測定方法較多，考慮高效液相色譜法應用的普遍性及其檢測結(jié)果的準確性，分別采用了大連伊利特，Dikma，Diamonsil3個廠家的強酸型陽離子交換色譜柱(200mm×4.6mm，5μm)，進行試驗，并參考《中國藥典》2010年版一部“益母丸”含量測定項下要求，采用高效液相色譜法進行含量測定，其檢測結(jié)果準確，且方法簡便，耗時短。

3.2測定波長的選擇

取鹽酸水蘇堿對照品乙醇溶液，置島津2100紫外分光光度計上，在波長范圍160～270nm測定，結(jié)果其最大吸收波長為192nm，與2010年版《中國藥典》中益母丸中含量項下的檢測波長相符，故選擇192nm為測定波長。

3.3流動相選擇

益母草片采用益母草為原料，流動相選擇時參考《中國藥典》益母丸及其他文獻[4]中鹽酸水蘇堿的流動相，均為磷酸二氫鉀溶液(含0.04%三乙胺和0.15%磷酸),本品按此流動相分離效果不理想，后調(diào)整為0.1%三乙胺的0.05mol·L-1磷酸二氫鉀溶液,用磷酸調(diào)節(jié)pH值2.3作流動相后，分離完全，故選擇0.1%三乙胺的0.05mol·L-1磷酸二氫鉀溶液,用磷酸調(diào)節(jié)pH值2.3作流動相。

[1] 衛(wèi)生部.衛(wèi)生部藥品標準·中藥成方制劑[S].第13冊.1997：175.

[2] 國家藥典委員會.中國藥典[S].一部.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：1024-1026，272-273.

[3] 馮旭.杜成智.梁臣艷，等.HPLC-ELSD測定益母草中鹽酸水蘇堿的含量[J].廣西中醫(yī)藥，2007，30(6)：53-54.

[4] 鄒華,吳云波,王金萍，等.HPLC法測定益母草顆粒中鹽酸水蘇堿含量[J].遼寧中醫(yī)藥大學學報，2006，8(6)：147.

DeterminationofStachydrineHydrochlorideofYimucaoPianbyHPLC

ZHOU Li-wei，ZHANG Zan

(HarbinPharm.GroupSanjingPharmaceuticalShareholdingCo.Ltd,Harbin150069,China)

Objective: Established method for determination of Stachydrine hydrochloride of Yimucao Pian.MethodsUsing high performance liquid chromatography (HPLC) were determined on Stachydrine hydrochloride, column: Actalyst of cation exchange chromatographic column (200mm×4.6mm,5μm), mobile phase:0.05mol·L-1KH2PO4of0.1% triethylamine (TEA, adjusted with phosphoric acid pH=2.3), detection wavelength:210nm, flow rate1.0mL·min-1, column temperature: room temperature.ResultsEphedrine hydrochloride concentration demonstrated good linear relationship in the range of25～300μg·L-1.The average recovery was100.92%, and RSD was0.43%.ConclusionThe method is reliable and can be used for quality control of Yimucao Pian.

Yimucao Pian; Stachydrine hydrochloride; HPLC

2011-01-05)