褚新勇

（山東省濱州市濱城區(qū)里則街道辦事處，濱州 256600）

1 發(fā)病情況

2010年8月，濱州市某育肥豬場部分圈舍育肥豬連續(xù)出現(xiàn)死亡現(xiàn)象，原因不明，經(jīng)幾天治療，效果較差。據(jù)該養(yǎng)殖場場主李某介紹，2010年8月初，該場陸續(xù)從外地購進30 kg左右仔豬236頭，分別放在近30個圈舍內(nèi)飼養(yǎng)，從8月23日開始，有1個圈舍的豬開始發(fā)病，該場飼養(yǎng)員懷疑是血蟲病，就用血蟲康等藥物治療，但效果甚微，繼而有5個圈舍出現(xiàn)發(fā)病情況。發(fā)病3～5 d后開始出現(xiàn)死亡。截止2010年9月1日共發(fā)病87頭，死亡32頭。根據(jù)發(fā)病情況、臨床癥狀、剖檢病變和實驗室檢查結(jié)果，確診為豬瘟與豬鏈球菌病混合感染。

2 癥狀

病豬精神沉郁，常臥一處或閉目嗜睡，行動緩慢，頭尾下垂、拱背、喜歡堆在一起、食欲減少或停食，喜飲水，體溫升至41℃以上，持續(xù)不退；眼睛分泌物增多，眼結(jié)膜潮紅，眼瞼水腫；下腹部、耳根、嘴唇等處出現(xiàn)紫紅色斑點；病初排糞困難，不久出現(xiàn)腹瀉，糞便呈灰黃色；公豬包皮內(nèi)積有尿液，擠壓流出灰白色惡臭液體；第5d病豬開始出現(xiàn)關(guān)節(jié)腫脹，跛行，站立不穩(wěn)；呼吸快而淺表，有漿液性粘液性鼻汁流出，繼而有的出現(xiàn)神經(jīng)癥狀，運動失調(diào)、轉(zhuǎn)圈和空嚼，仰臥于地，四肢游泳狀劃動。

3 病理變化

剖檢肉眼可見小血管變性引起的廣泛性出血、水腫、變性和壞死。耳根、下腹部、四肢內(nèi)側(cè)、皮下脂肪和肌肉等部位有出血點；支氣管、頸部、腸系膜和腹股溝等淋巴結(jié)腫呈多汁和充血或出血，外表紫黑色，切面呈大理石樣變；腎臟色澤變淡，皮質(zhì)有出血點；脾腫大，邊緣可見黑紅色的壞死呈踞齒狀；肝充血；膀胱粘膜有出血點；肺出血；咽部粘膜及會厭軟骨有大小不一的出血點；腦膜出血和充血，腦脊液增多和渾濁，腦實質(zhì)化膿，關(guān)節(jié)腫脹，充血，滑液增多，周圍組織有多發(fā)性化膿灶。

根據(jù)發(fā)病情況，臨床癥狀和病理剖檢變化初步診斷為豬瘟繼發(fā)豬鏈球菌感染。

4 實驗室診斷

4.1 涂片鏡檢

取病死豬的心血、肝臟、脾臟涂片，將抹片置于空氣中自然干燥；火焰固定，革蘭氏染色，鏡檢觀察?？梢姵呻p和鏈狀排列的革蘭氏陽性球菌，具有鏈球菌的形態(tài)特征。

4.2 病原分離鑒定

病料采自發(fā)病豬場病死豬，并將其中的病死豬6頭和血清10份送山東省畜牧獸醫(yī)職業(yè)學院動物預(yù)防醫(yī)學實驗室進行診斷。

4.2.1 分離培養(yǎng)形態(tài) 取純培養(yǎng)物，分別將其接種于各種球菌鑒定生化管內(nèi)，37℃培養(yǎng)24h，觀察記錄變化情況。在普通營養(yǎng)瓊脂平板上，生長不良。接種在全血瓊脂平板和血清瓊脂平板上，菌落小的呈無色透明，大的略呈淡灰色。菌落出現(xiàn)明顯透明的溶血環(huán)。血清肉湯培養(yǎng)24h呈均勻渾濁，管底有少量絮狀沉淀，不形成菌膜或菌環(huán)，繼續(xù)培養(yǎng)1 d后，菌體下沉，肉湯變清朗。具有鏈球菌的培養(yǎng)特性。

4.2.2 培養(yǎng)物涂片染色 培養(yǎng)勿涂片革蘭氏染色鏡檢，其形態(tài)特征同4.2.1。

4.2.3 運動性觀察 純培養(yǎng)物穿刺血清半固體培養(yǎng)基，置37℃恒溫箱中培養(yǎng)24 h，該菌沿穿刺線生長，說明本菌無鞭毛，不能運動。

4.2.4 動物接種試驗 無菌操作剪取小塊肝、脾病料，置無菌研缽中研磨，用生理鹽水10倍稀釋，紗布過濾備用。同時將分離純化的菌株接種于血清肉湯培養(yǎng)基中，置37℃恒溫箱中培養(yǎng)24 h備用。取健康小白鼠12只，隨機分為試驗Ⅰ組、試驗Ⅱ組和對照組，每組4只。試驗Ⅰ組每只腹腔注射組織懸液0.2 ml；試驗Ⅱ組每只腹腔注射含菌肉湯0.2 ml，對照組腹腔注射同劑量的無菌血清肉湯。觀察小白鼠發(fā)病死亡情況。將死亡小白鼠心血、肝組織接種于血液培養(yǎng)基，37℃恒溫箱中培養(yǎng)24 h后，涂片、革蘭氏染色鏡檢，觀察是否為接種菌株。試驗組8只小白鼠于24～48 h死亡。剖檢后取肝、脾涂片，革蘭氏染色鏡檢，均見到與死豬病料涂片一致的革蘭氏陽性、成對或呈鏈狀排列的鏈球菌。

4.2.5 熒光抗體試驗（FA）結(jié)果 取病豬的扁桃體、淋巴結(jié)、脾觸片，置室溫干燥，滴加冷丙酮數(shù)滴，置-20℃定15～20 min。用磷酸鹽緩沖液（PBS）洗，陰干。滴加標記熒光抗體，置37℃飽和濕度箱盒內(nèi)作用30 min。用pH7.2的PBS漂洗3次，每次5～10 min。干后滴加甘油緩沖液，加蓋玻片封閉，用熒光顯微鏡檢查?？梢娂毎麧{內(nèi)有彌漫性、絮狀或點狀的亮黃綠色熒光，證明有豬瘟病毒存在。健康豬組織觸片熒光抗體染色鏡檢無熒光出現(xiàn)。

4.2.6 兔體交互免疫試驗結(jié)果 將健康家兔4只，隨機分為實驗組和對照組，每組2只；試驗前3 d測溫，3次/d，間隔8h，體溫應(yīng)正常。

取新鮮病死豬的脾組織1∶10滅菌生理鹽水懸液，離心取上清液，加青鏈霉素、鏈霉素各1 000 U/ml處理后，4℃過夜，試驗組每只家兔肌肉注射脾組織懸液上清液5ml，繼續(xù)測溫，每隔6h 1次，連續(xù)3 d。

觀察7 d后再與對照兔分別靜脈注射1∶20豬瘟兔化弱毒疫苗，接種后24 h開始測溫，6 h 1次，連測3 d，記錄每只兔的體溫變化情況。選擇體重1.5 kg左右的試驗兔4只，接種正常脾組織病料懸液的家兔體溫均升到41～41.5℃，并持續(xù)48 h。而對照組體溫不升高。試驗結(jié)果證明，接種的脾組織病樣中含有豬瘟病毒。

4.2.7 正向間接血凝試驗（IHA）結(jié)果 其操作方法和判定標準，均按《豬瘟正向間接血凝診斷試劑使用說明書》進行。10份待撿血清檢結(jié)果，7份抗體水平在1∶8以下，說明該豬群豬抗體已不能抵抗豬瘟病毒的侵襲。2份抗體水平在1∶256，1份抗體水平在1∶1 024。豬瘟抗體效價離散度較大，說明有豬瘟野毒（強毒）感染。

3 治療

3.1 藥敏試驗結(jié)果

分離菌株對頭孢曲松、左氧氟沙星、丁胺卡那霉素高敏；對青霉素G、氨芐青霉素、氟苯尼考、安普霉素中度敏；對恩諾沙星、環(huán)丙沙星、痢菌凈、慶大霉素等產(chǎn)生了廣泛的耐藥。

3.2 臨床治療試驗結(jié)果

全群用豬瘟兔化弱毒苗緊急免疫接種，豬瘟疫苗5頭份/只；病豬肌肉注射頭孢曲松鈉制劑，2次/d，連用4～5d。全群用左氧氟沙星拌料飼喂。并注意消毒和加強飼養(yǎng)管理。經(jīng)上述處理，疫情在第6 d已經(jīng)得到有效控制。

4 討論

（1）通過臨床診斷與實驗室診斷結(jié)果表明，本次疫病為豬瘟病毒和鏈球菌病混合感染。本次疫病的發(fā)生，主要是由于引進生豬時未進行嚴格檢疫，將外疫帶入，因此提示養(yǎng)殖戶從外地引進牲畜時，必須從非疫區(qū)引進，且具備產(chǎn)地檢疫證明，在與本地畜群混群前應(yīng)先隔離飼養(yǎng)1個月，確認健康后方可混群，同時要按照免疫程序，進行疫病的免疫接種。有條件的豬場應(yīng)堅持自繁自養(yǎng)。

（2）該病發(fā)生后應(yīng)首先對全群緊急接種豬瘟兔化弱毒苗。對于混合感染細菌的，最好通過藥敏試驗來選擇敏感藥物進行治療。同時隔離病豬，對病死豬一律采取焚燒或深埋處理，對污染的欄舍、地面通道、用具等用火堿水、菌毒殺嚴格消毒，殺死病原微生物。

（3）豬瘟與鏈球菌混合感染多表現(xiàn)為急性，發(fā)病快、病程短、死亡率高，一旦發(fā)病，將帶來很大的經(jīng)濟損失。因此，規(guī)模化豬場必須建立健全獸醫(yī)衛(wèi)生防疫制度，嚴格控制、監(jiān)督執(zhí)行。預(yù)防接種不是萬能的，一定要結(jié)合搞好環(huán)境衛(wèi)生、嚴格消毒、藥物預(yù)防等綜合防治措施，才能避免疫病的侵入。