杜志強(qiáng)，楊晨晨，王建英

（內(nèi)蒙古科技大學(xué) 數(shù)理與生物工程學(xué)院，內(nèi)蒙古 包頭 014010）

猴頭菇（Hericium erinaceus）是一種重要的藥食兩用真菌，它具有“性平、味甘，益五臟，助消化，滋補(bǔ)身體等功效”，而且，在歷代的中醫(yī)典籍中都有廣泛記載[1]。隨著現(xiàn)代生物化學(xué)以及醫(yī)學(xué)的快速發(fā)展，針對于微生物多糖功能方面的研究，越來越廣泛而且深入；目前，根據(jù)現(xiàn)有的關(guān)于多種微生物多糖（靈芝多糖，香菇多糖，茯苓多糖，銀耳多糖等）的研究結(jié)果可以確定：真菌多糖一般都具有免疫調(diào)節(jié)、抗氧化、抗病毒、消炎、降血糖、降血脂、抗輻射、耐缺氧等方面的功能[2]；同時，猴頭菇又是一種容易培養(yǎng)、分布廣泛的真菌，因此，針對于猴頭菇多糖的開發(fā)價值、應(yīng)用潛力、市場前景良好，也可以為臨床多糖類藥品、保健品的開發(fā)應(yīng)用提供實(shí)驗支持。本文旨在通過分離純化獲得猴頭菇多糖，并且研究多糖對小鼠血清抗氧化能力的影響。

1 材料與方法

1.1 材料與動物

猴頭菇：購自包頭市農(nóng)貿(mào)市場。

小白鼠（體重18 g～22 g，雌雄兼有）：屬包頭醫(yī)學(xué)院實(shí)驗動物中心提供的清潔級實(shí)驗動物。

1.2 實(shí)驗藥品與試劑

SOD（超氧化物歧化酶）試劑盒、CAT（過氧化氫酶）試劑盒、MDA（丙二醛）試劑盒：南京建成生物工程有限公司生產(chǎn)；其他試劑均為國產(chǎn)分析純試劑。

1.3 方法

1.3.1 粗多糖的分離提取

將買來的猴頭菇剪碎，在干燥箱中50℃過夜干燥，并且粉碎后充分研磨；稱取干粉適量，加30倍體積的蒸餾水，在80℃下充分提取3 h，之后將提取液經(jīng)過3000 r/min離心15 min后取上清液，將上清液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮到原體積的1/3，再用3倍體積的無水乙醇沉淀粗多糖[3]，并且靜置過夜；次日經(jīng)4000 r/min離心10 min后取沉淀，將沉淀進(jìn)行真空冷凍干燥，即為猴頭菇粗多糖。

1.3.2 粗多糖的純化

取干燥后的粗多糖適量（5 g～10 g），用100 mL蒸餾水充分溶解，進(jìn)行抽濾除雜質(zhì)，濾液用Sevage法除去蛋白質(zhì)；除去蛋白質(zhì)雜質(zhì)的透析液用3倍體積的無水乙醇進(jìn)行多糖沉淀，并且將離心后的沉淀進(jìn)行真空冷凍干燥，即為猴頭菇多糖[4]，命名為HeP，將HeP用蒸餾水溶解，按要求配成不同劑量的溶液，即可進(jìn)行體內(nèi)試驗。

1.3.3 動物分組與多糖劑量的設(shè)定

小鼠按照體重隨機(jī)分為猴頭菇多糖的高劑量組（HeP 400 mg/kg）、中劑量組（HeP 200 mg/kg）、低劑量組（HeP 50 mg/kg）、正常對照組4組，每組設(shè)置多于12只數(shù)目的小白鼠，以保證實(shí)驗結(jié)束時有足夠的采樣點(diǎn)；而且，要求雌雄各半，試驗期間按照性別一組兩籠，自由飲食飲水[5]。之后，根據(jù)體重將猴頭多糖組按照設(shè)定的劑量每天定時灌胃一次，正常對照組以蒸餾水灌胃，試驗持續(xù)4周。

1.4 猴頭菇多糖對小鼠血清抗氧化能力的影響作用

動物連續(xù)給藥4周后，于末次給藥12 h之后，將4組小鼠采用摘除眼球的方法取血，經(jīng)過3000 r/min低溫低速離心15 min，獲得血清[6]。之后馬上按照試劑盒的要求測定4組小鼠血清中SOD、CAT、MDA的含量，各項試驗均利用統(tǒng)計分析軟件SPSS（版本12.0）進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，要求結(jié)果以的形式表示。

2 結(jié)果

2.1 多糖的提取得率與多糖含量

按照設(shè)計的提取方法，從500 g猴頭菇干粉（平均分成10份，每份提取3次）中提取粗多糖，共收集到粗多糖50.45 g，平均得率為10.09%；之后將50.45 g粗多糖全部進(jìn)行純化，共收集到多糖8.33g，平均得率為16.51%。

2.2 血清SOD含量的測定結(jié)果

血清SOD含量的測定結(jié)果如表1所示。

表1 SOD含量的測定結(jié)果Table 1 Detection result of the SOD content

從表1血清SOD含量的測定結(jié)果可見：猴頭菇多糖可以明顯提高小鼠血清中SOD的含量；其中，猴頭菇多糖高劑量對血清SOD含量的提高作用與對照組相比，差異極顯著；中劑量多糖對SOD含量的提高作用與對照組相比，存在顯著差異。

小鼠血清SOD含量的變化趨勢表明：與正常對照組相比較，高劑量猴頭多糖使小鼠血清的SOD含量提高了57.5%，中劑量多糖使小鼠血清的SOD含量提高了39.9%。

表2 CAT含量的測定結(jié)果Table 2 Detection result of the CAT content

2.3 血清CAT含量的測定結(jié)果

血清CAT含量的測定結(jié)果如表2所示。

如表2血清CAT含量的測定結(jié)果所示：猴頭菇多糖可以明顯提高小鼠血清中CAT的含量；其中，猴頭菇多糖高劑量對血清CAT含量的提高作用與對照組相比，差異極顯著。小鼠血清CAT含量的變化趨勢表明：與正常對照組相比較，高劑量猴頭多糖使小鼠血清的CAT含量提高了53.3%。

表3 MDA含量的測定結(jié)果Table 3 Detection result of the MDA content

2.4 血清MDA含量的測定結(jié)果

血清MDA含量的測定結(jié)果見表3。

如表3血清MDA含量的測定結(jié)果所示：猴頭菇多糖可以明顯降低小鼠血清中CAT的含量；其中，猴頭菇多糖高劑量對血清MDA含量的降低作用與對照組相比，差異顯著。小鼠血清MDA含量的變化趨勢表明：與正常對照組相比較，高劑量猴頭多糖使小鼠血清的MDA含量降低了33.9%。

3 結(jié)論

SOD是機(jī)體清除各類氧自由基的重要酶類，能夠催化氧自由基的歧化反應(yīng)，對需氧生物體起到保護(hù)作用；CAT是機(jī)體清除過氧化氫的重要酶類，可以使機(jī)體細(xì)胞避免遭受過氧化氫的毒害，是機(jī)體防御體系的關(guān)鍵酶之一[7]；MDA是機(jī)體膜脂發(fā)生過氧化的直接產(chǎn)物，因此，測定機(jī)體SOD、CAT活性以及MDA的含量可以間接反映機(jī)體清除自由基、清除過氧化氫、抗脂質(zhì)過氧化的能力，從而可以衡量機(jī)體的組織、細(xì)胞的抗氧化能力[8]。

本試驗通過利用分離純化得到的猴頭菇多糖，進(jìn)行了對小鼠血清抗氧化能力的影響作用的研究，根據(jù)實(shí)驗結(jié)果可以得出如下結(jié)論：猴頭菇多糖可以明顯提高小鼠血清的SOD和CAT的含量，具有良好的抗氧化能力；同時，猴頭菇多糖可以明顯降低小鼠血清MDA的含量，其具有較強(qiáng)的抗脂質(zhì)過氧化的能力。因此，針對于猴頭菇多糖的開發(fā)潛力和市場前景極佳。

[1]楊炎,周昌艷,王晨光,等.猴頭多糖調(diào)節(jié)機(jī)體免疫功能的研究[J].食用菌學(xué)報,2000,7(1):19-22

[2]傅明輝,林總?cè)A.沙棘果水溶性多糖的分離純化、組分分析及抗氧化學(xué)性的研究[J].食品科學(xué),2002,23(3):73-75

[3]周林珠,楊祥良,周井炎,等.多糖抗氧化作用研究進(jìn)展[J].中國生化藥物雜志,2002,23(4):210-212

[4]崔榮軍,曹穎莉,趙璇.螺旋藻多糖對老齡小鼠腦中SOD、MDA的影響[J].中國初級衛(wèi)生保健,2003,17(4):68-69

[5]段玉峰,韓果萍.馬齒莧多糖組分的分離純化及抗氧化活性研究[J].食品科學(xué),2005,26(3):225-228

[6]丁利君,吳倩萍.黃芪多糖的提取及其對自由基的清除作用[J].食品與機(jī)械,2003(4):7-9

[7]楊瑞欣.枸杞多糖提取工藝及抗氧化活性的研究與探討[J].化學(xué)工程與裝備,2010(9):42-43

[8]程仕偉,于曉明,張玉香.紫貽貝多糖提取及其體外抗氧化活性研究[J].食品工業(yè)科技,2010,31(9):132-134