董憲鳳

(天津市大港區(qū)藥品檢驗所，天津 300270)

HPLC法測定清瘟解毒片中葛根素的含量*

董憲鳳

(天津市大港區(qū)藥品檢驗所，天津 300270)

目的:建立HPLC法測定測定清瘟解毒片中葛根素的含量。方法:采用Diamonsil C18分析柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)，以甲醇－水(25∶75)為流動相，流速0.8 ml/min，檢測波長為250 nm，柱溫30℃。結(jié)果:本方法線性范圍為0.038 6 ～0.772 μg(r=1.000)，平均回收率在97.87% ，RSD 為0.42%(n=9)。結(jié)論:本方法靈敏準確，重現(xiàn)性好，適用于清瘟解毒片中葛根素的含量測定。

高壓液相色譜法，清瘟解毒片，葛根素

清瘟解毒片由大青葉、玄參、連翹、天花粉、桔梗、淡竹葉、葛根、炒牛蒡子和黃芩等16味中藥材組成，具有清瘟解毒作用，用于外感時疫、憎寒壯熱、頭痛無汗、口渴咽干、痄腮和大頭瘟。為了更加有效的控制產(chǎn)品的質(zhì)量，利用HPLC法對處方葛根中葛根素進行含量測定，方法操作簡便易行，具有分離好、靈敏度高、穩(wěn)定性強等優(yōu)點。

1 儀器與試藥

島津高效液相色譜儀 LC－2010AHT，島津高效液相色譜儀工作站 LC－Solution，Diamonsil C18柱(250 mm ×4.6 mm，5 μm)，葛根素對照品(中國藥品生物制品檢定所提供，批號110752－200912);清瘟解毒片(天津中新藥業(yè)集團股份有限公司隆順榕制藥廠，批號1102285、1011278、1103291);甲醇為色譜純，水為純化水。

2 方法和結(jié)果

2.1 色譜條件［1，2］色譜柱為 Diamonsil C18柱，流動相:甲醇 － 水(25∶75)，流速為 0.8 ml/min，柱溫30 ℃，檢測波長為250 nm，進樣量10 μl。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對照品溶液的制備 精取葛根素對照品7.72 mg至200 ml棕色量瓶中，加30%乙醇溶液溶解稀釋至刻度，做為對照品溶液。

2.2.2 供試品溶液的制備 取本品20片，除去糖衣，精密稱定，研細，混勻，精取約0.2 g，精密加入30%乙醇50 ml，稱定重量，超聲處理20 min，放冷，稱定重量，用30%乙醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液備用。

2.2.3 陰性對照溶液的制備 按處方比例(葛根除外)根據(jù)制法制成的陰性樣品，按“2.2.2”項下方法提取，作為陰性對照溶液。

2.3 線性關(guān)系考查 精取對照品溶液1、2、4、10、15和20 μl，按“2.1”項下色譜條件測定，以峰面積 Y 為縱坐標，進樣量 X為橫坐標求得回歸方程為 Y=2.460 1 ×105X －3.186 9 ×102(r=1.000)，結(jié)果葛根素在0.038 6～0.772 μg范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系。

2.4 專屬性試驗 分別取對照品、供試品和陰性對照溶液10 μl，依“2.1”項下色譜條件進樣，記錄色譜圖，見圖1，結(jié)果在葛根素出峰位置未見其他色譜峰，表明其他藥材成分對測定無干擾。

圖1 對照品(A)供試品(B)陰性對照(C)HPLC色譜圖

2.5 精密度試驗 精密吸取一定濃度的對照品溶液，按“2.1”項下色譜條件連續(xù)進樣5 次，進樣量10 μl，測定葛根素峰面積，RSD為0.55%。

2.6 重現(xiàn)性試驗 取同批號的樣品0.2 g，按供試品配制方法制備5份，測定葛根素的含量，RSD為1.02%(n=5)。

2.7 穩(wěn)定性試驗 精密吸取同一濃度的供試品溶液于不同時間按“2.1”項下色譜條件測定，結(jié)果表明在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.8 回收率試驗 精密稱取9份已測得葛根素含量的樣品，分別加入葛根素對照品按樣品測定方法進行測定，結(jié)果平均回收率為97.87%，RSD為0.42%，見表1。

表1 加樣回收試驗

2.9 樣品測定 取3批樣品，按“2.2.2”項下方法制得供試品溶液，按所給色譜條件分別測定峰面積，用外標法計算含量，結(jié)果見表2。

表2 清瘟解毒片中葛根素的含量(n=3)

3 討論

3.1 流動相的選擇 將甲醇－水(10∶80)、甲醇－水(25∶75)、10% 乙腈 －1% 醋酸(54∶46)、甲醇－0.5%冰醋酸(25∶75)四種流動相進行比較，結(jié)果表明選用甲醇－水(25∶75)流動相分離效果好。

3.2 樣品溶液提取方法的選擇 本實驗對提取溶劑、提取方式和提取時間進行了比較，選擇30%甲醇溶液及30%乙醇溶液溶解樣品，結(jié)果表明30%乙醇溶液作為溶劑提取完全。采用30%乙醇溶液對樣品進行加熱回流提取與超聲提取均為20 min，超聲處理所得結(jié)果比加熱回流提取所得結(jié)果稍高，故采用超聲提取方法處理供試品。在選擇提取時間時，分別用30%乙醇溶液超聲20、30和60 min，結(jié)果超聲20 min測得的葛根素峰面積與其他時間測得的峰面積沒有顯著差異，所以提取時間定為20 min。該法具有提取完全、操作簡單快速、準確度和精密度均較好等優(yōu)點，是一種簡便有效的檢測葛根素含量的方法。應(yīng)用此法測得3批樣品結(jié)果表明，該方法可用于該制劑的質(zhì)量控制。

1 中國藥典.一部.2010:1041

2 李雪晴，文愛東.HPLC測定康爾膚膠囊中葛根素的含量.中國實驗方劑學(xué)雜志.2011.17(8):137

HPLC determination of puerarin content of in Qingwenjiedu teblets

Dong Xianfeng
(The Insititute for Drug Control of Dagang，Tianjin 300270)

Objective:An HPLC method was developed for the determination of Puerarin in Qingwen Jiedu tablets.Methods:The chromatographic separation was carried out on Diamonsil C18column(250 mm ×4.6 mm ，5 μm)for the analysis of the mobilephase was methanol－ water(25∶75)，flow rate at 0.8 ml/min，Detection wavelength was set at 250 nm and column temperature was 30 ℃ .Result:the linear range was 0.038 6 ～ 0.772 μg(r=1.000)，the average recovery rate was 97.87%，RSD was 0.42%(n=9).Conclusion:The method was sensitive，accurate and reproducible.It is suitable for the studying on the content of puerarin of in Qingwenjiedu Teblets.

HPLC，Qingwenjiedu teblets，puerarin

R927.2

A

1006-5687(2012)04-0013-03

2012-03-30