趙磊 劉殿武 王俊英 南月敏 戴二黑

乙型肝炎是我國的常見病，其發(fā)病率高、治療困難、對人類健康危害嚴(yán)重。細(xì)胞因子對乙型肝炎的作用很復(fù)雜，成為近年來研究的重點(diǎn)。本實(shí)驗(yàn)通過觀察分析肝炎患者血清中IFN-γ、白介素-10(IL-10)、TGF-β1的含量及其與肝功能和肝纖維化指標(biāo)的關(guān)系，從而評價乙型肝炎患者血清三種細(xì)胞因子檢測的臨床意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料 按2000年全國第十次病毒性肝炎及肝病學(xué)術(shù)會議修訂的《病毒性肝炎防治方案》的診斷標(biāo)準(zhǔn)［1］隨機(jī)選取70例于2005年11月至2006年5月在河北醫(yī)科大學(xué)附屬第三醫(yī)院和石家莊市第五醫(yī)院住院的乙型肝炎患者。其中急性肝炎(AHB)組6例;慢性肝炎輕度(CHBⅠ)組15例，男10例，女5例;平均年齡(43±8)歲;慢性肝炎中度(CHBⅡ)組17例，男11例，女6例;平均年齡(47±8)歲;慢性肝炎重度(CHBⅢ)組14例，男11例，女3例;平均年齡(41±11)歲;肝硬化(LC)組18例，男11例，女7例;平均年齡(54±8)歲。入選病例均除外心、腎、腦、肺等重要臟器疾患，并除外甲、丙、丁、戊型肝炎。以18例健康體檢者為對照(NC)組，男12例，女6例;平均年齡(44±8)歲。

1.2 方法 上述所有受檢對象清晨空腹抽肘靜脈血4 ml，分離血清，－80℃保存?zhèn)溆谩８喂δ苤笜?biāo)檢測采用日本產(chǎn)全自動生化儀;HBV-DNA定量采用PCR法;肝纖四項(xiàng)指標(biāo)檢測采用放射免疫法;血清 IFN-γ、IL-10、TGF-β1 檢測采用 ABC-ELISA法，試劑盒購自北京鼎國生物工程公司，實(shí)驗(yàn)操作嚴(yán)格按照試劑盒操作說明書進(jìn)行。

1.3 統(tǒng)計學(xué)分析 應(yīng)用SPSS 13.0統(tǒng)計軟件，均數(shù)比較采用F檢驗(yàn)和q檢驗(yàn)，相關(guān)性采用直線相關(guān)分析，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 6 組血清 IFN-γ、IL-10、TGF-β1 水平比較 在 AHB、CHB及LC組中，AHB、CHB組血清IFN-γ水平顯著高于NC組，AHB組顯著高于CHB及LC組，CHBⅢ和LC組顯著高于CHBⅠ和CHBⅡ組，LC組顯著高于CHBⅢ組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05或 ＜0.01);AHB、CHB 和 LC 組血清 IL-10水平顯著高于NC組，AHB組顯著低于CHB及LC組，CHBⅢ和LC組顯著高于CHBⅠ和CHBⅡ組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05);AHB、CHB和LC組血清TGF-β1水平顯著高于LC組，AHB組顯著低于CHB及LC組，CHBⅡ、CHBⅢ和LC組顯著高于CHBⅠ組，LC組顯著高于CHBⅡ和CHBⅢ組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P ＜0.05 或 ＜0.01)。見表1。

2.2 CHB 和 LC 患者血清 IFN-γ、IL-10、TGF-β1 與肝功能的關(guān)系 在CHB和LC患者血清中，IFN-γ與ALT無相關(guān)關(guān)系(r=－0.165，P ＞0.05)，與TBIL 呈顯著負(fù)相關(guān)(r= －0.704，P ＜0.01)，與 ALB 和 PTA 呈顯著正相關(guān)(r=0.547、0.693，P ＜0.01)，;IL-10 與 ALT 無相關(guān)關(guān)系(r= －0.185，P ＞0.05)，與TBIL呈顯著正相關(guān)(r= －0.366，P ＜0.05)，與 ALB和 PTA呈顯著負(fù)相關(guān)(r= －0.655、－0.564，P ＜0.01);TGF-β1 與ALT無相關(guān)關(guān)系(r=0.04，P ＞0.05)，與 TBIL呈顯著正相關(guān)(r=0.701，P ＜0.05)，與 ALB 和 PTA 呈顯著負(fù)相關(guān)(r=－0.577、－0.607，P ＜0.01)。見表1。

表1 6 組研究對象血清 IFN-γ、IL-10、TGF-β1 水平pg/ml，xˉ±s

2.3 CHB 和 LC 患者血清 IFN-γ、IL-10、TGF-β1 與肝纖四項(xiàng)的關(guān)系 在CHB和LC患者血清中，IFN-γ與肝纖四項(xiàng)呈顯著的負(fù)相關(guān)(r= －0.648、－0.744、－0.822、－0.592，P ＜0.01);IL-10除與HA具有明顯正相關(guān)外(r=0.374，P ＜0.01)，與其余三項(xiàng)均無相關(guān)關(guān)系(r=0.156、0.229、0.188，P ＞0.05);TGF-β1 與肝纖四項(xiàng)呈正相關(guān)(r=0.649、0.552、0.642、0.521，P ＜0.01)。

2.4 CHB和LC患者血清肝纖四項(xiàng)與血清HBV-DNA的關(guān)系在CHB和LC患者血清中，HBV-DNA陽性患者肝纖四項(xiàng)水平要顯著高于陰性患者，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。而且隨著HBV-DNA復(fù)制水平的增高，肝纖四項(xiàng)水平也逐漸增高。見表2。

表2 CHB和LC患者血清肝纖四項(xiàng)與血清HBV-DNA的關(guān)系xˉ±s

3 討論

乙肝自然感染率高，轉(zhuǎn)歸差異大，其發(fā)病機(jī)制尚未完全闡明。機(jī)體抗病毒免疫的功能及病毒逃避免疫的能力決定HBV感染的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)歸。輔助性T淋巴細(xì)胞根據(jù)其分泌細(xì)胞因子的不同，可將其分為Th1和Th2兩個亞群［2］。Th1亞群分泌IFN-γ、IL-2、TNF-β等，主要參與細(xì)胞介導(dǎo)的免疫反應(yīng)。Th2亞群分泌IL-4、IL-5、IL-6等，主要促進(jìn)體液免疫反應(yīng)。近年來認(rèn)識到Th1/Th2失衡可能是HBV感染慢性化的重要機(jī)制。Penna等［3］檢測了急性自限性乙型肝炎急性期和恢復(fù)期患者外周血Th細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子。急性期產(chǎn)生Th1類細(xì)胞因子(IFN-γ)明顯比對照組高?；謴?fù)期患者Th細(xì)胞表現(xiàn)為Th0功能，同時分泌Th1和Th2細(xì)胞因子(IL-4、IL-5)，提示Th1細(xì)胞不僅與肝損害有關(guān)，可能在控制感染，促進(jìn)疾病恢復(fù)方面起作用。

本次實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，在不同臨床類型乙型肝炎患者中，AHB和CHB組血清IFN-γ和IL-10水平均顯著高于正常組，AHB組血清IFN-γ水平也顯著高于CHB組，而AHB組血清IL-10水平顯著低于CHB組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05或＜0.01)。此研究表明，隨著病情的逐漸加重，血清IFN-γ水平逐漸下降，而血清IL-10和TGF-β1水平逐漸增高。提示三種細(xì)胞因子與慢性乙型肝炎的病情有關(guān)系。這些表明在急性肝炎患者體內(nèi)以Th1類細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞免疫反應(yīng)為主，而在慢性肝炎患者體內(nèi)以Th2類細(xì)胞介導(dǎo)的體液免疫反應(yīng)為主，隨著Th2類細(xì)胞合成的增加，限制了Th1類細(xì)胞的合成，削弱了IFN-γ殺滅 HBV的作用，導(dǎo)致HBV在體內(nèi)持續(xù)存在，從而引起肝炎患者的慢性化。這與文獻(xiàn)報道［4］一致。因此，IL-10可能是決定機(jī)體產(chǎn)生有效的免疫反應(yīng)抵抗HBV感染的關(guān)鍵因子。

本研究結(jié)果還表明，CHB和LC組患者血清IFN-γ與TBIL呈顯著負(fù)相關(guān)(P ＜0.01)，與ALB、PTA呈顯著正相關(guān)(P ＜0.01);血清IL-10與TBIL呈顯著正相關(guān)(P ＜0.01)，與ALB、PTA呈顯著負(fù)相關(guān)(P＜0.01)。說明了上述因子參與了慢性乙型肝炎的肝損傷，并與肝儲備功能有關(guān)。

現(xiàn)已知TGF-β1是肝纖維化形成過程中一個重要的調(diào)控因子，促進(jìn)了肝纖維化的發(fā)展。TGF-β1在肝纖維化中的主要作用是激活星狀細(xì)胞，促使細(xì)胞外基質(zhì)產(chǎn)生增加;抑制膠原酶及基質(zhì)金屬蛋白酶使膠原降解減少及間接促星狀細(xì)胞增殖作用［5，6］。本研究結(jié)果表明，CHB 和 LC 組患者血清 TGF-β1 水平升高，且其升高水平與乙型肝炎的嚴(yán)重程度一致。隨著病情加重和肝纖維化進(jìn)展，血清TGF-β1水平與TBIL呈正相關(guān)，與ALB和PTA呈負(fù)相關(guān)，提示血清TGF-β1與肝臟儲備功能下降有關(guān)。測定患者血清TGF-β1在一定程度上能反映肝功能。

血清PCⅢ、LN、HA、CⅣ水平是肝臟基質(zhì)代謝產(chǎn)物，其血清水平從不同側(cè)面反映肝臟細(xì)胞外間質(zhì)的代謝情況和肝纖維化進(jìn)展情況［7］。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，血清IFN-γ水平與肝纖四項(xiàng)水平均呈明顯負(fù)相關(guān)，表明IFN-γ參與肝纖維化的形成，有較強(qiáng)的抗肝纖維化作用，其水平的降低，提示抗纖維化能力減弱;血清IL-10水平只與肝纖四項(xiàng)中的HA有顯著正相關(guān)，而與其他三項(xiàng)并無相關(guān)關(guān)系，提示IL-10伴隨著肝纖維化的進(jìn)程，其具體作用機(jī)制有待進(jìn)一步深入研究。血清TGF-β1水平與肝纖四項(xiàng)呈直線正相關(guān)，其結(jié)果與報道相［8］一致，說明TGF-β1是參與ECM的合成與沉積的關(guān)鍵因子，提示TGF-β1與肝纖維化密切關(guān)系，能反映肝纖維化程度和肝硬化的形成。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果還表明，肝纖四項(xiàng)水平在HBV-DNA陽性患者中顯著高于陰性患者。乙肝病毒持續(xù)存在造成對肝臟的持續(xù)損害，則使HSC持續(xù)活化，促肝纖維化進(jìn)展。由此可見，抗病毒治療對于慢性病毒性肝炎患者來說是根本治療，既可以清除病毒，又可延緩肝硬化的形成。

細(xì)胞因子IFN-γ、IL-10、TGF-β1不僅與肝細(xì)胞的損傷有良好的相關(guān)性，而且與肝纖維化的形成密切相關(guān)。因此，測定乙肝病毒及細(xì)胞因子水平，在監(jiān)測慢性乙型肝炎疾病的發(fā)生發(fā)展、肝纖維化進(jìn)展程度以及評價治療療效及預(yù)后具有重要的實(shí)用價值。

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