陳其勇，鄭文杰，肖亞兵，王云鳳，常春艷

（天津出入境檢驗(yàn)檢疫局，天津 300456）

二甲戊樂靈（pendimethalin）、氟樂靈（trifluralin）及雙甲樂靈（butralin）是在我國應(yīng)用比較廣泛的3種二硝基苯胺類選擇性土壤處理除草劑，其農(nóng)藥殘留對后茬作物會產(chǎn)生危害。二甲戊樂靈被認(rèn)為是可疑的內(nèi)分泌干擾劑和可能的致癌物質(zhì)[1]，氟樂靈也可能會對大鼠肝、腎微粒體酶產(chǎn)生影響[2]，歐洲已有國家（組織）禁用或限用此類農(nóng)藥，其他國家也對這3種農(nóng)藥提出了嚴(yán)格的限制指標(biāo)。有關(guān)資料顯示，美國近幾年的大豆除草劑種類調(diào)查中，氟樂靈和二甲戊樂靈的使用量僅次于草甘膦[3]。

在已報道的果蔬類樣品中關(guān)于二甲戊樂靈等藥物農(nóng)藥殘留的測定中，大多采用傳統(tǒng)的液-液萃?。↙LE）法提取樣品中目標(biāo)物[4-5]。這種方法消耗大量有毒有害的有機(jī)溶劑，繁瑣費(fèi)時，而且在萃取過程中容易產(chǎn)生大量乳化液，影響萃取效率。自1989年美國Louisiana州立大學(xué)Barker教授首次提出基質(zhì)固相分散（MSPD）技術(shù)[6]后，該技術(shù)已在蔬菜、水果等農(nóng)藥殘留檢測中得到一定的應(yīng)用。

目前，該類除草劑殘留檢測方法以GC/ECD或GC/MS居多[4-7]，檢測對象以土壤、水、果蔬等樣品為主。文獻(xiàn)檢索表明，目前鮮見應(yīng)用MSPD樣品處理并采用GCMS/MS分析果蔬中以上二甲戊樂靈、氟樂靈、雙丁樂靈多殘留檢測的相關(guān)報道。本研究優(yōu)化MSPD條件，并采用GC-MS/MS測定提取液中的目標(biāo)化合物，滿足果蔬類復(fù)雜機(jī)體的定性及定量需要。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

TSQ Quantum XLS串聯(lián)四極桿氣質(zhì)聯(lián)用儀：美國Thermo Fisher Scientific公司，配置電子轟擊電離（EI）源；T-25型組織勻漿機(jī)：德國IKA公司；氮吹儀：美國Organomation公司；離心機(jī)：美國Sigma公司。

乙腈、正己烷、乙酸：美國Fisher公司；色譜純；PSA填料、C18填料：美國Waters公司；無水硫酸鎂、氯化鈉為分析純：天津化學(xué)試劑二廠；二硝基苯胺類除草劑標(biāo)準(zhǔn)品：美國Sigma公司；以正己烷稀釋成1 mg/mL的儲備液，臨用時根據(jù)需要用正己烷稀釋成適當(dāng)含量的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液。

1.2 方法

1.2.1 樣品的提取

準(zhǔn)確稱取10.0 g試樣于50 mL螺旋蓋聚丙烯離心管中，加入5 g無水硫酸鎂，2 g氯化鈉，10 mL 0.5%乙酸乙腈溶液。10000 r/min均質(zhì)1min。7000 r/min離心5min，取上清液轉(zhuǎn)移至15 mL螺旋蓋聚丙烯離心管。

1.2.2 樣品的凈化

將上述樣品轉(zhuǎn)移到事先裝有300 mg無水硫酸鎂、200 mg PSA填料的小試管中；充分渦旋1 min，過0.22 μm濾膜，供氣相色譜串聯(lián)質(zhì)譜測定。

1.2.3 氣相色譜-質(zhì)譜條件

色譜柱：TR-5MS色譜柱，15 m×0.25 mm（內(nèi)徑）×0.25 μm；柱溫：初始溫度50℃（1 min），以25℃/min升至150℃，再以10℃/min升至250℃，最后以35℃/min升至290℃，保持5 min；進(jìn)樣口溫度：200℃；色譜質(zhì)譜接口溫度：280℃；載氣：氦氣；進(jìn)樣方式：不分流進(jìn)樣，1 min后開閥；離子源:EI源；離子源溫度：250℃；電子能量：70 eV；溶劑延遲時間：4 min；掃描方式：反應(yīng)離子監(jiān)測模式（MRM）；定量離子對及碰撞能量見表1。

表1 選擇離子、碰撞能量及保留時間Table 1 Selected ions,collision energy and retention time

2 結(jié)果與討論

2.1 提取條件的選擇

MSPD法快速農(nóng)藥多殘留分析方法通常采用振蕩提取，改進(jìn)后的方法采用均質(zhì)提取，提取效率更高，尤其對于纖維較長、不易制備為均勻試樣的果蔬類樣品更為合適。提取溶液為經(jīng)正己烷飽和的乙腈溶液，在一定程度上降低了提取溶劑的極性，降低了含水基質(zhì)提取液中的水含量，從而減輕了后續(xù)的除水壓力。

2.2 凈化條件的選擇

乙二胺-N-丙級硅烷（PSA）吸附劑能夠清除許多極性基質(zhì)成分如來自樣品共萃取物的脂肪酸、親脂性色素和糖類等，而十八烷基硅烷（ODS）、石墨化炭黑去除維生素、色素、甾醇的能力較好，然而石墨化炭黑碳黑具有強(qiáng)吸附性，會造成平面型農(nóng)藥（極性芳香族化合物）的流失，使一些農(nóng)藥不易洗脫[7]。本研究采用氣相色譜/四級桿質(zhì)譜儀多離子反應(yīng)監(jiān)測（MRM）測定目標(biāo)化合物，儀器本身具有較強(qiáng)的高分辨、高質(zhì)量精度及選擇性，所以綜合考慮，本研究最終采用單一的PSA作為凈化劑，效果良好。

2.3 不同色譜柱的比較

本研究對兩種不同色譜柱：THERMO TR-5MS SQC 15 m×0.25 mm ID×0.25 μm[其有效成分為5%phenyl（equiv）polysilphenylene-siloxane]與Rxi-5ms30m×0.25 mm ID×0.25 μm（其有效成分為5%diphenyl/95%dimethyl polysiloxane）進(jìn)行比較，發(fā)現(xiàn)Rxi-5ms雖然在總離子流色譜圖上有更好的分離效果，但THERMO TR-5MS總體分析時間僅為Rxi-5 ms色譜柱的一半，能達(dá)到快速測定的目的，故最終采用TR-5MS色譜柱進(jìn)行測定。

2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線及線性范圍

以正己烷為溶劑配制3種二硝基苯胺類除草劑的系列混合標(biāo)準(zhǔn)品溶液，以峰面積為縱軸，濃度為橫軸制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到各種農(nóng)藥的線性方程及相關(guān)系數(shù)，結(jié)果見表2。

表2 3種二硝基苯胺類除草劑的線性回歸方程及相關(guān)系數(shù)Table 2 The regression equation,R2of eleven dinitroaniline herbicides

由表2可以看出，在1.0 ng/mL～20.0 ng/mL質(zhì)量濃度范圍內(nèi)3種農(nóng)藥的線性關(guān)系均良好，混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液的總離子流色譜圖見圖1。

2.5 方法的回收率與精密度

采用標(biāo)準(zhǔn)添加法，選擇卷心菜、橙與洋蔥基質(zhì)，在3種基質(zhì)中分別添加0.005、0.01、0.02 mg/kg水平的3種二硝基苯胺類除草劑混合標(biāo)準(zhǔn)，每個加標(biāo)水平平行測定7次，結(jié)果表明，方法的平均回收率范圍在78.5%～109.3%之間，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差小于8.8%，滿足國內(nèi)外對殘留分析的要求。0.005 mg/kg添加水平的二硝基苯胺類除草劑在洋蔥中的加標(biāo)回收及空白譜圖見圖2。

圖1 氟樂靈、雙丁樂靈及二甲戊樂靈混合標(biāo)準(zhǔn)溶液總離子流色譜圖Fig.1 GC/MS-MS total ion chromatogram of pendimethalin,trifluralin and butralin standard

圖2 洋蔥樣品空白及添加0.005 mg/kg二硝基苯胺類除草劑標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)MRM色譜圖Fig.2 MRM chromatograms of blank onion sample and spiked with 0.005 mg/kg bifenox standard

3 結(jié)論

本研究通過對果蔬類樣品中二甲戊樂靈、雙丁樂靈、氟樂靈提取、凈化、分析測定的方法研究，建立可靠、靈敏、準(zhǔn)確、快速的MSPD-GC-MS/MS法測定果蔬類樣品中的二硝基苯胺類除草劑殘留量測定方法，方法的靈敏度達(dá)到0.005 mg/kg，完全滿足目前日本、歐盟等國際上對二硝基苯胺類除草劑的殘留分析要求。

[1]張智超，曾敏，李朝陽，等.以涂敷硝酸銀的堿性氧化鋁為分散劑的基質(zhì)固相分散法測定大蒜中二甲戊靈殘留[J].農(nóng)藥，2005，7(3)：264-268

[2]杜柳濤，鄔惠瓊，楊興芬，等.氟樂靈對大鼠肝、腎微粒體酶的影響[J].中國職業(yè)醫(yī)學(xué)，2000,27(5)：16-18

[3]霍江蓮，李軍，葛毅強(qiáng)，等.二硝基苯胺類除草劑殘留檢測技術(shù)的研究進(jìn)展[J].農(nóng)藥，2004，45(4)：222-225

[4]黃雅麗，毛黎娟，吳慧明，等.二甲戊樂靈在甘藍(lán)及土壤中的殘留及消解動態(tài)研究[J].農(nóng)業(yè)環(huán)境科學(xué)學(xué)報，2004，23(6)：1147-1150

[5]楊挺，朱勇，趙健，等.豆類蔬菜中二甲戊樂靈殘留檢測方法研究[J].食品科技，2006，31(10):246-248

[6]Barker S A,Long A R,Short C R.Isolation of Drug Residus from Tissues by Solid Phase Dispersion[J].Chromatogr,1989,475(2):361-363

[7]Schenck F J,Hobbs J E.Evaluation of the quick,easy,cheap,effective,rugged and safe(QuEChERS)approachto pesticide residue analysis[J].Bull Environ ContamToxico,2004,73(1):24-30