微生物改良法測定紅細(xì)胞葉酸研究

張春芳

(丹陽市第二人民醫(yī)院,江蘇丹陽 212300)

血液當(dāng)中的葉酸水平比較低的原因很多,與葉酸缺乏巨幼細(xì)胞貧血有關(guān)系,與胎兒神經(jīng)管的缺陷有關(guān)系,可以影響血管的功能,增加卒中的危險,所以血液當(dāng)中葉酸水平的檢測應(yīng)受到高度重視。本文主要用微生物改良法來測定紅細(xì)胞葉酸。

1 資料與方法

1.1 一般資料

測量液:2.40g培養(yǎng)基,0.02g氯霉素,0.11gVC,0.11mL Tween-80,100mL去離子水進(jìn)行配置,每單位5mL進(jìn)行分裝。

保養(yǎng)液:在每升測量液當(dāng)中添加10mL的標(biāo)準(zhǔn)葉酸,然后每單位5mL分裝保存到無菌帶塞試管中,在-20℃的環(huán)境中可以保存1年(標(biāo)準(zhǔn)的葉酸濃度為10ng/mL)。

菌株的制備:耐氯霉素乳酸菌凍干菌株。把凍干的菌株懸浮在5mL保養(yǎng)液上面,在溫度為36℃的環(huán)境下孵育18h,然后取一滴混勻的液體當(dāng)中加入5mL保養(yǎng)液,在36℃的環(huán)境當(dāng)中孵育18h以后,取0.5mL加入 5mL的保養(yǎng)液,在36℃的環(huán)境下孵育6h后用生理鹽水清洗5次,然后用5mL生理鹽水懸浮。

經(jīng)過測定樣本得到:高值質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)為2.3ng/mL,低值質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)為1.8ng/mL。分裝以后保存在-70℃的環(huán)境當(dāng)中,要保證質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)只凍融一次?；加胁煌膊〉幕颊?0例以及健康人員25例,年齡2～39歲。所有的患者都需要空腹,采取3～4mL的肘靜脈血,放在干燥管內(nèi),按照1∶10的比例在1%的VC液當(dāng)中稀釋,然后貯存在-20℃的環(huán)境當(dāng)中。

1.2 方法

把試管放在36℃的環(huán)境下孵育18h后,用721分光光度計比濁。以葉酸濃度為橫軸,光密度值為縱軸作曲線。試管1以及2的OD值要先減去相同濃度空白對照管的OD值,然后查這個試管的葉酸值,所以標(biāo)本的VC血RCF(ng/mL)就是(試管1葉酸值×0.04+試管2葉酸值×0.02)/2。標(biāo)本的紅細(xì)胞葉酸值=[(VC血RCF×10)/紅細(xì)胞壓積]ng/mL。

2 結(jié)果

取高值以及低值的質(zhì)控血清,進(jìn)行20次的平行測定,可以得到高值血清的批內(nèi)CV=3.5%,低值血清的批內(nèi)CV=2.3%。連續(xù)測定20天,然后可以得到高值血清的批間CV=7.4%,低值血清的批間CV=5.2%。健康人員的測定結(jié)果表明紅細(xì)胞葉酸的正常參考值為(585±70)ng/mL。

3 討論

有兩種方法可以測定葉酸,分別是微生物改良法以及競爭結(jié)合方法。后者的操作很簡單,但是價格很昂貴,我國目前大部分用它來測定血清的葉酸。當(dāng)肝功能以及腎功能受到損害的時候,葉酸是可以聚合的,這種聚合體用競爭結(jié)合的方法不能測定,但是微生物改良法可以測定,所以用微生物改良法能夠滿足測定肝功能以及腎功能受損患者的葉酸值。這種測定方法是很經(jīng)典的方法,而且用保養(yǎng)液可以讓菌株長期保存下去,如果保存過程當(dāng)中菌株死亡,還可以購買新的材料重建該實(shí)驗(yàn),不需要購買特殊的儀器,適用于大批量的測定。本實(shí)驗(yàn)的穩(wěn)定性很好,適合在臨床上推廣使用。

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